FT4操作规程

FT4操作规程 血清游离甲状腺素(FT)诊断试剂盒 4 时间分辨免疫荧光分析法 操作规程 文件编号 编写者 审核者 批准者 医院 血清游离甲状腺素(FT)诊断4医院: 版本: 试剂盒 科: 执行日期: 时间分辨免疫荧光分析法 室: 共3 页 第 1 页 标准操作规程 1.原理 本试剂盒采用包被抗原的竞争免疫分析法。T-蛋白复合物包被于96孔荧免板，校准4 3+品或样品中的T与固相面T竞争结合限量的Eu标记抗T单克隆抗体。洗涤分离后, 微444 3+孔表面免疫复合物中的Eu被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准 品或样品中的FT浓度呈负相关，通过校准曲线可得出样品中FT浓度。 442.样本处理 静脉取血，待血凝结后离心取血清，血清样本可于2,8?保存一周。不要使用血浆或 有严重溶血的血清。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司血清游离甲状腺素(FT)时间分辨荧光4 免疫法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下: a. 包被有T-蛋白复合物的96孔板:一块(12孔×8) 4 3+b. 铕(Eu)标记的抗T单克隆抗体(铕标记):一瓶,1.0ml 4 c. 校准品(A、B、C、D、E、F):一套,1.0ml/瓶(冻干品) d. 浓缩洗液:一瓶,40ml e. 荧光增强液:一瓶,30ml f. 分析缓冲液:一瓶,40ml g. 吸头:20支 h. 说明书:一份 血清游离甲状腺素(FT)诊断4医院: 版本: 试剂盒 科: 执行日期: 时间分辨免疫荧光分析法 室 共 3 页 第 2 页 标准操作规程 4.仪器(用户自备) 4.1 时间分辨荧光分析仪; 4.2 微孔洗涤机; 4.3 微孔振荡器; 5.操作步骤 5.1. 试剂的准备 ?洗涤液:将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液。 ?加入1.0ml蒸馏水于各冻干校准品小瓶中，待校准品充分溶解(至少静置30分钟)。 ?将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温(20,25?)。 ?使用前一小时内，按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记(1:100)(详见操作流程图) 5.2(吸取25μl校准品和待测样品，加入反应板微孔内。 5.3(在各微孔内加入150μl已稀释的铕标记溶液，在室温(20,25?)下慢速振动1小时。 5.4(洗板6次。将板条在洁净无尘的吸水纸上拍干。 5.5(在每个微孔内加入150μl增强液，于慢档振板5分钟。 5.6. 确定微孔反应板已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。 6.计算 结果测定: 用新波公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪(1230、1234、1420,等)测量 7(临床意义 血液循环中的T大部分与蛋白质结合，只有约0.03%呈游离状态。游离T(FT)与总T4444在血液中浓度保持相对恒定，以维持其正常的生理功能;因此，FT的浓度高低能较准确地反4 应甲状腺功能状态，并且不受血液中甲状腺激素结合蛋白浓度及结合力改变的影响。 甲状腺机能亢进和甲状腺机能减退一般分别引起血清FT浓度的升高和降低。甲状腺4 激素不敏感综合症、低T综合症、药物和某些非甲状腺疾病可能引起FT浓度升高;而34慢性活动性肝炎、原发肝汁性肝硬化等可能引起FT浓度降低。 4 血清游离甲状腺素(FT)诊断4医院: 版本: 试剂盒 科: 执行日期: 时间分辨荧光免疫分析法 室 共 3 页 第 3 页 标准操作规程 8(参考值 本试剂盒FT浓度正常值范围为6.6,24.8pmol/L。各实验室建立自己的正常4 值范围。 9(注意事项 9.1 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 9.2 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘 土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。 9.3 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。 9.4 振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。 9.5 微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应 进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的， 洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。 9.6 吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增 强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。 9.7 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。 9.8 宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。 9.9 封片不能重复使用。 9.10 如需稀释标本，请用小牛血清稀释。 9.11 所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程 操作。 9.12 如对实验结果有疑问，应重复试验。 9.13 为保证实验的准确性，处理后得到的血样应不含纤维蛋白、红细胞、血脂等， 并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。 9.14 本试剂盒应置2—8?保存，有效期参考瓶上所贴标签。