化学品+活性污泥呼吸抑制试验

化学品+活性污泥呼吸抑制试验 ICS (300;13(020(40 13 A 80 @冒 中华人民共和国国家 21796--2008GB,T 口 化学 口口 活性污泥呼吸抑制试验 Chemicals-- inhibition Activated test ，respiration sludge 1实施 2008-09-0 2008—05—12发布 丰瞀徽鬻瓣警矬瞥星发布中 19 国国家标准化管理委员会况 2 1796--2008 GB,T 昌 本标准等同采用经济合作与发展组织刖 (OECD)化学品测试导则No(209(1984年)《活性污泥呼吸抑 制试验》(英文版)。 本标准做了下列 编辑性修改: ——将计量单位改为我国法定计量单位。 251)提出并归口。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC,TC 本标准负责起草单 本标准参加起草单位:环境保护部南京环境科学研究所、中国检位:环境保护部化学品登记中心。 验检疫科学研究院、广东省微生物 研究所。 本标准主要起草人:刘纯新、卢玲、沈英娃、刘济宁、周军英、陈会明、梅承芳。 21796--2008GB,T 化学品 活性污泥呼吸抑制试验 1范围 本标准规定了化学品活性污泥呼吸抑制试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质 量控制、数据与报告。 本标准适用于大多数水溶性、低挥发性、易滞留于水体的物质;不适用于在氧作用下可 能发生磷酸 化而分解的物质。对于水溶性有限的受试物，可能无法测定半效应浓度。 本标准提供一种快速筛选方法，鉴定哪些物质可能对污水处理厂的好氧微生物产生不利影响，并为 生物降解试验提供相应的无抑制受试物浓度。 2术语和定义 下列术语和定义适用 于本标准。2(1 rate呼吸速率respiration 单位时间内污泥或污水中好氧微生物消耗的氧气量，通常以每小时每升污泥或污水消耗的氧气毫 克数表示[mg,(L?h)]。 2(2 effective 半数效应浓度median concentration，EC50 与对照组比较，引起微生物呼吸速率下降50,的受试物浓度。 3受试物信息 a)结构式; b) 纯度; c)水中溶 d)蒸汽解度; 压。 4方法概述 4(1原理 rain或3 h，测定好氧微生物呼吸速率。在相同的条 在活性污泥中加入一定量的合成污水，接触30 件下，测定试验系统中加入不同浓度受试物后同一活性污泥的呼吸速率。用占两个对照组呼吸速率均 s。值。值的百分数表示特定浓度受试物的抑制效应。由不同浓度的测定结果计算出EC 4(2参比物 本标准推荐3，5-二氯苯酚作为参比物。 43 活性污泥可能含有潜在致病生物，应(注意事项 小心处理。 5试验准备 5(1仪器和设备 a)测定装置，见图1(包括磁力搅拌器， ); b)曝气装置; 平底烧瓶1 21796--GB,T c)pH2008 计; d氧电极。 氧电极 平底烧瓶 搅拌碰于 注:该装置为非标准装置，但需确保试液装满烧瓶顶部，电极探头与烧瓶瓶颈紧密相配，隔绝瓶外空气。 图1测定装置 52 采用主要处理生活污水的污水处理厂的活性污泥作为接种物。污泥取回实验室后(微生物接种液 用自来水冲洗， 离心，倒出上清液。重复操作3次。取少量洗过的污泥称重、干燥，计算出试验所需污泥的量(湿重)。配制浓度为4 g,L+0(4 g,L的活性污泥混合悬浮液。若采集的活性污泥当天不使用，应在每升上述活 性污泥中加入50 20?2pH 合成污水，在??下曝气培养，使用前测定，必要时用碳酸氢钠溶液mL 调节pH值至6(0--8(0，并测定混合液中悬浮物含量。 5(3试验用水 曝气除氯 的自来水。 5(4合成污水配制 g蛋白胨、11 g牛肉膏、3 g尿素、0(7 分别称取16 g NaCl、0(4 g CaCl。?2H。O、0(2 g MgSO。?7HzO和2(8 gKzHPOt，用水溶解，定容至1 L。 6试验程序 6(1受试物贮备液 若受试物水溶解度大于1 L，得0(5 g,L，则称取0(5 g，用蒸馏水溶解并定容至1 g,L的贮备液。 否则，将受试物直接加入试验容器中，或者用有机溶剂配置贮备液。若使用有机溶剂，则该溶剂应对微 生物无明显的吸呼抑制或促进作用。此外，需增加含活性污泥和溶剂但不含受试物的对照。 6(2参比物配制 用10 raL的1 mol,L NaOH溶解0(5 3，5-二氯苯酚，用蒸馏水稀释到约30 mL，边振荡边加入 g 0(5 mot,L H:SOt直到刚刚出现沉淀，大约需要H。sn4 mL，最后用蒸馏水稀释到1 ，pH值为7,L 8。 6(3试验操作 受试物和参比物的3 接触试验可按下述步骤进行: h 准备一定数量的烧杯(如1 L的烧杯)。 试验开始时(o时刻)把16 raL合成污水加试验用水至300 mL，再加200 mL微生物接种液，混合为 500 mL，倒人第一个烧杯中，为对照组1(c，)。在20*(2?2?条件下，用洁静无油空气以0(5 L,rain, 1 L,min的速度曝气培养。 在15 rain时(15 rain的时间间隔是任意选定的)，在16 mL合成污水中加入100 mL受试物贮备 液，再加水至300 mL，然后再加200 mL微生物接种液，充分混合为500 mL。混合液倒人第二个烧杯 曝2 21796—GB,T 气培养。随后，每隔15 rain按此法制各试验液，受试物溶液用量根据浓度设计选定，从而得到一系2008 列不同浓度的受试物试验液。受试物至少设置5个浓度组，参比物最少设置3个浓度。最后制备对照 组2(Cz)。 3 h后，把C。试验液倒人测定装置，测定10 min的呼吸速率，也可直接在烧杯中测量。同法测定其 他处理液及c。。每批微生物接种液，都要按同样的方法用参比物溶液检验其活性。 如果试验周期为30 rain，试验体系可根据情况作相应改动。 7质量保证与质量控制 两组空白对照呼吸 15,。 速率差不高于 参比物3，5-二氯苯酚3 mg,L。h的Ecs。为5 mg,L,30 8数据与报告 8(1数据处理 可以根据仪所画的曲线在6(5 mg,L和2(5 mg,L之间计算呼吸速率，如果呼吸速率低，可 据10 rain以上的耗氧量计算，测定呼吸速率的呼吸作用曲线部分应为线性。 根 根据溶解氧测定值计算呼吸速率，为了计算受试物的抑制效应，将呼吸速率以两组空白对照呼吸速 率的百分比形式表达。见下式: R一1一R—』兰+LRc×1002q 式中: R——受试物呼吸抑制率，,; 足——受试物受试浓度的耗氧速率，单位为毫克每升小时Emg,(L?h)，以Oz计]; R。，——对照组1(c。)的耗氧速率，单位为毫克每 升小时[-rag,(L“)，以0。计]; R。。——对照组2(C:)的耗氧速率，单位为毫克每升小时Emg,(L(h)，以0z计j。 按上述公式计算每一试验浓度的抑制百分率，在对数一正态(或对数一概率)纸上绘制抑制百分率对 浓度的曲线，计算出EG。。 EC;。值的95,置信限可用标准程序计算求得。鉴于结果的可变性，推荐用量级大小表示试验结果，例如小于1 mg,L，1 mgL10 mg,L，10 mg,L,100mg,L等。 ,, 8(2结果报告 试验报告应包括 a)受试物: 以下内容: ——化学特性鉴别数据。 b)试验条件: ——接种物:状态和取样地点，浓度和预处理方式; ——试验周期与温度; ——受试物和参比物的ECs。; ——非生物耗氧量(若存在)。 c)结果: ——测量数据; ——呼吸抑制曲线和ECs。计算方法; ——EC5。(有条件，提供95,置信限)、ECz。和ECs。。 ——所有观测结果以及任何偏离本方法并可能影响试验结果的情况。 d)结果讨论。 GB,T 21796--2008 参考文献 r1] 147,SC 5,WC International Standard l，N53 No(D(1981)ISo,TC B(Broecker and R(Zahn，Water Research Ez2 11，165(1977)D(Brown。H(R(Hitz and 10，245(1981) E33 (Schaefer，Chemosphere L of Industries)and Association E43 Dyestuffs Manufacturing Toxicological ETDA(Ecological 117，80(1976)Es] B(Robra，Wasser,Abwasser E6] wScheferTextilveredlung (，6，247(1977)