复件 复件 重要的 野马追对左氧氟沙星在小鼠气管粘膜内浓度的影响

野马追对小鼠气管冲洗液中左氧氟沙星浓度的影响 张斯汉 周远大 何海霞 （重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室，重庆，400016） [摘要]目的：探讨野马追对小鼠气管冲洗液中左氧氟沙星浓度的影响 方法：50只小鼠随机分为空白、氯化铵、野马追大、中、小剂量组，每组10只，分别给予生理盐水30 mL/kg、氯化铵1.00 g/kg、野马追大剂量64.45g(生药)/kg、中剂量32.73 g(生药)/kg、小剂量16.36 g(生药)/kg后1小时，各组动物腹腔注射左氧氟沙星0.07g/kg，2小时后处死动物，收集小鼠气管冲洗液，高效液相色谱其中左氧氟沙星浓度。结果：野马追大、中、小剂量组小鼠气管冲洗液中的左氧氟沙星浓度分别约为空白组小鼠的4.58、3.18、1.86倍。结论：野马追能提高小鼠气管冲洗液中左氧氟沙星的浓度。 [关键词]：野马追；左氧氟沙星；小鼠；气管；浓度 [中国图书分类法分类号]R969.2 文献标识码 A The Effect of Yemazhui on Concentration of Levofloxacin in Rinse Solution of Mice Tracheae Zhang si-han,Zhou yuan-da,He hai-xia (Clinical pharmacology laboratory of the first affiliated hospital of Chongqing university of medical sciences, Chongqing, 400016) [Abstract] Aim :to study the effect of Yemazhui on concentration of levofloxacin in rinse solution of mice tracheae. METHODS：50 mice were randomly divided into blank group、amchlor group、Yemazhui large-dose group、Yemazhui middle-dose group、Yemazhui low- dose group,each group had 10 mice. After administration of liquor natrii chloridi isotonicus(NS) 30 mL/10kg、amchlor1.00 g/kg、Yemazhui large dose64.45 g(curde drug)/kg 、Yemazhui middle dose32.73 g(curde drug)/kg、Yemazhui low dose16.36 g(curde drug)/kg, mice were intraperitoneal injected Levofloxacin at dosage of 0.07 g/kg 2 hours after administration.The concentration of Levofloxacin in excretion of mice tracheae was detected by HPLC. Results:comparion with blank group, concentration of Levofloxacin in excretion of mice tracheae of Yemazhui large- dose group、Yemazhui middle-dose group、Yemazhui low-dose group was 4.58times、3.18times、1.86times the amout of that.Conclusion: Yemazhui can enhance concentration of Levofloxacin in rinse solution of mice tracheae. [KEY WORDS]：yemazhu; Levofloxacin; mice; tunica mucosa tracheae; concentration ( 野马追是菊科泽兰属植物轮叶泽兰Eupatorium lindleyanum DC的全草，多年生草本植物，分布于华东、华南、华北、东北及台湾等地，具有清热解毒、祛痰定喘、降血压的功效，用于治疗慢性气管炎、支气管炎、高血压病。野马追所含的有效成分包括：黄酮类（flavonoids），挥发油（aetherolea），生物碱（alkaloid）等[1]。左氧氟沙星是氟喹诺酮类广谱抗生素，其抗菌活性具有浓度依赖性[6]。本实验旨在探讨野马追是否能提高左氧氟沙星在小鼠气管粘膜表面的浓度，从而更好地发挥中西药结合的治疗作用。 1材料和方法 1.1 仪器 高效液相色谱，C-R7A PLUS型，SHIMADZU公司生产。色谱柱，GEMINI- C18柱（250 mm×4.6 mm，50μm）。酸度计PHS-3C，上海精密科学仪器有限公司。快速混合器VXH-3型，上海跃进医疗器械厂。离心机，B160A型医用低速离心机，河北省安新县白洋离心机厂。电子天平，BP61型，德国Sartorius公司。 1.2 受试药物和试剂 野马追由江苏安格集团提供浓缩液，经重庆市中药研究所提取后使用。左氧氟沙星，结晶粉末，上海友盛化工科技有限公司生产，批号990408。加替沙星，河南康泰制药集团，批号040925。二氯甲烷和甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。纯化水由重庆医科大学附属医院制剂室提供。 1.3 动物 健康合格一级昆明种小鼠60只，18-22 g，雌雄各半，由重庆医科大学动物实验中心提供，合格证号SCXK（渝）20020001。禁水不禁食12 h备用。 1.4色谱条件 色谱柱GEMINI-C18柱，250 mm×46 mm，50 μm。流动相[3]为0.01 mol/ mL磷酸二氢钾-甲醇-三乙胺（65：34.8：0.2），用磷酸调pH值到3.0，体积流量1.2 mL /min。检测波长292 mm。柱温30 ℃，进样量50 µL。 1.5样品制备 18—22 g昆明种小鼠60只，随机分5组，每组10只（剩余10只制备空白灌洗液）。参照文献[2] ，生理盐水组，氯化胺组，野马追大、中、小剂量组分别ig生理盐水30 mL /kg，氯化铵1.00 g/kg，野马追浓缩液65.45 g/kg、32.73 g/kg、16.36 g/kg（为其LD50 的1/5、1/10、1/20）。根据相关文献[6]，各组在给药1小时后ip 0.365%的左氧氟沙星溶液0.073 g/kg, 2h后处死小鼠。剪取气管,用 mL蒸馏水冲洗,收集冲洗液并加二氯甲烷4 mL萃取,同时加内标加替沙星100 µL（5 µg/mL），快速混匀1 min，然后置3500 r/min离心5min，静置分层。取二氯甲烷层清液，50 ℃水浴中氮气吹干，流动相复溶100 µL备用。 1.6方法学考察 1.6.1色谱行为（见图1） 1.6.2 标准曲线制备 精密称取左氧氟沙星标准对照品若干，加甲醇制成浓度分别为1.56、3.13、6.25、12.50、25.00、50.00 µg/mL的溶液，各进样50 µL。按上述色谱条件测定峰面积，以所取左氧氟沙星溶液浓度为横坐标，以左氧氟沙星和内标（加替沙星）峰面积之比为纵坐标，求得标准曲线：Y=0.482 1X-0.146 1,r=0.999 8,表明左氧氟沙星在0.16---50.00 µg/mL范围内有良好的线性关系。 图1 野马追对小鼠气管冲洗液中左氧氟沙星浓度的影响（色谱图）： Fig 1 The effect of Yemazhui on concentration of Levofloxacin in rinse solution of mice tracheae (chromatogram): 1-左氧氟沙星 2-加替沙星 1- Levofloxacin 2- Gatifloxacin A-空白灌洗液 B-左氧氟沙星+加替沙星(水中) C-实验组 A-Blank irrigating solusion ；B-Levofloxacin+Gatifloxacin(in water); C-experiment group 1.6.3精密度和回收率 精密称取左氧氟沙星标准品若干，加入空白气管冲洗液，按1.3项下相关操作，配成高、中、低三个浓度，每个浓度各进5针。测定其日间、日内差见精密度及回收率见表1： 表1 精密度和回收率(n=5) Table1 Precision and recovery(n=5) 加入量（µg/mL） 测得量（µg/mL） RSD 回收率 日内 日间 日内 日间 50.00 49.0±1.2 48.5±1.7 2.5% 3.4% 95.45% 12.50 12.1±0.5 12.2±0.5 3.9% 4.4% 93.66% 3.13 3.15±0.08 3.08±0.11 2.5% 3.6% 100.20% 2 结果 按上述方法所测得的左氧氟沙星在小鼠气管冲洗液中的浓度见表2 表2 左氧氟沙星在小鼠气管冲洗液中的浓度 Tab 2 Concentration of Levofloxacin in rinse solution of mice tracheae 组别 动物（只） 给药剂量（g/kg） 峰面积对内标的比值 浓度(µg/mL) 生理盐水 10 -------- 2.99±0.61 1.30±0.15 氯化铵 10 1.00 3.13±0.19 1.37±0.05 * 野马追小剂量 10 16.36 g/kg 5.33±0.47 2.42±0.08** 野马追中剂量 10 32.73 g/kg 8.87±1.36 4.13±0.51** 野马追大剂量 10 65.45 g/kg 12.64±2.73 5.95±1.17** 与生理盐水组比较，* P〈0.05 ，** P〈0.01。野马追大、中、小剂量组小鼠气管中的左氧氟沙星浓度分别约为空白组小鼠的4.58、3.18、1.86倍。野马追大、中、小剂量组之间也有显著性差异。 3 讨论 近年来，随着野马追产品在临床的广泛使用，人们对其各方面展开了全面和深入的研究，但较多的是在药效学方面。有文献研究了野马追镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗菌的作用[2]；研究了其一般药理学作用[4]；有文献指出野马追对豚鼠离体平滑肌有松弛作用[5]。但在野马追和其它药物的相互作用方面研究较少，本实验通过野马追对临床常用抗生素左氧氟沙星代谢的作用，主要研究了野马追对左氧氟沙星在小鼠气管分布的影响。左氧氟沙星是氧氟沙星的左旋体，具有广谱抗菌活性，对革兰氏阳性和阴性菌及其它微生物都有作用，能同时抑制细菌的DNA解螺旋酶和拓扑异构酶而抑制细菌繁殖[6]，在呼吸系统疾病中有广泛的用途。根据实验结果，野马追能显著提高小鼠气管冲洗液中左氧氟沙星的浓度，且有量效关系；其作用明显强于氯化铵。据相关文献[4]，两者在促进小鼠气管酚红分泌的实验中，氯化铵的效果要强于野马追，故可能两者促进左氧氟沙星在小鼠气管中的分布和促进酚红分泌的机制是不同的。原因可能是因为氯化铵促进酚红在小鼠气管的分泌是通过增强腺体的分泌，酚红在体内主要与白蛋白结合，通过此种方式分泌到气管中；而左氧氟沙星是小分子物质，蛋白结合率低，透过生物膜的方式主要是自由扩散，在气管粘膜的分布主要依赖局部血流。野马追促进左氧氟沙星在小鼠气管中分布的机制研究还有待进一步探讨。 Reference： [1]江苏新医学院.《中药学大辞典》（）[M].上海：上海科学技术出版社，1999;2130(4365) [2]周远大,吴妍等.野马追抗菌、止咳、平喘作用[J].《中国药房》. 2001;12(12),716-718. [3]张先洲,陈晓莉,韩世平.RP-HPLC法测定加替沙星浓度[J].中国药师.2002;7(9),715-716 [4]周远大,陈康等.野马追一般药理作用实验研究[J].中国药房.2005;16(2),94-96. [5]唐春萍，江涛，陈志燕.野马追对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响[J].中药药理与临床 2002;18(6), 30-32 [6]Katherine F.Croom and Caren L.Goa. Levofloxacin-A review of Its Use in the Treatment of Bacterier Infections in the United States[J].Drugs 2003;63(24);2769-2862 1 2 1 2 A B C ( 张斯汉（1976-）在读硕士，研究方向为临床药理学 _1199211275.unknown _1202800578.unknown