SD大鼠慢性非细菌性前裂腺炎模型的建立及其生物学特性研究(可编辑)
复旦大学
硕士学位论文
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立
及其生物学特性研究 .
硕士生:李冬梅
导 师:孙祖越研究员 导师组成员:曹霖研究员 吴建辉助理研究员 目 录
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摘摘要要
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中英前 文文言
第一部分大鼠自体免疫性前列腺炎模型的建立
一、目的??”?.
二、材料与方法?.
三、结果?
四、讨论?“??”?
第二部分大鼠化学性慢性非细菌性前列腺炎模型的建立
一、目的二、材料与方法? 三、结果?
四、讨论..?
第三部分两种大鼠慢性非细菌性前列腺炎对生殖功能的影响
一、目的?”???”??. 二、材料与方法?.. 三、结果?.
四、讨论?
第四部分舍尼通对两种大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的作用比较
一、目的??“?..?一”。 二、材料与方法?。
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四、讨论”..?
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主参综发致复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立
及其生物学特性研究
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立 及其生物学特性研究
摘 要
目的:
建立两种大鼠慢性非细菌性前列腺炎的模型,研究其生物学特性,探讨慢
性非细菌性前列腺炎的发病机制,观察模型对生殖功能的影响,观察舍尼通
对模
型的疗效,探讨舍尼通的作用机理。
方法:
、模型一:自体免疫性慢性非细菌性前列腺炎模型的建立简称免疫性模型 只大鼠随机分成组,其中一组为阴性对照组,其它三组为试验组,第、 天多点皮内注射浓度分别为、、/的大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全 弗氏佐剂:的混悬液.,腹腔注射百白破疫苗.,第天腹腔注射 大鼠前列腺蛋白提纯液.,阴性对照组在相同时间和部位注射等量的生理盐 水,造模后第天处死大鼠。
?
、模型二:化学性慢性非细菌性前列腺炎模型的建立简称化学性模型 只大鼠随机分为两组,阴性对照组和模型组。模型组用%九.角叉菜胶生 理盐水溶液.直接注射前列腺内,阴性对照组注射生理盐水。造模后第天 处死大鼠。
、观察大鼠的前列腺大体和组织病理学变化,评价模型是否成功,并测定血清
中
的、、雌二醇、睾酮、双氢睾酮含量,观察其生物
学特性变化,初步探讨慢性非细菌性前列腺炎的发病机制。 、造模成功后,雌雄鼠:交配,观察雌鼠的妊娠率,仔鼠的生长发育,评价 模型对生殖功能的影响。
、用阳性药舍尼通模拟临床途径灌胃给药,观察舍尼通对两种模型的疗效,
初步
探讨舍尼通的作用机理。复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺
炎模型的建立及其生物学壁丝蔓堕
结果:
、在大鼠前列腺蛋白提纯液联合双重免疫佐剂制作的大鼠自体免疫性前列腺 炎模型中,高剂量/模型组的前列腺部分腺腔破坏,明显的充血、水肿, 间质和腺腔有淋巴细胞和单核细胞浸润,呈现明显的慢性炎症表现。 、在大鼠前列腺内注射%.角叉菜胶生理盐水溶液制作的化学性前列腺炎模 型中,观察到前列腺间质有大量淋巴细胞和单核细胞侵润,血管增生和充血
明显,
呈现明显的慢性炎症表现。
、在免疫模型组中,与阴性对照组相比,高剂量模型组的血液白细胞数明显升
高
.;低、中剂量模型组的血清升高,但差别不显著.,高剂
量模型组的血清明显降低郢.;低、中、高剂量模型组的血清均明 显升高.;低剂量模型组的血清明显升高.,中、高剂量模型组 的血清也升高,但差别不显著.;中、高剂量模型组的升高,且 高剂量模型组升高的幅度较大,但差别不显著.。
、在%角叉菜胶模型组中,与阴性对照组相比,模型组的血清双氢睾酮含量明 ?
显降低郢.;前列腺脏器系数明显下降,说明前列腺重量明显减轻.; 血清中的、和孑浓度升高,但差别不显著.。
、两种模型对生殖的影响:精子活力
结果为:、、级活力的精子:阴性
对照组与%角叉菜胶模型组之间有显著差异郢.,级活力的精子:阴性对
照组与%角叉菜胶模型组之间无显著差异.,各级活力的精子在阴性对
照组和免疫模型组之间均无显著差异?.:雌鼠妊娠率、产仔数和仔鼠出生
的性别比例及外观畸形数和死亡数:三组之间无明显差别;仔鼠的前列腺病理学
表现:与阴性对照组相比,模型组的仔鼠前列腺无明显改变,都是光滑、无结节,
无充血水肿,无炎细胞侵润。
、舍尼通对两种模型的作用:对免疫模型的作用表现在显著升高血清中的”水
平和水平.;对化学模型的作用表现在用药后血液中的白细胞数显著下
降.;对前列腺的组织病理学改变都显示出充血水肿减轻。
复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
结论:
、第、天多点皮内注射浓度为‖的大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全弗
氏佐剂:的混悬液,腹腔注射百白破疫苗.,第天腹腔注射大鼠前列
腺蛋白提纯液.,造模天可以成功制作大鼠自体免疫性慢性前列腺炎的
模型。
、采用%九.角叉菜胶生理盐水溶液.直接注射前列腺内,造模天可以成
功制作大鼠化学性慢性非细菌性前列腺炎的模型。
、化学性模型能明显降低精子活力,两种模型对雌鼠妊娠率、仔鼠的生长发
育
无明显影响。
、
舍尼通对两种慢性前列腺炎均有效,但作用机制不同。对免疫模型是通过升
高和的水平,对化学性模型是通过减少白细胞数来起作用。 关键词:
大鼠; 模型; 自体免疫:角叉菜胶;慢性前列腺炎;生殖;舍尼通;生物学 ?
特性
中图分类号:
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复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
特性研究
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大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
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复旦人学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
特性研雍
前言
前列腺是男性的主要附属性腺之一,前列腺炎是男性的常见病和多发病,
?
其发生率为%.%,且有逐年增加的趋势,近半数的男性在其一生中的某个时候
都会受到前列腺炎的影响。年,美国国立卫生研究院对前列腺炎进
行了重新分型,即型:急性细菌性前列腺炎;型:慢性细菌性前列腺炎;
型:慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨搞疼痛综合征;?型:无症状的炎症性前列腺
。
炎。其中慢性非细菌性前列腺炎占临床发病率的%以上,其发病机制至今未明【
为了进一步研究证实慢性非细菌性前列腺炎的发病原因,国内外众多学者研
究制作了各种动物模型,多数以大鼠作为实验动物制作的模型,如用化学
刺激物损伤前列腺的粘膜制作的化学性模型【;用雌激素诱导的模型【】;用大鼠前
列腺蛋白提纯液联合完全弗氏佐剂制作的免疫性模型【】,等等。其中,分
两次多点皮下注射大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全弗氏佐剂法制作的免
疫性模型比较符合临床慢性非细菌性前列腺炎的病理改变,是一种成功的造膜方
法【。但免疫的剂量相差较大,在不同品系的大鼠中,造膜的成功率差别也大州。
慢性前列腺炎的患者,由于腺体长期的充血水肿,分泌的前列腺液成分改变,
有可能影响男性生殖功能,其中,男性不育的发病率在.~.%之间,其确切
?
的机制目前还不清楚
对于慢性非细菌性前列腺炎的治疗,目前还没有特效药物,临床上基本考虑
联合用药,主要用抗生素预防和治疗可能的潜在感染,用缓解局部肌肉紧张和痉
挛的.受体阻滞剂,缓解精神紧张的镇静剂,植物药前列康、舍尼通等【】。前列
康的有效成分为油菜花粉,系花粉制剂,含有多种维生素、微量元素、氨基酸、酶等
物质,具有补肾固本的作用,主要用于治疗前列腺炎和前列腺增生症。花粉有抗雄性
激素的作用,能改善尿道黏膜及其周围组织水肿,缩小前列腺体积。具体机制还不清
楚【叭。
舍尼通是由瑞典纯种裸麦花粉提纯出来的活性成分精致而成,有效成分为水
溶性的和脂溶性的,应用舍尼通治疗慢性非细菌性前列腺炎的总有效率
达%,而且副作用小,安全性高【。舍尼通的作用机制还不清楚,可能是
? 抑制了内源性炎症介质的合成,阻断向的转化,保护腺腔上皮细胞【?。
本课
参照了国内外慢性非细菌性前列腺炎的造膜方法,以大鼠作为实验
动物,研究制作了两种慢性非细菌性前列腺炎的模型。第一种是采用多点皮内注
射大鼠前列腺蛋白提纯液联合双重免疫佐剂的方法进行造膜【,并且加大免
疫剂
量,增加免疫的次数,成功制作了大鼠的自体免疫性前列腺炎的模型;第二种
复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
是在前列腺腺体内注射%九.角叉菜胶生理盐水溶液制作的化学性前列腺炎的模型
”】。建模成功后,测定模型动物血清中的、孑、雌二醇、睾酮
?
和双氢睾酮的浓度,研究慢性非细菌性前列腺炎的生物学特性【。并用
造模成功的雄鼠与雌鼠交配,观察雌鼠的妊娠率,仔鼠的生长发育和行为活动,
探索慢性非细菌性前列腺炎对生殖功能的影响【】。另外,选用临床常用的植物药
舍尼通治疗两种模型,观察舍尼通对两种模型的作用,观察对两种模型动物治疗
效果的差异。
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复旦大学硕士学位论文
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特佳墅窭
第一部分大鼠自体免疫性前列腺炎模型的建立
一、目的
?
建立大鼠自体免疫性前列腺炎的模型,研究其生物学特性。 二、材料与方法
一实验材料
、实验动物
种:大白鼠;
系:远交系;
性别和数量:雄性只:
年龄:.周龄;
体重:左右;
来源:上海西普尔.必凯实验动物有限公司,生产许可证号【 沪?;
等级:清洁级;
研究系统选择说明:大鼠是药理学研究中公认的标准动物之一, ?
对性激素感受性高:
研究系统标记程序:动物到达后,按要求接收,按本中心统一的编号 方法编号为....进行编号,为每只动
物指定一个单一的研究动物号。原始资料中使用研究动物号来识别; 饲料及饮用水:饲料由上海仕林生物科技有限公司提供,饲料名称 为合成饲料,批号为,饮用水为高压消毒后的自来水; 饲养条件:大鼠在上海市计划生育科学研究所清洁级动物房内饲 养,许可证号沪.】。室温.,相对湿度
.%,光照小时,黑暗小时;
塑料笼内,每笼饲养
饲养环境:大鼠饲养于
雄性大鼠只,自由饮水、摄食。
?
、主要仪器设备
超净工作台:;
全自动生化分析仪:;
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
复旦大学硕士学位论文
动物血球计数仪:;
酶联免疫检测仪:?;
? 切片机:;
高速冷冻离心机:;
光学显微镜:;
孔板:;
手术器械:手术剪、镊子、止血钳、注射器、弯盘、缝线。
、主要试剂
完全弗氏佐剂:公司;
睾酮:深圳市新产业生物医学工程有限公司: ;
双氢睾酮:百白破疫苗:武汉生物制品研究所;
:上海执诚生物科技有限公司;
:上海执诚生物科技有限公司。
实验方法
、大鼠前列腺蛋白提纯液的制作
?
超净室和超净台紫外光消毒小时,把消毒好的物品器械放在超净台 上,把只克左右的大鼠脱颈椎处死,消毒后放在超净台上,用 剪刀剪开大鼠腹部皮肤和肌肉,提起膀胱,清楚地暴露前列腺,剪下整个 前列腺连膀胱放入冰生理盐水中,修掉脂肪、膀胱,并清洗.遍, 剪碎前列腺组织,放在玻璃匀浆器中匀浆。匀浆器置与放了冰块的烧杯中, 保持低温,把匀浆充分的前列腺组织用吸管吸入离心管中,高速离心机 转/分,,配平后离心分钟,用吸管吸去上层脂肪组织,再吸 取上清液共,放入冷冻管保存备用.?。取余下的上清液.皿, 等比稀释后依次放入孔板,在酶标仪上读取值,并按照拟合的标 准曲线读取上清液的浓度。从标准曲线上查出值对应的浓度,把蛋白 提纯液稀释成、和
/的浓度。
、动物分组及造模
?
只大鼠适应性饲养一周后,按体重随机分为组,阴性对照组、 低、中和高剂量模型组,每组只,除阴性对照组外,其他各组分别于第 、天,在大鼠只脚掌、腹股沟和颈部处皮内注入大鼠前列腺蛋白提
×只,腹股
纯液与等比混匀混悬液 ,剂量为:脚掌.
沟.,颈部. ,腹腔注射百白破疫苗. ,第天腹腔注射大 复旦大学硕士学位论文
奎垦堡丝塑堕堡萱型堕壅堡型箜垄皇垦基竺塑兰堑丝墅塑 ?????????????????????????????????????????????????????一一。 。其中,低、中和高剂量模型组注射的大鼠前
鼠前列腺蛋白提纯液.
列腺蛋白提纯液浓度分别为、和/。阴性对照组在相同的时 间和部位注射相同体积的生理盐水。在第天时,处死所有大鼠。 ?
、实验取材
取血
大鼠麻醉后,腹主动脉取血,一部分做血常规,一部分离心取血清, .冰箱保存。
解剖取材
取血后,取前列腺、睾丸、附睾、精囊腺、包皮腺、脾、淋巴结进 一步检查。
检测项目
取材组织称重、计算脏器系数、观察取材组织的大体、组织病理学、 血液白细胞数、血清、、、睾酮和双氢睾酮
的浓度。
、统计分析
实验结果用一来表示,用.作单因素方差分析,组间两
两比较用最小显著差异法。
?
三、结果
一大鼠自体免疫性前列腺炎模型体重的变化
与阴性对照组相比,造模组的大鼠体重第二周和第三周明显减轻尸 ?.,第一周、第四周和第五周无明显差别尸.,模型组之间 无明显差别尸.;见表.。复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎
模型的建立及其生物学特性研究
注:与阴性对照组相比,?尸?.,??咫.
二大鼠自体免疫性前列腺炎模型血液学指标的变化
与阴性对照组相比,高剂量模型组的血液白细胞数明显升高尸如.;低、 中剂量模型组的血清升高,但差别不显著.,高剂量模型组的血清 明显降低脚.:低、中、高剂量模型组的血清均明显升高尸.; 低剂量模型组的血清明显升高脚.;中、高剂量模型组的血清也升高, 但差别不显著尸.:中、高剂量模型组的升高,且高剂量模型组升 高的幅度较大,但差别不显著户.。详见表。
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复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
特性研究
表.、大鼠自体免疫性前列腺炎模型血液学指标
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阴性对照组 .士. . . .士
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低剂量模型组 .士. ..? .士. ..
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中剂量模型组 .. .土.? .士. ..
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高剂量模型组 ..掌? .士. .:.
注:幸事尸郢.,乖尸郢.,与阴性对照组比
三大鼠自体免疫性前列腺炎模型取材组织的脏器系数 与阴性对照组,造模各组的脾系数均明显升高尸?.,其中中剂量模型
组显著升高咫.;低剂量模型组和高剂量模型组的淋巴结系数显著升高尸
?.,中剂量模型组的淋巴结系数升高不明显.,其他脏器系数无明
显差别尸.。见表。
表免疫模型组脏器系数/,
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注:与阴性对照组相比,?.,木咫. 复旦人学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
壁丝婴窒
四大鼠自体免疫性前列腺炎模型前列腺质地的变化
前列腺的质地用前列腺的重量与体积之比计算:与阴性对照组相
?
比,造模各组的前列腺质地均无差异。 表.免疫模型组前列腺质地/,
前列腺质地
组别
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阴性对照组
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低剂量组
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中剂量组
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高剂量组
注:两组问无显著差异,.
五大鼠自体免疫性前列腺炎模型前列腺组织病理学变化
阴性对照组前列腺组织肉眼观外表光滑、无结节、无粘连,高剂量模型 组表面欠光滑、部分有结节和粘连。通过组织病理学研究发现:阴性对照组 前列腺组织结构完整、腺腔和间质无炎性细胞侵润,无充血和水肿;低剂量 ?
和中剂量模型组有一定程度的充血水肿,腺腔和间质有少量炎性细胞侵润; 而高剂量模型组部分腺腔破坏,基膜不完整,明显的充血、水肿,间质和腺 腔有淋巴细胞和单核细胞浸润,如图?所示。
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复旦人学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
特性研究
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谚?謦黔鼍。缪冀爹粥雾’霉
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囊:。:毒:乏磁鬈,。;;二麓磊‰墓;盔磊?、。盏二盘。盔蘸茏:琵乏缓貔缓
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阴性对照组, 低剂量模型组,
中剂量模型组,高剂量模型组,
图. 大鼠自体免疫性前列腺炎模型组织病理学变化
六其他取材组织的病理学表现
与阴性对照组相比,模型组的睾丸组织无明显改变,如图.所示。高 剂量模型组的附睾组织间质有少量炎性细胞侵润,如图.所示。精囊腺无明 显改变,如图所示。包皮腺无明显改变,如图.所示。脾小结增加,如 图所示。胸腺无明显改变,如图.所示。淋巴结滤泡增加,如图.所 示。
复旦大学硕士学位论文
旦奎垦堡丝韭塑堕笪萱型堕壅堡型塑垄皇垄苎生望兰壁兰兰塑 .????????????????????????????????????????????????????????一一 ?
高剂量模型组,×
阴性对照组,×
图免疫性前列腺炎模型睾丸的组织病理学表现
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高剂量模型组,
阴性对照组,
图免疫性前列腺炎模型包皮腺的组织病理学表现
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图免疫性前列腺炎模型脾的组织病理学表现 高剂量模型组,
阴性对照组,
图.免疫性前列腺炎模型胸腺的组织病理学表现 复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学
特性研究
?
阴性对照组, 高剂量模型组,
图.免疫性前列腺炎模型淋巴结的组织病理学表现 四、讨论
目前,众多学者提出,慢性非细菌性前列腺炎很可能是一种自体免疫性疾病
旧,正常情况下,机体对自身抗原不产生免疫反应,此为自身耐受。在某些情况
.下,自身耐受遭到破坏,机体免疫系统针对自身抗原产生免疫应答,体内出现自
身抗体,此为自身免疫【矾。自身免疫不一定都引起自身免疫性疾病,只有自身免
疫达到一定强度,破坏了自身正常组织结构并引起相应临床症状时,才称为自身
免疫病。自身免疫疾病的发病原因不明,个体差异大,与种属有关.
为了研究慢性非细菌性前列腺炎的发病机制,国内外学者研究制作了众多的
动物模型,多数是把大鼠作为实验动物,其中有用辣椒素、角叉菜胶、乙
醇等化学刺激物前列腺内注射损伤前列腺的粘膜制作的模型;有用去势后雌
激素诱导的模型:有用大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全福氏佐剂制
作的模型。其中,分两次多点皮下注射大鼠前列腺蛋白提纯液联合完全福氏佐剂
法制作的模型比较符合临床慢性非细菌性前列腺炎的病理改变,是一种
成功的造膜方法【。
我们参照了国内外慢性非细菌性前列腺炎的造膜方法,把大鼠作为实验动
物,采用大鼠前列腺蛋白提纯液联合双重免疫佐剂的方法进行造膜,并且加大免
疫剂量,增加免疫的次数,改进造膜方法,提高造膜的成功率。同时测定血中
钙
离子、睾酮和双氢睾酮的浓度,研究慢性非细菌性前列腺炎的生物学特性。
?
本研究的结果表明,与阴性对照组相比,造模各组的大鼠体重在第二周和第
三周有明显下降,第四周和第五周又恢复正常,说明造模开始的两周对大鼠的食
欲可能有影响,导致体重明显减轻,随着时间的推移,饮食恢复正常,造模组和
对照组的体重差异逐渐消失。复旦大学硕士学位论文
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
造模各组的脾系数明显升高,脾增大,说明脾参与了免疫反应,其中中剂量
造模组脾系数显著增加,说明机体接触抗原的量在一定范围内脾的反应最明显,
从本试验看,中等剂量的抗原量最能激发脾参与免疫反应。而淋巴结系数刚好相
反,中剂量造模组无明显增加,低剂量和高剂量造模组显著增加,说明抗原量在
较低和较高水平最能激发淋巴结参与免疫反应,在中等剂量时主要是脾参与免疫
反应【】。
低剂量模型组和中剂量模型组的钙离子浓度有升高趋势,而高剂量造膜组的
钙离子浓度明显降低,说明前列腺炎在发生、发展过程中,经历了钙离子浓度
由
高到低的一个变化【羽。钙离子是诱发兴奋.收缩偶联的主要离子,在轻中度炎症时,
钙离子浓度升高可以加强腺体的收缩,促进炎症的吸收、消散,而重度炎症时,
钙离子严重耗竭,表现为钙离子浓度明显降低,而钙离子的浓度下降导致腺体收
缩乏力,反过来又加重炎症反应,不利于炎症的吸收和消散。活化的维生素能
够提高钙离子的吸收,调节自身免疫【。目前,用维生素受体激动药治疗前列
腺炎已经获得很大进展【。的浓度明显升高,说明多次接触抗原后,体液免疫
明显增强,由于免疫反应过强而导致免疫损伤应是慢性非细菌性前列腺炎的发病
原因之一【。模型组大鼠血清中睾酮浓度明显高于阴性对照组,模型组之间相比,
低剂量模型组最高,中剂量模型组次之,高剂量模型组最低。与阴性对照组相比,
?
低剂量模型组双氢睾酮的含量无明显变化,高剂量模型组和中剂量模型组的双氢
睾酮的含量增加,而且高剂量模型组增加的幅度最大,说明前列腺炎发生时,机
体释放大量睾酮,随着炎症的加重,睾酮转化为双氢睾酮的量增加。在炎症反
应
过程中,活性更强的双氢睾酮扮演了更重要的角色?。
综上所述,我们认为,采用高剂量 /的大鼠前列腺蛋白提纯液多点
皮下注射辅以双重免疫佐剂的方法可以使大鼠的前列腺产生明显的炎症反应,
是一种成功的造膜方法。自体免疫性前列腺炎的发生与机体接触自身抗原的量和
次数密切相关,且在炎症发生发展的过程中伴随着钙离子和雄激素含量的变化。
?
复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特佳墅壅
第二部分大鼠化学性慢性非细菌性前列腺炎模型的建立
一、
目的
建立大鼠化学性慢性非细菌性前列腺炎的模型,研究化学物质的刺激对
前列腺的影响
二、材料与方法
一实验材料
、实验动物
种:大自鼠;
系:远交系;
性别和数量:雄性只;
年龄:.周龄;
体重:左右;
来源:上海西普尔.必凯实验动物有限公司,生产许可证号 沪?;
等级:清洁级;
研究系统选择说明:大鼠是药理学研究中公认的标准动物之一, ?
对性激素感受性高;
研究系统标记程序:动物到达后,按要求接收,按本中心统一的编号 方法编号为....进行编号,为每只动
物指定一个单一的研究动物号。原始资料中使用研究动物号来识别; 饲料及饮用水:饲料由上海仕林生物科技有限公司提供,饲料名称为 合成饲料,批号为,饮用水为高压消毒后的自来水; 饲养条件:大鼠在上海市计划生育科学研究所清洁级动物房内饲 养,许可证号沪.。室温.。,相对湿度%,
光照小时,黑暗小时;
塑料笼内,每笼饲养
饲养环境:大鼠饲养于
雄性大鼠只,自由饮水、摄食。
?
、主要仪器
全自动生化分析仪:;
动物血球计数仪:;
酶联免疫检测仪:.;复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模
型的建立及其生物学特性研究
切片机::
光学显微镜:;
孔板:;
手术器械:手术剪、镊子、止血钳、注射器、弯盘、缝线。 、主要试剂
角叉菜胶:批号//,产地:,公司;
雌二醇:深圳市新产业生物医学工程有限公司;
睾酮: 深圳市新产业生物医学工程有限公司;
双氢睾酮 ;
:上海执诚生物科技有限公司;
:上海执诚生物科技有限公司。
二实验方法
、动物分组与造模
动物到达后,先适应性饲养天,然后称重,按体重随机分组。 只雄性大鼠随机分成组,阴性对照组只;%角叉菜胶模型组只; 将.角叉菜胶溶入生理盐水,混匀,配制成%的角叉菜胶生理盐水溶 ?
液,雄性大鼠用%戊巴比妥钠溶液按./的剂量腹腔麻醉大鼠,再
用碘伏和酒精棉球消毒大鼠腹部皮肤,在下腹正中剪开一的切口,打开腹腔, 提起膀胱,暴露前列腺,模型组在前列腺背侧叶注射.%角叉菜胶生理盐水 溶液,阴性对照组每只在前列腺背侧叶注射生理盐水溶液.,然后放好前列
腺,
缝合肌肉、皮肤,消毒伤口,放大鼠回笼中。
、实验取材
取血大鼠麻醉后,腹主动脉取血,离心取血清,.冰箱保存,待测各项 指标。
解剖取材雄鼠取血后, 取脾、前列腺、精囊腺、包皮腺、睾丸、附睾、淋 巴结。
、统计分析
实验结果用来表示, 用.做独立样本检验。
?复旦大学硕士学位论文
一
一一兰里盔垦堡丝塑堕壁堕型壁壅堡型箜堡皇垦茎竺塑堂堑垡堑窒. ??????。。。。。。‘。。。?一一一
表.化学性前列腺炎模型血液学指标的改变
组别
咖
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对照组 .::. .::.
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模型组
注:木尸.
三角叉菜胶化学模型组大鼠的脏器系数 与阴性对照组相比,模型组的前列腺系数明显降低尸?.,其他脏器
系数无明显差别尸.。见表?。
.
耋三:垡堂堡型望壁墨墨壑翌型垒:鉴: ???。。。。。。。。’’’?????????????????一 脾 淋巴结
精囊腺 包皮腺 胸腺
附睾 前列腺
组别 睾丸
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对照组
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模型组..
注:与阴性对照组相比,幸.,?幸尸?. 四角叉菜胶化学模型组大鼠的前列腺质地 与阴性对照组相比,模型组的前列腺质地明显增加尸?.,即变硬。见
表.。
表化学模型组前列腺质地/,
前列腺质地
组别
?
.?.
对照组
.?.
模型组
注:与阴性对照组相比,?尸?.,?咫.复旦人学颀上学位论文 大鼠慢性邗细
菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究 五各组大鼠的前列腺病理学表现
?
与阴性对照组相比,模型组的前列腺系数明显降低,说明前列腺重量相对体 重明显减轻咫.,但质地变硬。阴性对照组前列腺组织肉眼观外表光滑、无 结节、无粘连,模型组的前列腺组织表面欠光滑、部分有结节和粘连。显微
镜下
观察:阴性对照组前列腺组织结构完整、腺腔和间质无炎性细胞侵润,无充
血,
间质有积液。而模型组的前列腺间质有大量淋巴细胞和单核细胞浸润。如图? 所示。
熙蕊鬻
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阴性对照组髓,× 模型组既,×
图.化学性前列腺炎模型的前列腺组织病理学表现
六取材组织的病理学表现
与阴性对照组相比,脾、胸腺、精囊腺、包皮腺、附睾、睾丸、淋巴结的 组织病理学无明显改变。
四讨论
慢性非细菌性前列腺炎的可能发病原因,除了与自身免疫和激素诱导有关
外,
还可能与化学物质直接刺激前列腺有关【】。
角叉菜胶是由北美产植物角叉菜经稀碱液加热萃取或热水萃取,用醇类沉淀,
?
经干燥或冷冻而得。其中,角叉菜胶致炎性最强,用角叉菜胶酶可以把它分解
成很多单体,每个单体含有,是一种植物致炎剂【。结构式如图.所示。
复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研褒
?
/
图.九.角叉菜胶的结构式
本实验采取前列腺内注射%角叉菜胶生理盐水溶液的方法制作化学性慢性
非细菌性前列腺炎的模型【。同时测定血中钙离子、睾酮和双氢睾酮的浓度,研
究慢性非细菌性前列腺炎的生物学特性。
研究结果表明,与阴性对照组相比,模型组前列腺系数明显降低,说明前列
腺重量相对体重明显减轻。脏器系数的计算有两种方法,一种是脏器重量/体重
,另一种是脏器重量/体重 ,本实验采取后一种计算方法。前列腺
质地变硬。阴性对照组前列腺组织肉眼观外表光滑、无结节、无粘连,模型组的
?
前列腺组织表面欠光滑、部分有结节和粘连。显微镜下观察:阴性对照组前
列腺
组织结构完整、腺腔和间质无炎性细胞侵润,无充血,间质有积液。而模型组的
前列腺间质有大量淋巴细胞和单核细胞浸润,呈现明显的慢性炎症特征。阴性对
照组的前列腺间质有积液的原因可能是注射的生理盐水没有完全吸收的缘故。模
型组的明显降低,说明的减少在化学性前列腺炎模型中起到了重要作
用。那么,化学性慢性非细菌性前列腺炎为什么会引起的减少呢正常情况
下,由睾丸分泌的雄激素在【.还原酶的作用下生成活性更强的,促进
前列腺细胞的生长。减少会导致前列腺的缩小,这与实验结果是吻合的引。
综上所述,采用前列腺内注射%角叉菜胶生理盐水溶液的方法制作化学性慢性
非细菌性前列腺炎的模型是成功的,化学因素引起的慢性非细菌性前列腺炎可导
致前列腺的重量相对减轻,合成减少,这与免疫性前列腺炎有很大差别。复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
第三部分两种大鼠慢性非细菌性前列腺炎对生殖功能的影响
一目的
?
观察两种模型对生殖功能的影响,探讨慢性非细菌性前列腺炎对生育影响的
可能机制。
二材料与方法
一实验材料
、实验动物
种:大白鼠;
系:远交系;
性别和数量:只其中雄性只,雌鼠只;
年龄:周龄;
体重:雄鼠左右,雌鼠 左右;
来源:上海西普尔.必凯实验动物有限公司,生产许可证号【沪 ?
?:
等级:清洁级:
研究系统选择说明:大鼠是药理学研究中公认的标准动物之一,对 性激素感受性高;
研究系统标记程序:动物到达后,按要求接收,按本中心统一的编号方 法编号为...进行编号,为每只动物指
定一个单一的研究动物号。原始资料中使用研究动物号来识别; 饲料及饮用水:饲料由上海仕林生物科技有限公司提供,饲料名称为合 成饲料,批号为,饮用水为高压消毒后的自来水;
饲养条件:大鼠在上海市计划生育科学研究所清洁级动物房内饲养, 许可证号沪。室温?。,相对湿度%,
光照小时,黑暗小时;
饲养环境:大鼠饲养于 塑料笼内,每笼饲养大
鼠只,自由饮水、摄食。
复口.人学顾...学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物
学特性研究
、主要仪器与试剂
莱卡切片机;
角叉菜胶:批号/ /,产地:,公司;
?
完全弗氏佐剂:公司;
百白破疫苗:武汉生物制品研究所。
二实验方法
、动物分组与造模
动物到达后,先适应性饲养天,然后称重,按体重随机分组。 只雄性大鼠随机分成组,阴性对照组只;%角叉菜胶模型组只; 免疫模型组只。 造模方法如前所述。
、雄雌鼠交配
/
造模后第天阴性对照组和模型生育组的雄鼠按:与雌鼠做交配实验,造模 后第天处死所有雄鼠,解剖取材,检测大鼠精子活力,继续观察雌鼠的妊娠
率,
仔鼠的发育和行为活动。
、
观察仔鼠的生长发育和行为活动
仔鼠出生后,母乳喂养到天,第天处死母鼠,仔鼠饲料喂养至天后 ?
处死。
、实验取材
取左侧附睾尾,测精子活力;
解剖取材雄鼠取前列腺,仔鼠取前列腺、精囊腺、睾丸、附睾。 、
检测项目
前列腺的大体和组织病理学,雌鼠受孕率,胎仔数,仔鼠的生长发育和行为活
动。
病理学大体及显微镜下观察取材组织。
、统计分析
实验结果用来表示,用 .作方差分析和检验,计数资料用卡方检 验。
三结果
?
、
各组大鼠的前列腺病理学表现
阴性对照组前列腺组织肉眼观外表光滑、无结节、无粘连,免疫模型组深前
列腺
组织表面欠光滑、部分有结节和粘连。前列腺明显充血水肿,腺腔大小不一,
部
分腺腔基膜被破坏,腺腔内和间质有淋巴细胞和单核细胞侵润。%角叉菜胶模
型复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特
性硒驾
组的前列腺间质有大量淋巴细胞和单核细胞浸润。
、各组大鼠的精子活力分析结果
将精液的活力分为个等级:级:快速直线向前运动;级:慢
速或无定向运动;级:非向前运动;级:不运动
级活力的精子:阴性对照组与%角叉菜胶模型组之间有显著差异., 级活力的精子:阴性对照组与%角叉菜胶模型组之间有显著差异., 级活力的精子:阴性对照组与%角叉菜胶模型组之间无显著差异., 级活力的精子:阴性对照组与%角叉菜胶模型组之间有显著差异.,各 级活力的精子在阴性对照组和免疫模型组之间均无显著差异脸.。 见表.。
表.各组大鼠的精子活力分析
?
注:木.,?.
、雌鼠妊娠率、产仔数和仔鼠出生的性别比例及外观畸形数和死亡数 阴性对照组只雌鼠中有只妊娠,角叉菜胶模型组只全部妊娠,免疫模型组 只全部妊娠;孕天时处死部分孕鼠,每组留只继续观察。雌鼠平均产仔数: 阴性对照组为只,角叉菜胶模型组为.只,免疫模型组为只;仔鼠出生 性别比雌/雄:阴性对照组为:,角叉菜胶模型组为:,免疫模型组
为:;外观畸形数:阴性对照组只,表现为体积小,体重轻,天断奶时 才;出生时死亡数:阴性对照组只,其他两组无;哺育死亡数,每组各只。 见表.。复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其
生物学特性研究
表雌鼠妊娠率、产仔数.
平均胎仔数
组别 雌鼠妊娠率
、仔鼠的生长发育情况
仔鼠的体重增长:阴性对照组的仔鼠出生时体重偏低,发育过程中,体重也 低于两模型组,但无明显差别。见表.。三组间仔鼠的耳廓分离、门齿萌出、
睁
眼、出毛、平面翻正、悬崖回避、听觉惊愕和自发活动时间均无明显差别,
但角
?
叉菜胶模型组的仔鼠被毛较稀疏。见表.和表.。
表.仔鼠出生的性别比例及外观畸形数和死亡数?
表.仔鼠的生长发育和行为活动时间:天~ ~ ~ ~
阴性对照~
组~ ~
角叉菜胶~ ~ 较稀
疏
模型组? ~ ~ ~ ~
免疫模型 ~
组
、仔鼠的前列腺病理学表现
与阴性对照组相比,模型组的仔鼠前列腺无明显改变,都是光滑、无结节,无
充血水肿,无炎细胞侵润。
四讨论
前列腺炎是男性的常见病,目前已经证实,前列腺炎的慢性病程和反复发作
可影响男性生殖功能,导致男性不育,其发病率在.~.%之间,确切机制还
不清楚【】。
前列腺是男性的附属性腺,前列腺分泌的前列腺液是精浆的重要组成部分,
正常情况下,精浆提供了输送和营养精子的物质,激发精子的活力。前列腺的炎
症可引起精浆理化性质的改变,降低精子的活力,从而影响男性的生育能力【】。
本研究制作了两种不同原因引起的慢性非细菌性前列腺炎的模型,一种是自体免
疫性模型,另一种是化学性模型。两种模型都导致大鼠的精子活力下降,与阴性
对照组相比,化学性模型的精子活力明显下降,差别有显著统计学意义。雌鼠妊
复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研客
娠率、产仔数和仔鼠出生的性别比例及外观畸形数和死亡数无明显差别。阴性对
照组的仔鼠出生时体重偏低,发育过程中,体重也低于两模型组,但无明显差别。
? 三组间仔鼠的耳廓分离、门齿萌出、睁眼、出毛、平面翻正、悬崖回避、听觉惊
愕和自发活动时间均无明显差别,但角叉菜胶模型组的仔鼠被毛较稀疏。仔鼠的
前列腺无明显改变,都是光滑、无结节,无充血水肿,无炎细胞侵润。
文献报道前列腺炎患者精液内的白细胞数增多、抗精子抗体滴度增加以及白细
胞导致的活性氧水平升高和总的抗氧化能力下降是前列腺炎患者不育的主要原因
【】。本研究中大鼠的慢性非细菌性前列腺炎只降低了精子活力,并没有影响生
育,对仔鼠的生长发育和行为活动也没有明显影响。一方面说明前列腺炎引起的
不育还是与感染密切相关,另一方面可能是因为造模的时间不够长,还没有严重
影响到生育功能。复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究
第四部分 舍尼通对两种大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的
作用比较
一目的
?
观察舍尼通对两种模型的疗效,探讨舍尼通的作用机理。 二材料与方法
一实验材料
、实验动物
种:大白鼠;
系:远交系;
性别和数量:只,雄性;
年龄:周龄;
体重:左右;
来源:上海西普尔一必凯实验动物有限公司,生产许可证号沪 :
等级:清洁级;
研究系统选择说明:大鼠是药理学研究中公认的标准动物之一,对 性激素感受性高;
研究系统标记程序:动物到达后,按要求接收,按本中心统一的编号方 法编号为....进行编号,为每只动物指
定一个单一的研究动物号。原始资料中使用研究动物号来识别; 饲料及饮用水:饲料由上海仕林生物科技有限公司提供,饲料名称为合 成饲料,批号为,饮用水为高压消毒后的自来水;
饲养条件:大鼠在上海市计划生育科学研究所清洁级动物房内饲养,
许可证号沪。室温?,相对湿度?%,
光照小时,黑暗小时;
?
饲养环境:大鼠饲养于 塑料笼内,每笼饲养雄性 大鼠只,自由饮水、摄食。
、主要仪器
全自动生化分析仪:;
复大学颀十学位论文
大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性至壅
动物血球计数仪:;
酶联免疫检测仪:.:
切片机:;
?
光学显微镜::
孔板:;
手术器械:手术剪、镊子、止血钳、注射器、弯盘、缝线。
、主要试剂
完全弗氏佐剂公司;
百白破疫苗:武汉生物制品研究所;
角叉菜胶:批号//,产地:,公司;
雌二醇:深圳市新产业生物医学工程有限公司;
睾酮: 深圳市新产业生物医学工程有限公司;
;
双氢睾酮:
反应蛋白冲:上海晶美生物有限公司; :上海执诚生物科技有限公司; :上海执诚生物科技有限公司。 、药物资料
?
名称:普适泰片舍尼通:
英文名称:;;
批准文号:国药准字:
供试品号:.;
性状:片剂;
提供单位:南京美瑞制药有限公司; 生产批号:;
包装规格:片/盒;
含量:每片含水溶性花粉提取物 ,脂溶性花粉提取物 :
有效期:年月日:
贮藏条件:遮光、密封、阴?、干燥处保存; 配制方法:溶于蒸馏水中。
二实验方法
、动物分组与造模
动物到达后,先适应性饲养天,然后称重,按体重分组。只大鼠分为复旦大学
硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究 组,每组只,分别建立两种慢性非细菌性前列腺炎的模型。其中组为自体 免疫性前列腺炎模型,具体造膜方法为:在第天和第天,在大鼠只脚掌、 ? 腹股沟和颈部皮下处注射大鼠前列腺蛋白提纯液
/与等比混匀
的混悬液 ,腹腔注射百白破疫苗. ,第天,腹腔注射大鼠前列腺蛋 白提纯液. 。天造膜成功。另一组为化学性前列腺炎模型,具体造膜方法 为:称取角叉菜胶.溶于砌生理盐水中,配成浓度为%的角叉菜胶生理 盐水溶液,用%戊巴比妥钠溶液按./的剂量腹腔麻醉大鼠,再用碘伏 和酒精棉球消毒大鼠腹部皮肤,在下腹正中剪开一的切口,打开腹腔,提 起膀胱,暴露前列腺,模型组在前列腺背侧叶注射.的%角叉菜胶生理盐 水溶液,阴性对照组每只在前列腺背侧叶注射生理盐水溶液.,然后放好前 列腺,缝合肌肉、皮肤,消毒伤口,放大鼠回笼中。
造膜后第天开始灌胃给舍尼通,连续给药天,停止给药小时内处 死所有大鼠,观察大鼠前列腺组织的大体和显微镜下的病理学改变。测血常
规、
、钙离子、镁离子浓度,测大鼠血清中的雌二醇、睾酮、双氢睾 酮、前列腺特异抗原的含量。
、
给药方法
?
频率:每天两次;
途径:灌胃:
给药时间:上午:.:,下午:.:;
给药期限:天:
给予供试品的途径说明:与人临床拟用途径相同;
药物配制方法:如表.。
表.舍尼通的配制方法
?
注:各个剂量组配制的总药量随动物体重的增加而相应改变,上表表示的是
第一次给药时
的配制方法复旦大学硕士学位论文 大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立
及其生物学特性研究
、实验取材
取血
?
大鼠麻醉后,腹主动脉取血,一部分做血常规,一部分离心取血清,.冰箱 保存。
解剖取材
取血后,取前列腺组织,进一步检查。
检测项目
前列腺组织称重、计算前列腺的重量与体重比,肉眼观察前列腺组织的大小、 形态,并放入%的甲醛溶液中固定,做成石蜡切片,苏木素.伊红染色,
显微镜下观察前列腺组织的病理变化。测血清中、、、雌二醇、 睾酮、双氢睾酮、反应蛋白、前列腺特异抗原
和酸性磷酸酶的浓度。
、 统计分析
实验结果用来表示,用.作方差分析和检验。
三结果
一大鼠模型组和合尼通组的体重变化
?
免疫模型用药前后大鼠的体重变化:模型组和用舍尼通后的大鼠体重在第 一、二、三、四、五周均无明显差别.;化学模型用药前后大鼠的体重变 化:与模型组相比,用舍尼通后的大鼠体重在第三周和第四周明显下降?.、, 在第一、二、五周无明显差别尸.;见表.和.
表.免疫模型用药前后大鼠的体重统计分析表
注:两组间无显著差异,.表.角叉菜胶模型用药前后大鼠的体重统计分析表 组别 第一周 第二周 第三周 第四周 第五周
.. .?. .?.
化学模型组 .. .?.
.?. .?. .. .?. ..
舍尼通组
注:与阴性对照组相比,木尸?.,奉咫.
二大鼠前列腺炎模型组和舍尼通组的血液学指标
角叉菜胶模型舍尼通组与角叉菜胶模型组之间,角叉菜胶模型舍尼通组与免
疫模型舍尼通之间相比,血液白细胞数明显下降咫,,,免疫模型舍尼通组比
免疫模型组的浓度和浓度明显升高脚.。见表.和表.。
表
大鼠前列腺炎模型组和舍尼通组血液学指标
?
血清
血液白细胞数 血清 血清 血清
试验分组
札 /
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免疫 .士.
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模型组
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舍尼通组
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