生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷下载_在线阅读_7

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生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷第!"卷第#期第B#页 %&&$年 %月 !!!! 华中科技大学学报 !医学版" ’()*+,-./012(03,(4/5678*945/: !!!! ;56"含量的生物发光方法#并利用该方法检测红细胞和不同再灌注处理心肌细胞内’3>的含量$方法!制备所需测定的细胞’3>提取液#采用荧光素I荧光素酶检测系统检测’3>含量#’3>的含量与系统中所发射的光子数成正比#发光强度越大#’3>含量越高#通过检测发光强度计算’3>的含量$结果!通过对红细胞内’3>含量的测定#确定了测定细胞内’3>的最佳反应条件%G7‘A...

第!"卷第#期第B#页 %&&$年 %月 !!!! 华中科技大学学报 !医学版" ’()*+,-./012(03,(4/5678*945/: !!!! ;56"含量的生物发光方法#并利用该方法检测红细胞和不同再灌注处理心肌细胞内’3>的含量$方法!制备所需测定的细胞’3>提取液#采用荧光素I荧光素酶检测系统检测’3>含量#’3>的含量与系统中所发射的光子数成正比#发光强度越大#’3>含量越高#通过检测发光强度计算’3>的含量$结果!通过对红细胞内’3>含量的测定#确定了测定细胞内’3>的最佳反应条件%G7‘AKW#温度%&!%$\# 荧光素酶浓度!K&U:&U6$利用确定的最佳条件对各种不同处理的心肌细胞内’3>浓度进行了检测#’3>检测结果与心肌功能的实验观察结果符合$结论!生物发光方法测定 ’3>含量方法简单’结果可靠#可以在短时间内得到检测结果#是一种检测细胞内’3>的有效方法$ 关键词!三磷酸腺苷(!生物发光(!荧光素I荧光素酶中图法分类号!L""BKB# <*#’+N%5%/5’()(.1O46()/%)5$*5’()’)6%>>&P&’)-M’(>=H’)%&/%)/%;%50(+ 7*5h0*560/:#djY0/:##M458i0S*0"#$% K*2#0#9#"+,L*<0(+*)"*#$%5"6070*"#=7;++%+,!9M%071"$%#;#3+*.405"607$%8+%%"."#19$:;+*. -*0<"(20#/+,=70"*7"$*63"7;*+%+./#>9;$*?@AA@A 17&5$*/5!879%/5’:%!35F,)8G)4,@0568U0/,F(,/(,U,)45-5Q-,),()0/:’3>(5/(,/)E*)05/0/(,66F<;%50(+&!34,’3> (,66,P)E*()T*FGE,G*E,-*/-@R8F0/:)4,68(0Q,E*(,I60(0Q,E0/@0568U0/,F(,/(,FRF),U#)4,’3>(5/(,/)E*)05/T*F-,),(),-@R (58/)0/:)4,G45)5F)4*))4,FRF),U,U0)),-<’3>(5/(,/)E*)05/T*FG5F0)01,6RE,6*),-T0)4)4,G45)5F/8U@,E<34,F)E5/:,E 68U0/,F(,/(,-,),(),-#)4,40:4,E’3>(5/(,/)E*)05/T*F<<%&=>5&![G)0U*6T5ES(5/-0)05/T*F%G7AK%#),UG,E*)8E,%&!%$ \#68(0Q,E*F,(5/(,/)E*)05/!K&U:&U6<’3>(5/(,/)E*)05/F0/-0QQ,E,/))E,*),-E*)4,*E)(,66FT,E,-,),(),-8/-,E)4,5G)0U*6 (5/-0)05/<’3>(5/(,/)E*)05/F-,),(),-@R@0568U0/,F(,/(,U,)45-T,E,0/*((5E-T0)4)4,4,*E)Q8/()05/-,),()05/<6()/>=&’() @0568U0/,F(,/(,U,)45-0FE*G0-#F0UG6,*/-E,60*@6,)5-,),()(,66’3>(5/(,/)E*)05/< ?%@A($+&!*-,/5F0/,)E0G45FG4*),(!@0568U0/,F(,/(,(!68(0Q,E*F,I68(0Q,E0/ !!三磷酸腺苷 !’3>"是体内最重要的能量来源#在维持生物体的正常机能上有着无可替代的作用$迅速而准确地测定细胞内 ’3>#对于研究细胞乃至机体的生理活性和代谢过程都有非常重要的意义$ 本研究利用荧光素I荧光素酶反应系统#建立检测细胞内’3>含量的生物发光方法#用该法检测不同处理因素作用下的心肌细胞内 ’3>含量$ 并将细胞内’3>含量与心肌功能进行对比分析$ B!材料和方法 BCB!主要试剂与仪器 #K#K#!主要试剂%&K%U56&d3E0FI7D6缓冲液 G7AKW(&K#$U56&d甘氨酸I=*[7 缓冲液 !G7 AKW#含#&UU56&d +:2["##UU56&dHZ3’# 牛血清白蛋白#U:&U6"(#U56&d3E0FIHZ3’缓冲液#G7AKA$(#U56&d=*[7 溶液(荧光素I荧光素酶溶液!U:&U6!中科院上海植物生理研究所"$ #K#K%!仪器%dVYI#%$#发光仪 !瑞典"$ BC2!方法 #K%K#!红细胞 ’3>提取液的制备%肝素抗凝血以#]#比例加入到含淋巴细胞分离液的试管内# %&&&E&U0/离心%&U0/#移去上清液#取最下层的红细胞$准确吸取#&"6分离好的红细胞液#注入到含%U6红细胞稀释液的试管中#充分混匀# 用吸管吸取红细胞悬液#滴#注入计数池内计数$ 用C&\ 3E0FIHZ3’缓冲液和红细胞悬液以C]# 的比例混合#并在沸水中水浴#!#K$U0/#冷却后过滤即为’3>提取液!抽提液立即测定或冰箱保存待测 "最长存放期为B4#! #K%K%!心肌组织细胞的前处理$称取$&!W&U: 新鲜或在液氮中储存的心脏组织%迅速放入已加入 &K$U6&K!U56&d过氯酸的研钵中%研磨!U0/! 将匀碎的组织液放入预冷的离心管中%再用少量 &K!U56&d过氯酸液洗涤研钵%合并此液%在水溶液中放置AU0/%a"\!&&&E&U0/离心$U0/% 将上清倾入另一干净离心管中%用 &K$ U56&d V[7调 G7 为 AKB!AKW%!&&&E&U0/离心 $ U0/%取上清液 "即为 ’3>提取液#测定!如不立即测定%可放置&!"\中保存%B4内测量! #K%K!!标准曲线$称取标准 ’3>B&K$%U:%配制#&U6’3>工作液 "#&a%U56&d#%然后用3E0FI 7D6缓冲液逐级稀释成#&a$’#&aB’#&aA’#&aW’ #&aC’#&a#&’#&a##’#&a#% U56&d 浓度的标准溶液!取新配制的上述不同浓度的 ’3>工作液各 %&&"6%放入测试管内%将测试管放入生物化学发光测量室内%加入&KWU6荧光素酶溶液%以BF发光强度积分值的对数为纵坐标%’3>浓度的对数为横坐标%制作工作曲线图!所得标准曲线为$ N‘&KA"#OcWKWBC%P%‘&KCC#% #K%K"!’3>的测量$将提取液用 3E0FI7D6缓冲液稀释#&&倍%取稀释液%&&"6%放入测试管内% 将测试管放入生物化学发光测量室内%加入&KW U6荧光素酶溶液%启动化学发光反应%仪器自动控制温度%自动完成 ’3>操作程序%取BF发光强度积分值%根据标准曲线计算出样品 ’3>的含量! #K%K$!不同灌注液对缺血再灌注的大鼠实验$实验用健康雄性 X0F)*E大鼠 "协和医院动物房提供# !%只%体重%W&!!%&:%结扎肺静脉插管建立离体大鼠工作心脏模型!根据不同停搏液随机分为" 组!组#$单纯应用"\2)K345U*F#号心停搏液 "232#%%&U6&S:%间隔!&U0/等量复灌!组%$ 同组#%但心脏以温血停搏液诱导停搏%U0/ "%& U6&S:#%流量初!&F为!!"U6&U0/%停搏后#K$ !%K& U6&U0/(复灌前再以温血停搏液灌注$ U0/%流量#K$!%K&U6&U0/%压力#K!!%KAS>*! 组!$同组%%但血液停搏液中含天门冬氨酸盐和谷氨酸盐各#!UU56&d!组"$仅在心脏工作第#& U0/时取缺血前心肌测量’3>的含量! #K%KB!心脏停搏后不同复灌液的大鼠实验$将"W 只2Z大鼠 "协和医院动物房提供#%参照 =,,6R 等)#*方法建立离体大鼠工作心脏模型%随机分为对照组$VI7液复灌(实验组$复灌初$U0/%VI7 液中含腺苷#"U56&d!两组均重复实验!次%分别于停搏前’停搏#%&U0/’复灌#&U0/及复灌 "$U0/终止%取心肌检测’3>含量! 以上两个动物实验同时观察心脏功能指标$心率’左室收缩压’左室压力微分’心输出量和冠脉流量! 所有数据以 "&CD2#

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示%均数间比较采用# 检验! 2!结果 2CB!反应条件的最优化为优化发光反应的条件%测定了红细胞 ’3> 含量%对可能影响发光检测的G7值’温度’酶浓度和发光检测时间分别进行研究%探讨最佳的反应条件%结果如表#所示! 表#!各种影响因素对发光强度的影响项!目相对发光强度 "Ld.# G7值 AK" &KWC AKB #K$# AKW %K#% WK& %K&! WK% #KB# WK" #K&% 温度 "\# #& #K#& %& %KB! !& %K"$ "& &KCW 酶浓度 "U:&U6# %K$ #KAA !K& %KB! !K$ %KBA "K& %K!" 由表#可知%测定细胞内 ’3>含量的最佳反应条件$G7‘AKW%温度为%&!%$\%酶浓度为 !K&U:&U6! 2C2!不同灌注液对缺血再灌注大鼠心肌细胞’3>含量的影响 !!根据上述实验建立的最佳反应条件%分别检测用不同大鼠建立的缺血再灌注模型%检测不同的灌注方法对大鼠心肌’3>含量的影响! 表%显示应用氨基酸盐可促进心脏功能恢复% ’3>含量增加而含水量减少%心肌保护效果显著好于未用氨基酸盐组! +%B+ 华中科技大学学报 "医学版#!!%&&$年%月第!"卷第#期表%!各组大鼠测定心肌’3>含量结果 !"U56":# &CD2#*QW$ 组别缺血#$&U0/ 复灌工作!&U0/ # #K"!_&K"$ #K%A_&K!B % #KW!_&K$$ #K"%_&K!C ! %K#&_&KA"" #KW"_&K$A" !!!!与#组比较!"!$&K&$ 2CD!大鼠心脏停搏后不同复灌液对大鼠心肌’3>含量的影响 !!结果见表!! 表!!心肌’3>含量的变化 !"U56":#&CD2# *‘%"$ 组别停搏前停搏#%&U0/ 复灌#&U0/ 复灌"$U0/ 对照组 !KWC_&K%$ !K%%_&K%#) !K&B_&K#B) %KBA_&K#$) 实验组 !KC#_&K%W !K%&_&K%#) !KA#_&K!#"*!KW%_&K%B* !!与停搏前比较!"!$&K&$!!)!$&K&#"与对照组比较 *!$&K&# 表!显示实验组再灌"$U0/"心肌 ’3>含量明显回升!提示复灌早期"腺苷通过改善心肌灌注"增加’3>生成等对缺血再灌注心肌发挥保护作用! 同时观察心脏功能指标"结果显示"单纯加 VI7复灌液和345U*F#停搏液 #表!对照组和表 %组#$心率%左室收缩压%左室压力微分%心输出量和冠脉流量$个指标中灌注前和灌注后比较差异有显著性意义 #!$&K&$$"VI7 停搏液加氨基酸盐 #表%组!$和腺苷 #表!实验组$灌注前和灌注后比较差异有极显著性意义 #!$&K&#$"和 ’3>含量的变化相一致! D!讨论三磷酸腺苷 #*-,/5F0/,)E0G45FG4*),"’3>$ 是一切生物体新陈代谢的能量源泉"它普遍存在于一切生物细胞内"为细胞内各种需能过程提供能量"是细胞生存的必须因素!传统的 ’3>测定法包括高压液相法%放射性同位素方法等!高压液相法繁琐且昂贵"检测时间需要!&U0/以上"不能直接测定 ’3> 的含量"灵敏度仅为毫摩尔 #UU56$级!同位素方法的灵敏度高"但污染大" 需要严格的防护和废弃物处理过程"不适合大量使用!生物化学发光法"利用荧光素I荧光素酶反应系统特异地测定 ’3>"方法简便%灵敏度高%特异性好%所需样品量少&%’"理论上灵敏度可达 #&a#WU56(d"比普通方法高A!W个数量级! ’3>是荧光素酶的底物之一"在荧光素I荧光素酶I’3> 生物发光体系中"发光强度 #K$与 ’3>的浓度 #8’3>$符合下列函数关系! K‘KU*P)8’3>(VUc8’3> #式中KU*P为最大发光强度"VU‘#b#&a"$" 由上式可知"当8’3>$VU 时"K正比于样品中的 8’3>"因此可以通过发光体系K 的测定来定量 ’3>的浓度! 生物发光测定’3>是一个酶促反应"主要有几个影响因素*G7"温度%酶浓度和发光测定时间"G7对生物化学发光反应影响较大!一方面 G7值直接影响酶的活性"且不同的荧光素I荧光素酶要求不同的最适G7值+另一方面"G7值直接影响反应过程中激发态分子的结构"从而影响光子发射效率!一般来说发光反应的发光强度随温度下降而增加"但由于生物化学发光反应是酶促反应" 温度太低则影响酶的活性!我们探讨了荧光素I荧光素酶I’3>发光反应的最适温度!当温度为%&! %$\时"发光反应有最大的发光强度"实验中可由仪器自动控制为 #%&K&_&K#$\! 作为一个平衡反应"需要有合适的酶和底物浓度!酶的浓度太低"影响酶促反应的进行"但酶的浓度太高"过量的酶蛋白对发光反应有抑制作用! 本实验显示"当酶浓度为!K&!!K$U:(U6时"发光反应有最大发光强度! 发光反应是一个连续的过程"检测时间对结果有决定性影响!对粗制荧光素酶的反应过程进行观察发现"粗制荧光素酶参与的发光反应"发光达高峰后立即衰减&!’"主要是粗制酶中含有较多的产物"对荧光素酶产生抑制作用和干扰作用!因此用粗酶测定只能用峰值或积分值计算!本实验用BF 发光强度的积分值来计算’3>含量! 本实验通过测定红细胞内的 ’3>含量"对利用生物发光方法测定细胞内’3>浓度的条件进行了优化"得到最佳的反应条件为*反应体系的最适 G7值为AKW"最适温度为%&!%$\"最佳酶浓度为!K&U:(U6"取BF发光强度的积分值计算’3> 含量&!!$’! 利用所建立的测定红细胞内 ’3>浓度的最佳工作条件"分别测定了不同组分的灌注液对不同种大鼠停搏和缺血再灌注心肌细胞内的 ’3>含量" 结果发现该方法可以有效测定不同处理条件下心肌细胞内’3>含量的变化"检测结果与临床实验观察结果符合"表明利用本方法检测细胞内 ’3>含量结果可靠!由于本方法简单可行"可用于细胞内 ’3>的常规检测! 生物体内的很多重要物质 #如 ’Z>%’+>% )!B)郝巧玲等<生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷 =3>等!都与’3>有关"可以通过直接或间接测定’3>的方法测定相关物质的含量#因此本方法的建立除了可检测细胞内’3>外"还可用于检测众多与’3>相关的物质#此外"由于 ’3>是活细胞体内的重要能量组分"死亡的细胞体内将不能测到’3>"因此通过测定细胞内’3>不仅可以观察细胞的状态"还可以对不同外界因素对细胞的效应进行观察"在生物学$医学$环境科学等领域都将有重要的应用价值# 参!考!文!献 #!=,,6ROL"d0,@,U,0F),E7"Y*)),EF@RHO"#$%KHQQ,()F5QGE,FI F8E,-,1,65GU,/)5/5PR:,/(5/F8UG)05/@R0F56*),-E*)4,*E)K ’UO>4RF056"#CBA"%#%%W&" %!=06FF5/dH"+560/["’/F,4/2KY0568U0/,F(,/)*FF*R5Q@*(I ),E0*6’3>Q5EE*G0--,),()05/5Q@*(),E0*6:E5T)40/(60/0(*6@655- (86)8E,FKOY0568U0/D4,U068U0/"#CWC"!%#&# !!吴健民K 临床化学自动化免疫分析K 北京%科学出版社" %&&&KAC!#&# "!d0Li"D*6F58>"O5/,FDO"#$%KJ/),E*()05/F5Q)4,)E*/F(E0GI )05/&Z=’E,G*0EQ*()5E3?JJ7*/-N>E,G*0EGE5),0/FT0)4Z=’ 6,F05/F0/*(,66IQE,,E,G*0E*FF*RKO+56Y056"#CCW"%W#%%## $!L,F/0(S2+"M,4/-,E’OKK*<0#(+ ’3>E,:,/,E*)05/QE5U G56RG45FG4*),*/-’+>@RG56RG45FG4*),%’+>G45FG45)E*/FI Q,E*F,*/-*-,/R6*),S0/*F,QE5U’(0/,)5@*(),Eg54/F5/00%#&’K ’GG6H/10E5/+0(E5@056"%&&&"BB%%&"$ !%&&!I&WI%B!收稿" !! !上接第$B页" 表!!两组围术期心率变化比较 !次"U0/#&CD2#*QB$ 组!别 D>Y前复跳!U0/ 复跳$U0/ 复跳#&U0/ 停机时停机后#$U0/ 对照组 #$#K$&_#CK!" 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3.吴健民临床化学自动化免疫分析 2000 4.Li R Y.Calsou P.Jones C J Interactions of the transcription/DNA repair factor TFIIH and XP repair proteins with DNA lesions in a cell-free repair assay 1998 5.Resnick S M.Zehnder A J In vitro ATP regeneration from polyphosphate and AMP by polyphosphate:AMP phosphotransferase and adenylate kinase from Acinetobacter johnsonii 210A 2000 相似文献(10条) 1.学位论文钱晓蕾三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌实体瘤化疗药物敏感性试验中的应用及肺耐药相关蛋白在卵巢癌中的表达 2001 目的:探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP法)在卵巢癌实体瘤化疗药物敏感性试验中的应用以及肺耐药相关蛋白(LRP)在铂类药物耐药中的作用及其与预后的关系.方法:1.采用ATP法,用Mutilabel Counter仪对19例新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测,并对患者进行三个化疗疗程的随访,以四唑蓝显示色反应药敏试验(MTT法)作为对照,分析其临床实用性.2.测定LRP在53例做过药物敏感试验的卵巢癌组织中的表达水平,分析其在耐药中的可能作用以及和卵巢癌预后的关系.结论:1.ATP法在检测方法、可靠性和临床符合率等方面优于MTT法,应用Mutilabel Counter仪进行ATP的检测更为简便、快速,值得推广和普及.2.LRP的表达水平和肿瘤分期、分化程度及化疗敏感性有一定关系,有可能成为筛选化疗药物、判断病人预后的指标. 2.期刊论文林玲.陈惠.郭广生.LIN Ling.CHEN Hui.GUO Guang-sheng 三磷酸腺苷生物发光法快速测定食品中细菌的含量 -分析试验室2009,28(7) 建立了测定食品中细菌三磷酸腺苷(ATP)的生物发光分析方法.生物发光原理基于萤光素酶、虫萤光素、氧气、ATP和Mg2+的催化氧化反应.产生的光信号强度与ATP含量成一定关系.考察了各种物理化学参数对反应的影响.反应体系最优化条件:pH 7.4、牛血清白蛋白(BSA)浓度为1.0 g/L和室温反应.方法检出限为1.0×10-12mol/L,线性范围1.0×10-9～1.0×10-11mol/L,分析时间30 min,批内变异和批间变异分别小于4%和5%.研究了部分食品中细菌检测的样品前处理方法,应用于糕点和饮料样品中细菌的测定,加标回收率范围为82.1%～115%.检测结果与传统培养方法检测结果相关性良好. 3.期刊论文余元龙.季明芳.李晓玲.胡泽民三磷酸腺苷生物发光法检测肝癌组织细胞对化疗药物敏感性的研究 - 中华肝脏病杂志2004,12(9) 采用三磷酸腺苷(ATP)生物发光法检测26例肝癌患者肝癌组织细胞对化疗药物的敏感性,现报道如下. 一、资料与方法 1.研究对象:(1)病例资料:收集2001年9月～2003年5月在中山市人民医院手术的肝癌患者肝癌组织标本,共26例,均为原发性肝癌.病理诊断:肝细胞癌25例、肝细胞胆管细胞混合癌1例.其中男21例,女5例,平均48.9岁,术前无化疗. 4.学位论文王志才三磷酸腺苷生物发光法监测肝移植术后免疫抑制的应用研究 2005 目的探讨个体化免疫抑制治疗的依据。方法应用三磷酸腺苷生物发光法(ATP-CVA)检测PHA刺激后CD4+细胞内ATP的浓度来反映细胞免疫功能。对50例正常健康人群和34例肝移植手术的病人(术前和术后1，2，4周)的全血样本进行细胞免疫功能检测。结果在ATP浓度为100-104ng/ml之间时，ATP标准品与荧光计数值呈线性关系，直线方程为Y=0.75X+2.37(r=0.99484)。移植受者的细胞免疫功能明显低于健康人群(p＜0.05)，免疫功能术后1周明显下降，然后呈现上升的趋势。结论 ATP-CVA可有效用于评估肝移植术后的细胞免疫功能，辅助血药浓度的监测，可能更有利于实施个体化免疫治疗。 5.期刊论文何保山.岳伟伟.罗金平.周爱玉.王蜜霞.蔡新霞.HE Bao-Shan.YUE Wei-Wei.LUO Jin-Ping.ZHOU Ai-Yu .WANG Mi-Xia.CAI Xin-Xia 基于生物发光的高灵敏度三磷酸腺苷检测研究 -分析化学2008,36(10) 在微生物检测和食品安全控制中需要对低浓度的三磷酸腺苷(ATP)做出快速准确的测定,基于ATP光学反应原理,设计了一种微量光学反应池,结合萤火虫素-萤火虫素酶发光技术,构建了一种用于现场检测的高灵敏度ATP光学传感器系统.传感器响应波长为550 nm,ATP生物发光反应适宜pH为7.8,在优化实验条件下,发光强度和ATP浓度在对数坐标下呈线性相关,检出限可达1×10-16 mol/L ATP,检测样品仅需30 μL,测量时间60 s.这种检测方法具有响应范围宽,测试简便,快速可靠等特点,适用于ATP现场快速检测,具有很好的应用前景. 6.期刊论文湛学军.谢大泽.胡银英.杨淑华.徐燕萍三磷酸腺苷生物发光法分析莪术油等中药抑制肝、胃癌细胞增殖活性的研究 -江西医药2005,40(11) 目的研究抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌细胞株SMMC7721、胃癌细胞株NKM45作用后的ATP水平,探讨药物对瘤细胞增殖活性的抑制作用.方法应用三磷酸腺苷生物发光法(ATP-BLA法)测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与肝、胃癌细胞作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶(5-FU)的作用进行比较.结果莪术油、华蟾素、龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明显下降(P＜0.05～P＜0.01);与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异(P＞0.05).结论应用ATP-BLA研究抗癌中药对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,对于筛选抗肿瘤药物具有广阔的应用前景. 7.学位论文楼江燕三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌体外化疗药物敏感试验中的应用 1997 该文探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP-CVA)作为卵巢癌体外化疗药物敏感性试验的可行性以及药敏结果与临床疗效的相关性,以期对卵巢癌化疗药物的筛选提供理论和临床依据.文中采用ATP-CVA方法,用液体闪烁计数仪对卵巢癌细胞株SKOV3和25份新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测,所有标本测定均设置平行三复孔,抑制率以加药组ATP比对照组ATP下降的百分率来的计算,抑制率>70%为高度敏感,50-70%对部分敏感,<50%为耐药.对20例卵巢癌患者进行了三个化疗疗程的随访.结果输入计算机用统计软件包进行处理.结论:ATP-CVA法是对细胞活性度进行定量检测,测定的结果反映了药物对癌细胞总体的作用 ,且极其敏感,所需细胞数量小,用以进行卵巢癌药敏试验是可行的.由于检测例数不多,尚需继续积累更多的临床资料. 8.期刊论文储德勇.李炜如.廖清奎三磷酸腺苷生物发光法在白血病细胞株K562化疗药物敏感实验中应用探讨 -儿科药学杂志2003,9(6) 目的:探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP-BLA法)在白血病细胞药敏实验中的可行性.方法:采用ATP-BLA法,用液体闪烁记数仪检测ATP标准品以及白血病细胞株K562在不同细胞浓度、药物浓度、培养时间下的荧光发光值.结果:ATP标准品浓度、K562细胞浓度的对数与荧光发光值的对数具极好的线性关系 (P＜0.001);药敏实验时,结束细胞培养的时间以第4 d为宜,药物浓度的选择以1×PPC为最佳.结论:ATP-BLA法在白血病药敏试验中是可行的,有一定的临床应用价值,值得进一步研究. 9.期刊论文楼江燕.彭芝兰.刘珊玲.王和.Lou Jiangyan.Peng Zhilan.Liu Shanling.Wang He 三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌体外化疗药物敏感试验中的应用 -华西医科大学学报2000,31(4) 为探讨新鲜卵巢癌标本化疗药物敏感试验结果与临床疗效的相关性,采用三磷酸腺苷生物发光法(ATP-CVA),用液闪计数仪对25份新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测.结果显示:在ATP浓度为10-9～10-5mol/ml时,ATP标准品与发光计数值呈一线性关系,Y=1.48X+15.03,相关系数为0.9963;所检测的25份标本中成功22份,试验的可评价率为88% ,其敏感性为85.7%(12/14),特异性为83.3%(5/6),阳性预测值为92.3%(12/13),阴性预测值为71.4%(5/7),总的预测准确率为85%(17/20).上述结果表明,本药敏试验结果的预测准确性较高,与临床疗效之间具有很好的相关性,值得进行更深入的研究. 10.学位论文治卿毛细管电泳与化学发光/生物发光联用技术用于单细胞分析 2007 单个细胞的分析化学正在形成, 它已成为分析化学前沿领域中的热门课题。单细胞分析将人们对生物微环境的认识提升到一个更深的更清晰的层次。比起常规细胞分析，单细胞分析注重细胞个体间的差异，可以检测到被平均结果所掩盖掉的重要生物信息，这在疾病早期的诊断和预防方面是非常重要的。而且对作为一个相对独立生物功能体的单细胞中的一些重要组分进行高效、灵敏地检测，将有助于阐明一些重要的细胞生理过程。在单细胞分析方法方面，高效液相色谱法以及80年代发展起来的开管液相色谱和毛细管电泳(CE)微柱分离方法由于质量检测限低、分离效率高, 已成功地用于单细胞多组分的定量检测。其中，由于CE进样量小, 可操作性强, 分离快速、高效, 因而它在单细胞的多组分分析中发挥着越来越重要的作用。到目前为止，在众多CE联用检测方法中，激光诱导荧光检测和电化学检测与CE联用方法成为主要的单细胞分析工具。但由于这两种方法仪器结构复杂，有时还需对无荧光或者无电活性的组分进行衍生，操作比较繁琐，所以有待人们探索新的用于单细胞分析的方法。CE-CL方法和CE-BL方法结合了CE的高效分离优势以及CL、BL检测方法的超高灵敏、简单易行等优势，将为单细胞分析提供新的分析方法的选择。本文探索了毛细管电泳与化学发光检测联用方法（CE-CL）以及毛细管电泳与生物发光检测联用方法（CE-BL）用于单细胞分析的可行性，用以为目前的单细胞分析提供两种新的分析方法，使人们可以从更多的侧面对目标细胞有所了解，从而更加清晰的掌握细胞的生命过程以及和细胞相关的生理过程。在本文中，选定具有重要生理以及临床意义的人体血红细胞作为单细胞分析的对象，首先探索了采用CE-CL方法对其内部重要的功能组分－血红蛋白（Hb）－进行定性定量分析的可行性： 1. 根据课题组以往的研究结果，选用具有超高检测灵敏度的鲁米诺－过氧化氢化学发光反应体系作为血红蛋白的检测体系。 2. 为了提高检测体系检测血红蛋白的灵敏度以达到可以检测单个血红细胞的水平，在CE-CL条件下，对检测体系中诸如检测模式、试剂混合模式、缓冲溶液pH值、反应试剂浓度以及检测位置等重要因素进行了优化。 3. 将人体血液直接稀释作为样品，应用优化好的实验条件对六个不同浓度的血红蛋白样品进行了分离检测并绘制了样品的标准曲线，线性范围在 1.7 mg mL-1 到 6.8 mg mL-1之间，线性系数为0.997，检测限达到0.17mg mL-1（大约2.2pg，S/N=3）。 4. 摸索对血红细胞的操作条件，简化细胞进样操作。在以往的单细胞分析中，细胞进样需要使用倒置生物显微镜甚至三维微操作器的辅助，虽然倒置生物显微镜可以为细胞分析提供更广阔的操作平台，但其价格也十分昂贵。发挥实验室现有资源的优势，使用一台普通生物显微镜以及自行设计的细胞进样器实现了单个血红细胞进样。这个方法简单、廉价而且省时，一般30s便可完成细胞进样。 5. 完成了若干单个血红细胞的进样以及检测，得到比较强烈的信号。为了进一步考察方法的可靠性，连续对26个单个血红细胞进样检测，将结果进行统计分析，得到这26个血红细胞中血红蛋白的平均含量是23.6pg，相对标准偏差（RSD）为21.5％。这是首次将CE-CL方法应用于单细胞分析。在成功实现CE-CL方法检测单细胞中血红蛋白的基础上，进一步探索了采用CE-BL方法对单个血红细胞中另一重要的功能组分－三磷酸腺苷（ATP）－进行定性定量分析的可行性： 1.采用专属性较强，检测灵敏度超高的荧光素酶生物发光反应体系作为ATP的检测体系。 2.首次将毛细管电泳与生物发光检测相联用。考虑到这个检测体系中相互作用因素较多，而且易受杂质干扰而被猝灭，所以首先我们对检测体系中诸如试剂中的含氧量，荧光素酶缓冲溶液体系的基底、pH值、流速以及荧光素酶缓冲溶液体系中不同阴离子对体系的猝灭作用、增强剂浓度等重要因素进行了系统的优化。 3.在优化好的CE-BL实验条件下，对不同浓度的ATP样品进行了进行了定量分析。得到样品的线性范围为1～50mM，线性相关系数为0.99988，迁移时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为3.1％和9.6％，检测限1％mM（约为10-14mol ，S/N=3）。 4.提取了血红细胞中的ATP并进样分析。从结果估算得到，得到的ATP检测限相当于100个左右血红细胞中ATP的含量。由于实验条件限制以及时间有限，未能继续深入研究以达到对一个血红细胞中ATP进行检测的水平。引证文献(12条) 1.唐倩倩.王剑平.盖玲.叶尊忠.应义斌 ATP生物发光法检测E.coliO157:H7的研究[期刊论文]-光谱学与光谱分析 2009(2) 2.舒伟军.田晓静.王俊基于生物超弱发光的稻谷霉变特性研究[期刊论文]-科技通报 2008(6) 3.徐卫平.邱龙翔.施素月.林村河公路运输对血液保存的影响[期刊论文]-中国输血杂志 2008(10) 4.刘成军.韦世秀.李牡艳.吴华.李佳荃中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响 [期刊论文]-时珍国医国药 2008(6) 5.唐倩倩.叶尊忠.王剑平.盖铃.应义斌.李雁斌 ATP生物发光法在微生物检验中的应用[期刊论文]-食品科学 2008(6) 6.朱孔锡.刘莉.张喜红.刘斌.王红娟.阎明线粒体DNA突变与大鼠乙醇性肝纤维化的关系[期刊论文]-毒理学杂志 2008(2) 7.李牡艳.韦世秀.刘成军.吴华.李佳荃金环蛇毒体外对人类小涎腺腺样囊性癌细胞的抑制作用[期刊论文]-广西医科大学学报 2007(4) 8.韦世秀.李牡艳.吴华.李佳荃中华眼镜蛇蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响[期刊论文]-山东医药 2007(23) 9.邱龙翔.徐卫平.林福地.施素月.吕灵杰高温高湿环境对运血箱的热传递影响[期刊论文]-中国输血杂志 2007(4) 10.韦世秀广西眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用[期刊论文]-中国现代医学杂志 2006(21) 11.韦世秀广西眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用[期刊论文]-中国现代医学杂志 2006(21) 12.刘成军.韦世秀.李牡艳.吴华.李佳荃眼镜蛇毒体外抗人类小涎腺腺样囊性癌细胞活性研究[期刊论文]-广西医科大学学报 2006(5) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_tjykdxxb200501017.aspx 授权使用：华中科技大学(wfhzkjd)，授权号：83fbfe1a-6c8a-44c7-b73a-9e3300a3edbe 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