沙门氏菌检测流程 文档

沙门氏菌检测流程 文档 伤寒、副伤寒沙门氏菌检验的操作程序 【目的】指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。 【标本的采集】 由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。 【检验程序】 采便?分离培养?挑选菌落接种三糖铁斜面?生化试验?血清学试验?结果。 【操作步骤】 1. 分离培养 用棉棒直接划线接种SS平板，36?1?培养18-24小时，观察菌落特征。伤寒及副伤寒沙门氏菌在SS平板上均呈无色半透明、光滑的中等菌落，菌落中心有黑心，但甲型副伤寒及部分伤寒沙门氏菌菌落无黑心。 平板上若有可疑菌落，挑选出来分别接种三糖铁斜面。将接种可疑菌的三糖铁斜面经36?1?培养18-24小时后，观察反应情况。 2. 生化学试验 凡是三糖铁反应符合伤寒、副伤寒沙门氏菌特征者，作靛基质试验，尿素酶试验，KCN试验和赖氨酸脱酸酶试验。符合者做血清学试验。 伤寒、副伤寒沙门氏菌三糖铁反应结果 菌株 底层 斜面 HS 产气 2 伤寒菌 产酸 无改变或产碱 + - 甲型副伤寒 产酸 无改变或产碱 - + 乙型副伤寒 产酸 无改变或产碱 + + 丙型副伤寒 产酸 无改变或产碱 + + 伤寒、副伤寒沙门氏菌生化反应结果 菌株 靛基质 尿素酶 KCN 赖氨酸 伤寒 - - - + 甲型副伤寒 - - - - 乙型副伤寒 - - - + 丙型副伤寒 - - - + 3. 血清学试验 ? 抗原准备 取三糖铁斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 ? O抗原的鉴定 按下列顺序进行: A-F————?0-2————?0-4————?0-7————?0-9 多价血清 血清 血清 血清 血清 ? ? ? ? ? -? A群 B群 C群 G群 ? - Vi————?菌悬液———————?0—9——?0—7血清 血清 100?水浴20分钟 血清 +? +? ? 可能为伤寒菌 可能为丙型副伤寒 ? H抗原的鉴定 根据O抗原出现的凝集情况，选用相应的H因子血清、检查第1相与第2相H抗原，如果第2相抗原不凝集，可用位相变异试验检查。 位相变异试验方法可采用简易平板法:将0.5-0.7,半固体琼脂平板烘干表面水份，取因子血清1环，滴在平板表面，待血清吸收到琼脂内，便在血清部位的中央点种待检菌株，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。 伤寒、副伤寒沙门氏菌抗原构造 H抗原 群别 菌株 O抗原 第1相 第2相 A 甲型副伤寒 1、2、12 a ,1、5, B 乙型副伤寒 1、4、,5,、12 b 1、2 C 丙型副伤寒 6、7、,Vi, c 1、5 D 伤寒菌 9、12、Vi d — 注:, ,有的菌株有此抗原 4. 菌型的判定和结果报告 综合以上生化学试验和血清学分型鉴定的结果，判定菌型，报告结果。 【质量控制】 1. 本程序所用的培养基及试剂依据中华人民共和国国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分(GB4789-84)规定的方法配制的，或由省食品卫生监督检验所，省卫生防疫站推荐的合成培养基。 2. 增菌及分离必须保证一个一支增菌管，一块平板，禁止多人一管，多人一块平板。 3. 分离平板时平板一半以上应有孤立菌落，以供挑选。