人肾近曲小管上皮细胞

人肾近曲小管上皮细胞 人胃癌顺铂耐药株 细胞描述: 源于人胃癌顺铂耐药株 ，表达核v-myc、染色体v-raf 癌基因，表面表达env gp70 抗原，在形态学、表型及功能上有吞噬细胞的特征 人胃癌顺铂耐药株 增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正 确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进 行。 规格 培养基 运输 保存 6复苏运输 液氮保存 1×10个/管 RPMI1640+10% FBS 质量控制: 本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体。 培养条件:37?，5% CO，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。 2 用途: 本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。 细胞相关操作(注意:细胞操作都需严格按照无菌操作) 收到复苏好的贴壁细胞的处理方法: 1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜; 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉; 2. 3. 将培养瓶置于37?C，5% CO的无菌培养箱中培养4-6小时; 2 4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基; 5. 重新将培养瓶置于37?C，5% CO的无菌培养箱中培养过夜 2 6. 第二天传代。 收到冻存细胞的处理方法: 1.37?C水浴预热培养基; 2.从液氮中取出细胞迅速放入37?C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞); 3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min; 4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀; 5.置于37?C，5% CO培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧); 2 6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。 细胞传代 1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代; 2.37?C水浴预热培养基; 3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞; 4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化; 5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散; 6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min; 7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁 425后融合度在25-50%之间)，细胞密度在1×10 cells/cm (2.5×10 cells/T-25瓶)，混匀细胞悬液，确保均匀 分布; 8.将培养瓶置于37?C，5% CO的无菌培养箱中培养。 2 细胞冻存 1.37?C水浴预热培养基; 2.消化细胞后给细胞计数: 1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区; 2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳; 3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色; 4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2; -433这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10cm计数池内，1cm=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。 5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。 注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。 3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。 4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min。 65.弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×10/ml。 6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。 7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20?C放1-2h后，-80?C过夜，然后快速转移到液氮中。