构建Wistar大鼠蛛网膜下腔出血模型
Chin J Nerv Ment Dis Vo1.38.No.3 March 2012
改良“二次枕大池注血法”构建 Wistar大鼠蛛网
膜下腔出血模型☆
马朝晖 李贵福 罗望池 黄燕” 李铁林
【摘要】 目的 总结大鼠“二次枕大池注血法”构建蛛网膜下腔出血模型的经验体会。方法 通过对“二次
枕大池注血法”进行步骤简化及改良:①省去穿刺环枕膜、抽取脑脊液步骤;②不必完全显露环枕膜。通过断头
取脑后直接观察判断建模是否成功。结果 术中死亡大 鼠 14只,成功复制蛛网膜下腔出血模型大鼠 120只
(89.6...
Chin J Nerv Ment Dis Vo1.38.No.3 March 2012
改良“二次枕大池注血法”构建 Wistar大鼠蛛网
膜下腔出血模型☆
马朝晖 李贵福 罗望池 黄燕” 李铁林
【摘要】 目的 总结大鼠“二次枕大池注血法”构建蛛网膜下腔出血模型的经验体会。方法 通过对“二次
枕大池注血法”进行步骤简化及改良:①省去穿刺环枕膜、抽取脑脊液步骤;②不必完全显露环枕膜。通过断头
取脑后直接观察判断建模是否成功。结果 术中死亡大 鼠 14只,成功复制蛛网膜下腔出血模型大鼠 120只
(89.6%)。术后 35只模型大鼠出现意识改变 、肢体偏瘫等神经功能缺损症状(29%)。结论 改良的“二次枕大池
注血”法建蛛网膜下腔出血模型具有较高的成功率 ,控制穿刺进针角度及深度,控制注血量和注血速度,防止堵
管是造模成功的关键。
【关键词】 大鼠 蛛网膜下腔出血 模型
【中图分类号】 R651 【文献标识码】 A
自发性蛛网膜下腔出血是临床神经科常见的
重症,有很高的致死率和致残率,故其是基础及临
床研究的热点。“二次枕大池注血”构建蛛网膜下
腔出血模型是 目前最为认可的造模方式。因研究
需要,我们采用 Wistar大鼠进行 “二次枕大池注
血”构建蛛网膜下腔出血模型 134例.取得了一定
的经验,并对造模步骤进行了简化,现汇报如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象 SPF级 Wistar大 白鼠 134只,雌
雄各半.鼠龄 10 12周。体质量250~320 g。由南
方医科大学实验动物中心提供。主要器械:PSMB
双目动物手术显微镜(物镜 F200),显微手术器械
1套(主要包括显微剪 1把,直钳及弯钳各 1把),
眼科直剪和弯剪各 1把,普通小弯钳 2把,动物手
术固定板 1快 。20cm长线绳 4根。
1.2 “二次枕大池注血”建模方法 10%水合氯醛
(3 mL/kg)腹腔注射麻醉后,大鼠头部及左侧股动
脉区备皮。常规消毒,取俯卧位,以枕外隆凸为中
doi:10.3969/j.issn.1002—0152.2012.03.012
☆ 广 州 中 医 药 大 学 博 士 后 科 学 研 究 资 助 项 目 (编 号 :
BBK429112K06):广东省财政厅专项经费(编号:粤财社 2010—5)
广东省中医院脑病三科(广州 510120)
。 通讯作者(E—mail:gdszyyhy@163.corn)
点取约 1.0 am直切 口,分离皮下筋膜,从前向后正
中纵行剪开浅层肌肉约 8 mm,暴露颈夹肌间隙,小
弯钳牵开双侧夹肌,显微剪稍进行分离,并初步定位
枕骨、环椎及环枕膜 ,随后大鼠改仰卧位,手术显微
镜下暴露一侧股动脉。用 1 mL注射器抽取股动脉
血 0-3~0.4 mL,棉签压迫股动脉止血良好后,改俯
卧位.小弯钳牵开双侧夹肌,用注射器针头沿枕骨下
滑至枕骨大孔处刺破环枕膜并稍稍推进到达枕大
池.在 2 rain内将血液注入枕大池;注血后环枕膜穿
刺处填塞明胶海绵一块,俯卧位头低 30。约 30 min。
以利血液沉积在脑底血管周围,缝合头部及股部切
口。48 h后同法抽取另一侧股动脉血 0.2~0-3 mL
(1 mL/kg)注入枕大池,制成大鼠SAH动物模型。
1.3 造模成功判定
在进行第 2次注血时可
发现大部分大鼠均存在少量血性脑脊液漏出,可
证实穿刺位置在蛛网膜下腔 ;因实验需要造模动
物均需进行心脏心脏生理盐水及 4%多聚甲醛灌
注后断头取脑,在取脑时可见脑底基底池均可见明
显蛛网膜下腔出血。
2 结果
术中死亡大鼠 14只,成功复制蛛网膜下腔出血
模型大鼠 120只(89.6%)。术后 35只(29%)模型大
鼠出现意识改变、肢体偏瘫等神经功能缺损症状。
见图 1。
时顺畅,无明显阻力 ,如果阻力较大 ,而且大鼠突
然出现呼吸心率改变 ,可能损伤了脑干,如单纯阻
力大,考虑血栓堵塞可能,应予以更换,或者清除
血栓。②注血的量和速度。注血的量目前无统一标
准 .Takata第一次注射采用 0.5 mL,第二次注射
0.3 mL[5]
,吴氏报道采用 0.2mL[9 J,Germano采用
0.4 mL[1o]。注血的量与发生脑血管痉挛的有明显的
相关性,但注血量多容易造成大鼠死亡导致造模
失败。在本组实验中后期,我们采取 1 mL/kg的注
血量,明显比预实验降低了死亡率,而能达到同样
效果。注血的速度至为关键,太快可引起大鼠立即
死亡,太慢容易导致血栓形成以致堵管。建议以
0.15 mL/min的速度(默数 1~20后注射 0.05 mE)。
③防止血栓形成堵管。血栓形成既可以造成堵管,
亦可浪费采集的血液,故采血及止血应尽快完成。
在采完血后 ,由助手迅速用棉签压迫穿刺口止血,
术者同时解开大鼠的绑缚 ,压迫 2 min左右,穿刺
口无渗血后。填塞明胶海绵一块。如为缩减时间,
可在棉签压迫同时。以纱块制成棉垫覆盖在棉签上
加压,迅速将大鼠改成俯卧位,然后再穿刺注血。
即使如此,血栓形成仍难以避免,故在采血时,可
适当比预定血量多采 0.1~0.2 mL。堵管时,退出
注射器及针头 ,检查血栓位置 ,并清除血栓 ,然后
再进行穿刺,如反复堵管,可反复清除 ,必要时更
换针头。切不可堵管时盲目加压注射 ,造成注射器
的不可控制而刺伤脑干。
由于蛛网膜下腔出血的高致死率和致残率同
样在实验动物身上也会出现,故从动物实验伦理
而言,术者应尽可能的降低手术创伤,提高建模的
成功率。
Chin J Nerv Ment Dis Vo1.38,No.3 March 2012
参 考 文 献
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(收稿日期 :201l—O8—28)
(责任编辑:甘章平)
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