高能X射线照射对肺腺癌细胞A549表达βⅢ的影响

高能X射线照射对肺腺癌细胞A549表达βⅢ的影响 摘 要 目的探讨高能,射线照射对人肺腺癌细胞体外表达,一微管蛋白一，，，,,,,及蛋白的影响。 方法将人肺腺癌细胞,,,,置于,,,， ,,,,培养液中培养，分别接受,、,、,,,高能,线照射，照射后于,,,、,,, ,,,,,,法检测细胞,,一微管蛋白一，，，,,,,表达，同时细胞免疫组化法检测,,一微管蛋白一，，，表达情况。 结果照射后相同时间内，不同照射剂量,一微管蛋白一，，，,,,,(,)及蛋白(,)表达水平比较差异有显著性(,(,,,,(,,、,,(,,，？,,(,,,,,(,,，,,,(,,;,(,,,,,(,,、,,,(,,，？,,(,,”,,,,,(,,，,,,(,,);照射后不同时间，相同照射剂量，,一微管蛋白一，，，,,,,(,)及蛋白(,)表达水平比较差异有显著性(,(,一,(,,”,,一,(,,，,,,(,,;,(,,一, ,(,,”,,一,(,，,,,(,,，,(,,)。 结论肺腺癌细胞中,,一微管蛋白,，，，,,,,及蛋白表达水平随射线照射剂量和检测时间的不同而发生变化，推测其具有剂量依赖性和时间依赖性，这可能是临床肿瘤放疗后耐药的机制之一。 硕士研究生:殷红梅(肿瘤学) 导师:刘希光副教授关键词:,线;肺腺癌细胞;微管蛋白 ,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,??,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,?,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,,,;,,;,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,;,, ;,,,,( ,,,,,, ,;,,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,， , ,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,?,,,,,,, ,??,,, ,,,,,,,,, ,,,,;,,,,,,,, ,,,,, ,, ,，,，, ,,, , ,,(,,,,, ,,,,,,,,，,,,,, ;,,,, ,,,, ;,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,, ,, ,,,,,(，,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,—,,,,,,,—，，，,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,(,,,,,,,(，，，,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,,,( ,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,—,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,(,,,,,,,(，，，,,,,(,) ,,, ,,,,,,,(,) ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,(,(,:,,(,,、,,(,,，？,,(,,,,,(,,，,,,(,,;,(,,,,,(,,、,,,(,,，？,,(,,,’,,,,(,,，,,,(,, ,,,,,;,,,,,,)(,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,, ,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,(,，,，,，,,,),,,,,,, ,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,, ,,,,, ,,,,,,(,(,,,,(,,,一,(,,，,,,(,,;,(,,,， ,(,,,一,(,，,,,(,,、,(,,)( ,,,;,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,; ,,;,,,,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,(,,,,,,,—，，，,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,—,,,,,, ,—,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,, ,—,,,,,,,,，，， ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,(,, ,,,;,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,(,,,,,,,(, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,,,(,,,, ,,,,, ,,,, ,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,( ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,:,,, ,,,, ,,, ,,,,;,,, ,, ,,,,(,,—,,,,, ,,,,,, ,,,,,:,,,,,,;,,,, ,,,,,;,,;,,,, ;,,,,;,,,,,,,,(,(高能,线照射后对,,一微管蛋,，，， ,,,,表达的影响……………………………,第,章讨 论………………………………………………………………………………,结论…………………………………………………………………………………………… ,参考文………………………”, 献……………………………………………………………………………………,,附图…………………………………………………………………………………………”,,综 述……………………………………………………………………………………………………………………一, ,综述参考文 献………………………………………………………………………………?, ,致谢……………………………………………………………………………………………………………………。,,学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明……………………………………,, 青岛人学硕十学何论文 引言 放射线应用于科学研究和医学领域已经有,,,多年的历史，,线的发现是这个历史的起点。,,,,年居里夫妇成功分离出镭，并首次提出“放射性”的概念。,,,,年医生们开始试验用,线来治疗一些皮肤癌的病人，从此开创了放射治疗的历史。目前放射治疗是癌症治疗最有效的方式之一。,射线通过人体组织能产生电离作用、康普顿散射及生成电子对，由此可诱发出,系列生物效应。研究表明,射线对生物组织有破坏作用，尤其是对于分裂活动旺盛或,下在分裂的细胞，其破坏能力更强。体外基础研究中,射线的应用及取得的成果为肿瘤的临床治疗提供了依据。 临床及基础研究证实药物治疗肿瘤过程中，影响疗效的主要是肿瘤细胞对抗癌药的敏感性。影响化疗敏感性的因素己被广泛认识的除了多药耐药基因(,,,)、多药耐药相关蛋白(,,,)基因及它们产物表达的增加外，近年来的研究表明，细胞信号转导中相关因子的表达异常、肿瘤细胞,,,修复的异常及其他相关基因表达的异常与肿瘤细胞的耐药也密切相关。,微管蛋白及其同型的表达在肿瘤化疗敏感性的研究中涉及较多，特别是，,，型,微管蛋白(,一微管蛋白一,,,)表达量的增 加，成为紫杉类及长春瑞滨类药物耐药的重要因素。例如,,,,,,进行的研究中，对,,例接受,,,,,,,和紫杉醇,,,,方案化疗这的肿瘤组织标本进行,,一微管蛋白一，，，,低,,,,表达，研究显示接受,,化疗组,一微管蛋白一，，，低表达者的,,,较长 (,,,(,,)，在总生存期方面，两组中,一微管蛋白一，，，低表达者也趋于延长生存期。,,例接受,,;,,,,,,单药化疗的肿瘤标本进行,,,分析，结果显示,,一微管蛋白一，,,、,,,、,,,、,,,,,等的高表达与耐药相关，其中,一微管蛋白一，，，基因表达显示强烈相关性(,,,(,,,)。对,,例，,,,，,期,,,,,的肿瘤标本进行微管蛋白表达分析，患者接受以,,,为基础的化疗，总体有效率,,(,,。,一微管蛋白一，，的表达水平与与生存期无明显相关，,一微管蛋白一?高表达者的,,,(,,,(,,,)和,,(,,,(,,,)明显较短，,,,,,, ,一微管蛋白者的,,,较短(,,,(,,,)。但多因素分析仅显示,一微管蛋白一?，高表达者为,,,和,,预后差的独立预测因子。显示抗微管药物如长春瑞滨和紫杉醇等治疗高表达,一微管蛋,，,,的晚期,,,,,的有效率低，患者预后较差。但国内外关于放、化疗相关性的研究主要涉及一些化疗药物的放疗增敏作用，而高能,射线对肿瘤细胞的研究较少。以往研究证实，紫杉类化疗药，分别作用于中心体和纺锤体，缚合于,微管上，增加微管的多聚合度，促进微管的集合。体外研究中，紫杉类化疗药对各种人细胞株有放疗增敏作用，体内研究也说明有肿瘤增敏作用，主要是使对射线耐药的乏氧细胞再充氧，泰素帝对微管的亲和力较强，延长了药物在细胞内的蓄积，延长了半衰期，几乎可以杀死对放射线耐药的全部,期癌细胞。 , 本实验通过研究高能,射线对肺腺癌细胞,,,,表达,,一微管蛋白一，，，,,,,及蛋白的影响，从分子水平初步探讨放疗对化疗的影响，有利于进一步加深肿瘤综合治疗的理论深度，也为肿瘤的个体化治疗提供理论支持。 , 青岛人学硕，学位论文 第一章 材料和方法 ,(,细胞来源及培养方法 人肺腺癌细胞购自中科院上海细胞库。该细胞系的培养条件:使用含体积分数,(,,的新生牛血清的,,,， , ,,,培养基，在含体积分数,(,, ,,,、空气相对湿度,,,、温度为,,,,的二氧化碳培养箱中进行培养，每,”,天传代一次。 ,(,细胞照射方法 取对数生长期的,,,,细胞进行射线照射，照射源为,,,,,, ,,,,直线加速器，照射条件:,射线，,,, ;,,,,,,，照射剂量分别为,、,、,,,，照射野,,;,,,,;,大小。照射前由物理师测量剂量率，对培养瓶进行衰减校正。照射时，细胞培养瓶置于照射野中心。 ,(,细胞采集与观察指标 培养细胞随机为分假照组与照射组，将照射后的细胞又随机分两组，一组细胞用于细胞免疫组化测?一微管蛋白,，，，蛋白表达情况，另一组用于,,—,,,检测,一微管蛋白一，，， ,,,,表达情况。每一个时间点，每个观察指标设三个平行样本。细胞免疫组化组照射后继续放入培养箱中培养，,,小时、,,小时后行,,,,细胞免疫组化，,一微管蛋白一，,,蛋白表达情况;另一组照射后继续放入培养箱中培养，分别于,,小时、,,小时后行,,,,,,，记录,,一微管蛋白一，，， ,,,,表达情况。记录结果与未照射组,,小时、,,小时,一微管蛋白一?，蛋白及,,,,表达情况对比。 根据记录蛋白及,,,,表达情况，数据统计各组有无差异。 ,(,免疫组化结果判定 ,,,,操作步骤按试剂盒要求进行。以,,,代替一抗 作阴性对照，已知的阳性切片作阳性对照。染色结果采用双盲法阅片判断，,,,,,,,光学显微镜高倍镜下随机选择,个视野，每个视野记数,,,个细胞。,,一微管蛋白一?蛋白主要均匀的位于正常细胞和肿瘤细胞的胞质，呈黄色或棕黄色颗粒，以内皮细胞或神经细胞染色为阳性参考。染色强度,分为无染色，,分为强度至少相当于内皮细胞或神经细胞，,分以上的细胞为阳性细胞。样品含,,,,的阳性染色细 乱微管蛋白一?(一)即低表达，?, ,,阳性染色细胞为多一微管蛋白一?(，)即高表达。 , 第一章材料和方法 ,(,主要试剂及实验仪器 ,(,(,主要试剂 ,,,;试剂盒及,,,显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司):胎牛血清、,,,， ,,,,培养基(杭州四季青生物科技有限公司);多聚赖氨酸工作液(北京中衫金桥生物技术有限公司);,,,,,,试剂盒、,,,,,,,,,及逆转录试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司);,,,引物(上海生工生物工程有限公司合成)。 ,(,(,实验仪器 超净工作台，细胞培养箱，荧光纤维镜(只本,,,,,,, ,,一,型)，,,,,,,,电泳仪及成像系统，,,,,,,,, ,,,,,,,梯度,,,仪，,,,,,,,低温离心机，微波炉，水浴箱等。 ,(,实验过程 ,(,(,细胞爬片制作 ,(细胞免疫组化专用爬片置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗,,遍，再用三蒸水冲洗,遍，烘干后高压消毒，放入超净工作台，备用。 ,(专用爬片放入,(,,多聚赖氨酸工作液，室温,,分钟，无菌晾干。后放入十二孔板。 ,(经,线照射的各个剂量及假照组的,,,,细胞经胰酶消化、离心、弃上清、完全培养基重悬，以,(,,,,,,密度接种于十二孔板，,,,;细胞培养箱中分别放置,,小时、,,小时。 ,(,(, ,,,,免疫组化法 ,(取出十二孔板，用,,,漂洗爬片,次，每次,分钟。 ,(,,多聚甲醛固定爬片，室温下，,,分钟，用,,,漂洗,次，每次,分钟。 ,(,(,,,,,,,, ,一,,,室温孵育,,分钟，用,,,漂洗,次，每次,分钟。 ,(,,,,,,室温孵育,,分钟，用,,,漂洗,次，每次,分钟。 ,(试剂盒中山羊血清封闭，,,;,孵育，,,分钟。 , 青岛人学硕十学位论文 ,(甩干封闭液，加入一抗(,:,,,)(,,,稀释)，轻轻摇匀，阴性对照,,,代替一抗，,,;,，孵育,小时。 ,(,,,冲洗,次，每次,分钟;去,,,液，滴加试剂,，轻轻摇匀，室温放置,,分钟。 ,(,,,冲洗,次，每次,分钟;去,,,液，滴加试剂,，轻轻摇匀，室温放置,,分钟。 ，(,,,冲洗,次，每次,分钟:去,,,液，滴加,,,显色剂，观察,’,分钟，显微镜下控制时间。 ,(自来水冲洗;苏木素复染。 ,(脱水;透明:中型树胶封闭。 ,(,(, ,,,,,,法检测,一微管蛋白一，，， ,,,,表达情况 ,(照射前后的另一部分培养瓶的细胞,,小时、,,小时后如上法胰酶消化、离心、弃上清及重悬。 ,(用,,,,,,试剂盒提取细胞总,,,，以总,,,为模板，按逆转录试剂盒操作说明，合成;,,,。以,一肌动蛋白(,,,;,,,)为内参照。再以;,,,为模板，行,,,扩增， 上游引物: ,’,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,一,’，下游引物: ,’一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,’:,,,反应条件为:,,,,预变性,,,,,，,,,,变性,,,，,,”,退火,,,，,,”,延伸,,,共,,个循环。取,,虬,,,扩增产物在,,琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色。实验重复,次，,,,凝胶成像系统 扫描，并用,,,,,,,电脑软件进行光密度分析，以,一微管蛋白一，，，,,,,与,—,;,,, ,, ,,,产物吸光度(,)比值作为,一微管蛋白一，，，,,,,的相对含量。 ,(,统计学处理 所得数据采用,,,,,,(,及,,,,,(,统计软件进行统计分析。每个时间点照射前后,一微管蛋白一，，，蛋白及,,,,的变化情况用方差分析，两个时问点间比较用,检验。 , 第二章结果 第二章结果 ,(, 高能,线照射后对,一微管蛋白一，，，蛋白表达的影响 (,)高能,线照射后，,,小时、,,小时各个时间点内不同照射剂量，,,微管蛋白一，，，蛋白的表达差异有显著性(,,,,,(,,、,,,(,,，？,,(,,,,,(,,，,,,(,,)(见表,)。 (,)相同照射剂量，不同时间点，,一微管蛋白一，，,蛋白的表达差异有显著性 (,一,,(,,,一,(,，,,,(,,、,(,,)(见表,)。 表, 高能,射线对,,,,细胞表达,一微管蛋白一?蛋白阳性率表达的影响(,) 注:各个时间点组内比较，经过方差分析，得,,,,,(,,、,,,(,,，？,,(,,,,,(,,， ,,(,,,,(,,，差异有统计学意义;相同照射剂量，不同时间点间比较，,—,,一,(,，,,,(,,、,(,,，差异有统计学意义。 ,(,(高能,线照射后对,一微管蛋白一，，， ,,,,表达的影响 (,)能,线照射后，,,小时、,,小时各个时间点内不同照射剂量，,一微管蛋白一?，,,,,的表达差异有显著性(见表,)。 (,)相同照射剂量，不同时间点，,一微管蛋,〔，，,,,,的表达差异有显著性 ? (见表,)。 表,高能,射线对,,,,细胞表达,一微管蛋白咖陆麒，的影响(以,一微管蛋白—?,,,,;,,,比值表示) ,, 第二章讨论 第三章讨论 ,(,(放疗治疗在非小细胞肺癌治疗中的地位 肺癌是严重危害人民生命和健康的常见病，目前国内外肺癌的发病率和死亡率还在不断上升。肺癌在城市占男性恶性肿瘤死亡的,,(,,,，女性的,,,，均居首位。非小细胞肺癌(,,,,,)约占肺癌总数的,,,’,,,，临床上大多数患者确诊时属于中晚期，失去手术切除机会，因此放疗为其重要的治疗手段，文献资料显示:约,,(,,的患者在其治疗的不同时期需要接受放疗…。近年来，,,,,,的放射治疗取得了巨大进步，正电子发射断层扫描(,,,)用于诊断、分期及治疗靶区的勾画，三维适形放疗(,,一,,,,)、调强适形放疗(，,,,)及超高能射线放疗(,,,,)提高了放射治疗的增益比。 ,(,(放射治疗对肿瘤细胞及组织的影响 ,(,(,放射治疗加速肿瘤细胞的凋亡 熊建萍，陶庆松等瞳,应用,,,法分别检测,,,,;,,,,与,,,联用对,,,,细胞增殖的影响及联合,射线对,,,,细胞存活分数(,,)的影响，流式细胞术检测细胞凋亡，研究显示,,,,;,,,,与,,,联合可增强对,,,,人肺腺癌细胞的生长抑制效应;,,,,;,,,,与,射线联合时，可增加,,,,人肺腺癌细胞的凋亡率，增强其对放射的敏感性。,,,,,, ,,等口,通过对肿瘤细胞的放射敏感性的研究，指出，凋亡可明显增加放疗效。董丽华，许一多等,,以脂质体介导携有外源野生型,,,基因的辐射诱导表达载,,,,,,,,,,和,,,,,,,,，体外转染,,,,细胞，筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养，所表达的,,,,,,,,,和,,,,,,,,,分别接受不同,剂量射线照射，采用,,,,,法和流式细胞术检测稳定转染联合辐射对细胞凋亡和,,,、,;,一,和;,,,,,,一,蛋白表达变化的影响，研究显示:体外, ,,基因转染联合,射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多，凋亡相关蛋白,;,一,表达下调，,,,、;,,,,,,一,表达上调，具有显著的肿瘤抑制作用。,,,,, ,,,〕等研究提示细胞凋亡在正常情况下为生理性细胞死亡，但肿瘤细胞也可自发地凋亡，并且放疗可诱导肿瘤细胞凋亡。,,,,, ,等剧通过多放射引起肿瘤细胞凋亡及其与剂量的关系的研究提示，,,,以下的范围内，随着照射剂量增加，凋亡增加，但增加幅度较小，可能与瘤细胞中凋亡易感细胞比例有关，当这些凋亡易感细胞被杀灭即达到饱和后，在,定范围内再增加剂量并不能引起更多的凋亡。 , 青岛人学硕十学位论文 ,(,(,放射治疗诱导多药耐药 关于放疗诱导多药耐药临床研究较多，其原因目前还不清楚，据推测可能的原因是:?在细胞周期中,、,期对某些化疗药敏感，,期主要合成,,,,，为向,期过渡作物质上的准备，放射可导致,,,减少，使,、,期缺乏必备的合成物质，影响细胞进入,、,期，从而可能导致耐药。?放射对增殖期肿瘤细胞相对敏感。放射先将敏感的增殖期肿瘤细胞杀灭，导致肿瘤细胞周期的重新分布，其变化可能与剂量增高相关，剩下不敏感细胞对某些化疗药同样表现出不敏感的特性。?放射可通过转录激活使,,,,,,,过度表达，,,,,的药泵功能加强，当药物进入细胞后，,,,,结合药物分子，同时其,,,位点结合,,,后释放能量使药物转移到细胞外，或可直接从细胞膜排除药物，使细胞内药物浓度始终维持于低水平，细胞由此获得耐药性。聂青，康静波等,,采用,,,,,,型远距离?,,治疗机对进人指数生长期的,,,,,,,小细胞肺癌细胞系进行分次外照射，每次,,,，累积总剂量为,,,,。研究表明对小细胞癌细胞系,,,,,,,进行累积高剂量外照射可抑制其总,,,的生物合成;同时可提高其,,,,,,,的表达水平。提示累积高剂量放射可能诱发多药耐药。 ,(,(,放疗诱导肿瘤细胞内,,,,增加 ,,,,是一种高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂素，其主要生物学功能包括选择性增强血管内皮细胞分裂，刺激内皮细胞增殖，促进血管形成，升高血管尤其是微小血管的渗透性，使血浆大分子外渗沉积在血管外的基质中，为肿瘤细胞的生长和新生毛细血管网的建立提供营养呻,。研究表明，肿瘤细胞表达的,,,,是肿瘤血管生成的重要刺激因子，缺氧是诱导肿瘤细胞表达,,,,的重要因素碡’,,凌春华等,们通过检测接受不同辐射剂量的,,,,细胞内,,,,的含量的变化，发现与阴性处理对照组(, ,,)比较，,,,,细胞辐照后，,,,,表达量明显增高，且具有剂量依赖性和时程依赖性。,,,,,等,?报道，,,,,,肺癌细胞体外接受电离辐射后，,,,,的表达明显增高，移植瘤辐照后，,,—,,,,法测定瘤体组织中,,,, ,,,,表达量增加。 ,(, ,微管蛋白与肿瘤耐药 细胞内微管蛋白分为,，,两个亚型，是细胞骨架的重要组成部分，它担任着维持细胞形态，进行物交换，传递信息，参与有丝分裂等的重要功能。人类细胞中存在着,种,微管蛋白同型体，其中,一微管蛋白一?与作用于微管的化疗药物敏感性有最密切的关系,别。王峻等,,,通过对,,,,,病人肿瘤组织中,一微管蛋白一,的表达水平与病人对长春碱类药物的代表长春瑞滨(,,,)的敏感性之间的关系进行研究，发现 , 第二章讨论对,,,敏感的病人，其组织内,一微管蛋白,，，，低表达，而对该药无效的病人,一微管蛋白一，，，高表达。,,,,,,,,等,钔对,,例非小细胞肺癌病人,,一微管蛋白一，，，表达与预后关系的研究显示，,一微管蛋白,，，，高水平表达病人的无病 生存期为,,,，明显低于,一微管蛋白一，，,低表达者的,,,,。在,例高表达,,,微管蛋,，，，病人中仅有,例对化疗敏感(,,,)，而在低水平表达的病人中化疗敏感率为,,,(,,,,)，提示接受以紫杉醇为基础化疗方案化疗的非小细胞肺癌病人,,一微管蛋白一?，表达增高可能表示预后不良，而,,一微管蛋,,,，，,表达降低则对紫杉醇敏感性增加。 本实验结果显示，肺腺癌细胞,,,,体外接受高能,线照射后，,一微管蛋白一，?,,,,及蛋白表达增加，且呈时间及剂量依赖性，推断高能,线照射后，肺腺癌细胞,,,,可能对紫杉类及长春瑞滨类化疗药产生耐药。由于本试验为体外实验，受外界干扰因素较多，在试验阶段虽然已经尽量考虑到相关因素的影响，并尽量避免，但由于客观试验条件的限制，试验设计的不足在所难免，且试验中设置的剂量点及检测时间点有限，实验的重复性难以保证，所以本实验尚难以做出确切的结论，对于高能,线对肺腺癌细胞体外表达,一微管蛋白,，,,的影响有待试验迸一步证实。 放、化疗联合己成为非小细胞肺癌治疗的重要手段。临床及基础研究证实，多西他赛、顺铂等化疗药物对放疗有增敏作用，目前临床上推荐放化疗同步，以提高治疗效果。放疗有可能导致肿瘤细胞耐药，在制定肿瘤治疗方案中应综合考虑，制定合理的个体化治疗。 ,, 青岛人学硕十学位论文 结论 肺腺癌细胞中,,一微管蛋白一，，，,,,,及蛋白表达水平随射线照射剂量和检测时间的不同而发生变化，推测其具有剂量依赖性和时间依赖性，这可能是临床肿瘤放疗后耐药的机制之 参考文献〔,〕,,,,,,,,, ,，,,,, ,，,;,,;,一。 结论 ,,,，,, ,,(,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ;,,;,,:,, ,,,,,,;,—,,,,,，,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,;,〔,〕，,, , ,,,,,, ,,;,, ,,,, ,,,,，,,,,，,,(,):,,,,,,,〔,〕熊建萍，陶庆松等(,,,一,抑制剂联合顺铂或,射线对,,,,肺腺癌细胞株的体外实验〔,〕(肿 瘤防治研究，,,,,:,,(,):,,,,,,,〔,〕,,,,,, ,,，,,,,,, ,,，,,,,;,, ,,，,, ,,(,,,,;, ,,,,,,;, ,,,, ,,,,,,,, , ,,,,,;,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,;, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,〔,〕(,,,;,, ,,,，,,,,，,,(,):,,,,, ,,,,〔,〕 董丽华，许一多等(,;,,,,,,,,稳定转染联合,射线诱导人肺腺癌,,,,凋亡及相关凋亡 蛋白表达变化〔,〕(中国免疫学杂志，,,,,;,,(,):,,,—,,,(邹华伟，谭永刚等(,射线对肺 癌细胞系,,,,,,,转录表达的影响〔,〕(中华肿瘤防杂志，,,,,;,,(,,):,,,,—,,,,〔,〕,,,,, ,,，,),,,,, ,,(,,,,,,,,,:,,, ,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,〔,〕，,, , ,,,,,, ,,,,，,,,,，,,(,):,,,,,,,〔,〕,,,,, , ,,,,,, ,(,,,,,,,,,—,,,,;,, ,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,, ,,,,,,一,;,,,,:, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,;, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,〔,〕(，,, , ,,,,,, ,,,,，, ,,,， ,,(,):,,,, ,〔,〕聂青，康静波，等(累积高剂量照射对体外培养的小细胞肺癌细胞系的总,,,及其多药耐 药基冈的影响〔,〕(解放军医学杂志，,,,,，,(,,):,,,,,,,〔,〕,,,,,, ,，,,,,, ,，,,,,,,,,,,,;,,，,, ,,(,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,;,,,(,,,,) ,,, ,,, ,,;,,,,,,〔,〕(,,,,,，,,,,，,,:,,,,〔,〕,,,,,, ,,(,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,;,,,，, ,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,; ,,,,,〔,〕(, ,,,, ,,,,，,,,,，,,,:,,,”,,,,,〔,,〕凌春华，苏燎原，等(电离辐射对人肺腺癌细胞株体外表达,,,,的影响〔,〕(苏州大学学 报(医学版)，,,,,，,,(,):,,,’,,, 〔, ,〕,,,,, ,，,,;,,,, ,，,,,, ,，,, ,,(,,,;,,,, ,, ,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,;,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,〔,〕( ,,,;,, ,,,，,,,,，,,:,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,, ,,,,,,,, 〔,,〕,,,,,,;,,,,, ,，,,,,,, ,(, ,,,？,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, , ,,,, ,,,,,,,,,〔,〕(,,;,,,,,，,,,, ;,, ,，,,(,,):,,,,,,,,, 〔,,〕王峻，蒲骁麟，俞明峰，等(,,,,,,,,,一?的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效的 关系,,〕(临床肿瘤学杂志，,,,,，,,(,):,,,,,,, 〔,,〕,,,,,,,, ,，，,,,; ,，,,,？,,, ,,，,, ,,(,,,,,,,,,, ,, ;,,,,?，,,,,—,,,,,,, ,, ,,,—,,,,, ,,,, 附图一一 ————————————————————————————————————,————————————————一 附 图,,,,胞浆表达,一微管蛋白一,，(,,,,) ,, .