GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析

GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析 目 录 中文摘要 ...........................................................................................................................1 英文摘要 ...........................................................................................................................2 1.选题背景 ..................................................................................... 错误～未定义签。3 1.1目前抗生素需求和生产的情况................................................ 错误～未定义书签。3 1. 2头孢类抗生素.......................................................................... 错误～未定义书签。4 1.3戊二酰-7-氨基头孢烷酸(GL-7-ACA) ...................................... 错误～未定义书签。6 1. 4基因组DNA的提取 ............................................................... 错误～未定义书签。6 1.5本课题的研究意义和前景 ....................................................... 错误～未定义书签。7 2.方案论证 ..................................................................................... 错误～未定义书签。7 2.1假单胞菌菌株的分离 ............................................................... 错误～未定义书签。7 2.2 DNA的提取 ............................................................................. 错误～未定义书签。8 3.过程论述 ..................................................................................... 错误～未定义书签。9 3.1实验材料 .................................................................................. 错误～未定义书签。9 3.1.1菌株材料来源 ........................................................................ 错误～未定义书签。9 3.1.2引物 ..................................................................................... 错误～未定义书签。10 3.1.3化学药品和酶 ...................................................................... 错误～未定义书签。10 3.1.4培养基的制备 ...................................................................... 错误～未定义书签。10 ................................................................................ 错误～未定义书签。10 3.2实验仪器 3.3实验步骤 ................................................................................ 错误～未定义书签。11 3.3.1菌株的获取 ......................................................................... 错误～未定义书签。11 3.3.2 菌株DNA的提取 .............................................................. 错误～未定义书签。11 3.3.4 DNA电泳检测 .................................................................... 错误～未定义书签。11 3.3.5 GL-7-ACA酰化酶基因的分离 ........................................... 错误～未定义书签。12 4.结果与讨论 ............................................................................... 错误～未定义书签。13 4.1结果与分析 ............................................................................ 错误～未定义书签。13 4.1.1基因组DNA的电泳检测与分析 ........................................ 错误～未定义书签。13 4.1.3 GL-7-ACA酰化酶基因——扩增基因的测序结果 ............ 错误～未定义书签。14 4.1.4 GL-7-ACA酰化酶基因——基因序列分析 ........................ 错误～未定义书签。15 4.2讨论 ........................................................................................ 错误～未定义书签。20 5总结 ........................................................................................... 错误～未定义书签。20 参考文献 ...........................................................................................................................3 致谢 ...................................................................................................................................4 GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析 GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析 甘小锋 (生命科学与工程学院 生物科学专业 200304班) 摘要:本文利用选择性培养基，从土壤中进行选择性菌种培养。采用革兰氏阴性细菌的基因组DNA的提取对获得的假单胞菌进行DNA提取，PCR扩增得到了目的条带，通过序列测定并用MAGE3.1进行比对分析得出该基因与已报道的Pseudomonas sp. THA1的戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶基因序列的同源性为 92%，与Pseudomonas sp. THA2的同源性为90%。并与之对应的推导氨基酸序列的同源性分别为99%和98%，同时与酶活有关的位点的氨基酸没有突变。 关键词:7-氨基头孢烷酸;酰化酶;基因分离;序列分析 第 1 页 共23 页 GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析 GL-7 - ACA Acylase Gene Isolation and Sequence Analysis Gan Xiaofeng (Class200304 Biology College of life and Engineering, HNU) Abstract: In this paper, the bacteria were obtained from soil through selective Medium. The genomic DNA was extracted after using the kit of bacteria DNA out. The purpose band was amplified after PCR. The sequence was analyzed with the software of MAGE 3.1.The obtained nucleotide sequence is homology with THA1 isolated from Pseudomonas sp. with a similarity of 92%. And a 90% similarity with THA2 isolated from Pseudomonas sp. The deduced amino acid sequences have a homology of between 99% and 98%. Meanwhile, the activity site of the deduced amino acids have no mutation after compared with THA1 and THA2. Key words: 7-amino acid cephalosporanic, Acylase, Gene isolation, Sequence analysis 第 2 页 共23 页 GL-7-ACA酰化酶基因的分离与序列分析 参考文献 [1] 金晓华. β-内酰胺类抗生素在医药市场的发展前景[J]. 商场现代化.2006.6:107. [2] 国外医药抗生素分册[M].2003.5(3):98,102. [3] 宋慈媛. 酶法生产7-ACA[J]. 化学医药工业信息,1995,11(6):25,31. [4] 王龙耀,童张法,雷爱祖. 7-氨基头抱烷酸生产现状与发展前景[J]. 化学与生物工程.2003增刊,17,21. [5] 罗晖,李强,童忆舟. 酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展[J],现代化工. 2002,12 22(12):18,22. [6] 于海军, 陈立功, 李阳. 过氧化氢对D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烯酸反应的影响[J].高校化学工程学报. 2006,2 20(1):79,85. [7] 陈少欣,吴文琼,刘 晨.等.三角酵母-氨基酸氧化酶的固定化研究[J].中国医药工业杂志.2003,34(2):69. [8] 宋慈媛.酶法生产7-ACA[J]. 化学医药工业信息,1995,11(6):25. [9] 李正化主编.药物化学[M]..北京人民卫生出版社(第3版),1994:359,418. [10] 郑虎.药物化学[M],2001.11(4):288. [11] 罗晖, 胡晓佳, 周航. 产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达[J ]. 生物学通报,2004: 31(4):38,42. [12] 郭新梅, 康冀川, 张杰. CTAB法在金黄色葡萄球菌DNA提取中的应用[J]. 山地农业生物学 报,2005,24(6):558,560. [13] Yang, Y., Yun, D., Guan, Y., Peng, H., Chen, J., He, Y. & Jiao, R. Cloning of GL-7-ACA acylase gene from Pseudomonas sp.130 and its expression in Escherichia coli.[J] Chin. J. 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