甲胎蛋白（AFP）检测作业指导书医学检验

甲胎蛋白（AFP）检测作业指导医学检验 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明》 《Procedure circulation form》 甲胎蛋白检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 文件名称: 已阅声明:本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 (I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure) 阅读人签名表 姓名(NAME) 职务(POSITION) 签名(SIGNATURE) 签名日期(DATE) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 审批人 批准生效日期 页码内容更改说明(Description of NO. (Approved (Approved (Page) Modified contents) by) date) 1 换版 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03•02•04 文件名Title of Doc 甲胎蛋白检测作业指导书(KM-SOP0300•326) (Doc. Code) 版本号(Edition No.) Edition 3.0 生效日期(Operative 2008-03-13 date) 文控部门 实验室文控室 (Doc. Control Dept.) 回顾日期(Review 回顾人员签名( Signature ) 回顾日期/签名 date) (Review date /signature ) 替代文件(Replaces) 甲胎蛋白检测作业指导书(Edition2.0) 存放地点(Location)/No. Location (Holder) No. Location (Holder) 1 诊断部文控室(陈彬) 持有人(Holder) 2 发光室(段学成) 作者签名/日期李卫鹏 (Author signature/date) 审批人签名/日期陈建波 (Authorized by : Signature/Date) 接收人签名/日期 (Receiptor/Date) 副本数(Copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 甲胎蛋白(AFP)检测作业指导书 (Standard operation procedure of AFP analysis) 1.原理(Test principle): 微粒子酶免分析法(MEIA):标本与微粒子于一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其他不要成分，将碱性磷酸酶的共轭体加入纤维杯中与抗原-抗体复合物反应，反应的第二阶段终了后，再次冲洗，将未反应的第二抗体除去，加入基质液，基质液被碱性磷酸酶分解成MU，当该生成物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的变化率，从而决定被测物质的浓度。并用测初速度法代替终点法，提高了结果的准确性。 2.样本收集和储存(Specimen Collection and Storage): 样本收集(specimen collection):类型(type):血清(serum);用量(volume)200μL，仪器加样量(sample volume )100μL。 拒收标本(specimen rejection):EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血标本拒收 标本储存条件(sample storage):室温(room temperature)保存8小时; 2-8?7天; -20?3个月;十天后处理标本。 其他(others):为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。 3.试剂(Reagent): 3.1美国AXSYM ABBOTT原装试剂。 3.1.1试剂内组份(components): 试剂包装，100个检测 AxSYM 甲胎蛋白试剂包装(编号 7A48,22) 1瓶(7.0毫升)在含有蛋白稳定剂的TRIS缓冲液中的抗,甲胎蛋白(小鼠，单克 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 隆)包被的微粒。防腐剂:叠氮化钠。(试剂瓶1) 1瓶(13.2毫升)抗,甲胎蛋白(小鼠，单克隆):在含有蛋白稳定剂的TRIS缓冲液中碱性磷酸酶共轭体。最低浓度:0.05µg/mL。防腐剂:叠氮化钠和抗菌剂。(试剂瓶2) 1瓶(23.6毫升)含有蛋白稳定剂的样本稀释液，磷酸盐缓冲盐液小牛血清。防腐剂:叠氮化钠和抗菌剂。(试剂瓶3) 1瓶(45.2毫升)样本稀释液(用于自动稀释)，磷酸盐缓冲盐液小牛血清。防腐剂:叠氮化钠和抗菌剂。(试剂瓶4) 编号7A48-66包括一个AxSYM 甲胎蛋白试剂包装(100个检测)，反应容器(每个100个试剂包装)以及纤维杯(每包装100个)。编号7A48-22包括这些用于国际运输的项目。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 9C05-10 甲胎蛋白质控品 9C05-01 甲胎蛋白品 7A48-30 AxSYM甲胎蛋白主标准品 9C46-50 AxSYM甲胎蛋白样本稀释液 8A47-04 溶液1 MUP 8A81-04 溶液3 纤维杯洗液 8A46 溶液4 line 稀释液 9A35-05 雅培探针清洗液 8A76-01 样品杯 其它必需:蒸馏水或去离子水、实验试管。 3.2 试剂准备:将试剂从冰箱中取出并平衡至室温;不同批号的试剂不能混用;新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time;New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 the new lot of reagent has maintain consistent results for patient specimens。Record the results。 4.仪器(Instrument):美国 AXSYM ABBOTT 仪器准备(prepare apparatus):使用前将仪器的液体与固体垃圾清空;加入足够的蒸馏水、1液、2液、3液、纤维杯、RV杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5.安全防范(Safety Precautions): 操作时必须穿戴手套和工作服;工作后的台面应消毒擦洗;用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理;为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间;遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6.校准(Calibration): 6.1校准品:美国AXSYM ABBOTT原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8?可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material 。 Use it within expiration date，storage in 2-8 ?。 复溶:用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于,20?冻存备用。Label confecting date ，calibration lot 。person who confected，expiration date 。 复溶后校准品成分的稳定性:保存于15~25?，可稳定8小时 保存于2~8?，可稳定2天 保存于(-15)~(-25)?，可稳定1个月(不可反复冻融)。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准:(If one of the two happened，recalibration) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 ?试剂批号改变(Reagent lot changes) ?根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) 6.3步骤:将试剂盒放入试剂转盘后，在ORDER LIST内申请校准，采用专用条码样本杯座，将校标液(每杯7滴)按指定位依次放入样本架，开始校准。(非新试剂盒不做此步)。 每个样品杯至少加入样品184ul。将样本杯按仪器指定位置放好后，按“RUN”键开始。 校准结果判断标准:雅培系统对检验校准的结果是否符合有效参数的规定值进行验证。若校准成功，仪器Message一栏会显示The calibration is passed的信息。如果校准不符合规定值，仪器会报告错误信息。有关对错误代码的纠正措施可见雅培系统操作手册第10单元。 校准周期(Frequency of calibration):两周(two weeks)。 7.操作过程(Procedural Steps): 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。 7.2取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul。(样本用量184ul)交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。 7.3进入ORDER LIST，在Patient(F6)中指定样本位置，输入项目，输入完毕以后按F1退出，核对实验项目准确无误后点击RUN运行。结果出来后，在菜单RESULT中按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 数据联机入系统: 计算机:设备管理?接口管理?点击雅培化学发光仪?点击“接收”?出现接收窗口?仪器?Result?点击select all?点击Print?点击Release?回到计算机的接收窗口。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 数据审核:联机是否正确,实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。 8.质量控制(Quality control): 使用雅培TMC质控物做室内质控。当室内质控失控时，重取质控品重新检测一次;若室内质控仍不能满足要求，则检查校准是否过期，重新校准，再检测室内质控;仍不能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。室内质控操作过程:从冰箱冷冻 ，上机操作同日格拿出的分装质控品必须放置室温半小时以上，每次用量至少184ul常标本。甲胎蛋白最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为9.03%(低)、9.83%(高)，偏移为11.0%,过程稳定性<2%.根据公式:?SEc=(ALE-Bias)/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 1/2/R/4 N=2; 高值选择的质控规则1/2/R/4 3s2s4s1s3s2s4s1sN=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理 9.计算(Calculations):N/A 10.参考范围(Expect Values):低于10.9ng/mL 11.结果解释(Interpretation of Results): 11.1 ASxSYM 甲胎蛋白如果能与临床评估信息以及诊断操作中得出的信息结合起来使用，则可以对nonseminomatous睾丸癌患者的管理起到很好的辅助作用。在共济失调毛细血管扩张，遗传性酪氨酸血症，原发性肝细胞癌，畸胎癌，有无移位变化的胃肠道癌，以及诸如急性病毒性肝炎，慢性活动型肝炎和肝硬化等良性肝疾病中，也能够观察到甲胎蛋白血清浓度的升高。 11.2 接受了小鼠单克隆抗体制剂用于诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人抗鼠抗体(HAMA)。用使用了小鼠单克隆抗体的检测试剂盒进行检测时，就会得到错误的升高或降低的值。这些样本不应该使用AxSYM 甲胎蛋白检验方法进行检测。 在进行羊水检测后，不能对母体血清或血浆中的甲胎蛋白做出有效检测，因此，必须在羊水检测前抽取母体血清或血浆。详细说明，见本检测包装说明书中的“样本采集”。在出生前检测的MSAFP评估的可靠性，取决于对妊龄的准确判断。如果对妊 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 龄估计过高，可能会导致对MSAFP值的错误解读，因此就会低估NTD的危险。如果低估了妊龄，所导致对MSAFP值的错误解读也可能导致对NTD的评估过高，而决定去进行不必要的额外检测。如果对妊龄无法确定，则必须进行可靠的超声波检测。 11.3 在MSAFP水平升高NTD危险程度上升时，不能做出诊断。已经在上述癌症和非恶性疾病中发现甲胎蛋白血清浓度上升，也就意味着可能存在母体疾病。其他疾病包括胎盘畸形，开放性胎儿畸形，如脐突出或腹裂(腹壁缺失)，胎儿肾脏畸形，有流产危险或即将流产，以及死胎等都与MSAFP水平升高有关。MSAFP水平升高还与早产和低出生体重有关，这一点已在多个新生儿中观察到。个别单胎，有存活能力且没受影响的妊娠也会表现出MSAFP水平上升。甲胎蛋白检测过程的基本组成部分是确认检测，如用于AFAFP评估的羊水检测，高分辨率的超声波扫描或羊膜腔造影术以及羊水乙酰胆碱脂酶。 12.方法的局限性(Method Limitations): 12.1精密度(Precision): 12.1 Mean SD CV (H) 40.62 3.19 7.85% 批间 (L) 5.4 7.94 12.9% 批内 76.27 0.7 6.52% 12.2灵敏度(Sensitivity):0.4ng/mL 12.3特异性(Specificity):不可用于检测其它体液标本;接受过鼠单克隆抗体者，标本不可测定;严重溶血标本不可测定;羊膜穿刺诊断使血标本结果升高。 12.4分析测试范围(AMR):0.31-329.09mg/L 12.5稀释:当仪器显示样本结果超出(AMR)时，可用去离子水稀释100倍检测。 12.6病人结果报告范围(CRR):0.31-329090 mg/L 12.7干扰物质(Interfering Substances): 胆红素影响(bilirubin):样本中胆红素的浓度直至200mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。 溶血影响(hemolysis):样本中压积红细胞的浓度直至30ul/mL，在检测允许的精密 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13) 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?326 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 度范围内对结果没有影响。 脂血影响样本中甘油三脂的浓度直至5000mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 12.8注意事项(Notices)。血清、羊水。其它抗凝标本、其它体液标本拒收;接受过鼠单克隆抗体者，标本拒收;严重溶血标本拒收;血标本采集应在羊膜穿刺诊断前。 13.临床意义(Clinical Significance): 升高见于:原发性肝细胞癌约有77.1%的患者AFP>300ug/L,但也有18%的人可无任何升高。病毒性肝炎、肝硬化患者AFP有不同程度升高，但其水平常小于300ug/L.生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP可见升高，如睾丸癌、畸胎瘤等。妇女妊娠3个月后，血清AFP开始升高，7-8个月达到高峰，一般在400ug/L以下，分娩后三周恢复正常。孕妇血清中AFP异常升高，应考虑有胎儿神经管缺损的可能性。 14.参考文献(References): 1) 实验诊断学 /王鸿利主编-北京:人民卫生出版社，2001: 2) AXSYM ABBOTT AFP 试剂说明书 3) 中华医学检验全书 4) AXSYM ABBOTT操作说明书 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/10 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/10 甲胎蛋白检测作业指导书(2008-03-13)