HIV抗体确证试验假阳性1例分析

HIV抗体确证试验假阳性1例分析 HIV抗体确证试验假阳性1例分析 2008年2月第3卷第2期 February2008,Vo1.3,No.2 HIV抗体确证试验假阳性1例分析 梁彩云,徐慧芳一,高凯,李泽荣,韩志刚,李燕 (广州市疾病预防控制中心,广东广州510080) * ? 论着? 【摘要】目的通过对1例艾滋病病毒(HIV)抗体确证试验阳性者进行随访检测,探讨目前HIV抗体筛查和确证检测 技术存在的问.方法对受检对象进行HIV抗体筛查和确证试验.并于3,6个月和1年随访检测.结果首次 筛查试验PA试剂为阴性.第3代梅里埃E1ISA试剂为阳性,确证试验WB试剂检测带型gpl20p24,判为HIV一1抗体阳 性.比较试验第4代梅里埃E1ISA试剂为阳性,金豪,吉比爱E1ISA试剂为阴性,雅培硒标试剂为弱阳性.病毒载量 检测结果为阴性.3次随访检测,筛查试验结果与首次检测基本一致.确证试验带型分别为gpl20p24,p24和p24p55,1 年后的病毒载量检测结果为阴性,受检对象随访后结果定为阴性.4次血样集巾检测显示,筛查试剂批问无明显差异, 但不同试剂间有差异;确证WB试剂不问批号问带型存在差异.结论目前应用的WB确证试剂存在一定的批间差 异,对弱阳性带型或阳性带型不常见的.需更换试剂批号重复进行确证检测;确证试验结果处于临界阳性状态者需 进行流行病学史渊查;WB确证试验若同时观l条env带和p24带判为HIV抗体不确定,并进行随访. 【关键词】艾滋病病毒;HIV抗体检测;假阳性 【中图分类号】R373.9【文献标识码】A【文章编号】l6735234(2008)020100—04 [JournalofPathogenBiology.2008Feb;3(2):100103.] Analysisoffalsepositive-reactioninonecaseofHIVantibodyconfirmatorytesting LIANGCai—yun,XUHui—fang,GA()Kai.IIZe—rong,HANZhi— gang,IIYan(GuangzhouCenterfor DiseaseControlandPre'uention,Guangff]7Otl510080,(,^ina) [Abstract]ObjectiveToexplorethetechnicalproblemsoftheHIV— Abtestincludingscreeningandconfirmatorytes—— tingfollowingupaHIV— Abpositivecase.MethodsAntibodyscreeningandconfirmatorytestswerecarriedoutonthe subjectat3.6,12months.Results()ftheinitiatetesting,negativereactionoccurredwithPA(SFDHIV1/2)while positivereactionoccurredwithvironostikaAb—EIA.ThustheHIV— lantibodywaspositivebasedonconfirmatorytest whichshowedthetypeofWBbletwasgpl20p24.Ofthecomparativetesting,positivereactionalsooccurredwithviro nostikaAg/AbEIAwhilenegative— reactionwithkinghawkEIAandGBIEIA.Inaddition.DainabotDetermine(HIV1/2) metwithaweakpositiverecationandthevirusloadwasnotdetected.Ofthe3testingsoffollow—up,thescreeningtes— tingmetthesameoutcomeoftheinitiatetesting.thetypesofWBhletweregpl20p24,p24andp24p55respectively,and virus— loadofthelastsamplewasnotdetected.ThereforetheresultofHIVlantibodynegativewassummedout.Ofthe total4tests,screeningtestingmakesdfferenceamongnottheseriesbutthebrandofreagent,whileconfirmatorytesting makesdfferenceamongtheseries.ConclusionFhereissomedifferenceamongtheseriesofre agentintheconfirmato— rytesting,sothatthecomparativetestingandre—testingshouldhecarriedoutasthesamplewithweakoroddpostivere— actionisconcerned.Epidemiologyinvestigationshouldbecarriedoutwhentheresultturnedt obecritical;uncertaintyof HIV—Abhappenedwhenoneenvbeltwithp24appearedatthesametimebyWBconfirmatorytest.a ndfollowupthesub ject. [Keywords]HIV:HIV—Abtest:falsepositivereaction 目前我国艾滋病的诊断是以HIV抗体检 测结果作标准.HIV抗体检测分筛查试验(包括初筛 和复核)和确证试验两步.筛查试验以第3和第4 代酶联免疫吸附法(E1ISA)为主,还包括明胶颗粒凝 集试验(PA),胶体金法,胶体硒法等.确证试验国内 普遍应用蛋白免疫印迹法(WB).随着艾滋病疫情不 断发展,艾滋病人群覆盖面逐步扩大,检测人群的种类 和数量随之增多,致使标本来源变得复杂化,对现有 HIV抗体检测技术不断引发新的挑战,如"抗体不确 定"结果不断增多等.作者等对2006年发现的l例 HIV抗体确证试验假阳者进行了随访检测分析,旨在 为HIV感染诊断提供参考. 对象与方法 1对象 【基金项目】,州市医药卫生科技重点项目(No.2007一ZDi一 08);广州市医药卫生科技一般引导项目(No.2007一YB-123). 【作者简介】梁彩云(1971一),女,广东肇庆人,本科.主要从 事艾滋病预防与控制工作.E—mail:yshley2005@yahoo.corn.cn *$【通讯作者】Email:Xuhuifangl027@21cn.corn 士心g杂 学B 物 生 原, 病 国n 中几 中国病原生物学杂志 JournalofPathoggnBiology 2008年2月第3卷第2期 February2008,Vo1.3,No.2 受检者为女性,年龄22岁,未婚,在校大学生,就 业体检时作HIV抗体筛查疑似阳性.本人自述无 HIV感染高危行为.采集血样作HIV感染筛查试验 和确证试验. 2抗体检测方法 2.1筛查试验抗体检测采用酶标法和明胶颗粒凝 集试验,采用的试剂包括第3代梅里埃EIISA试剂 (批号为A56BE/A46HC/A47BD/A47DA),第4代梅 里埃EIISA试剂(批号为A56BE),金豪ELISA试剂 (批号为20051201/20060901),吉比爱ELISA试剂 (批号为20051106/2006O3O6/2O06O515/20060812/ 20061012),科华EIISA试剂(批号为20060321)和日 本富士明胶颗粒试验PA试剂(批号为MZ5O8O8/ MZ51112/MZ60302),雅培硒标试剂(批号为 35500U100/44373U100),按试剂盒说明操作. 2.2确证试验应用新加坡GenelabDiagnostics公 司HIVBlot2.2WB试剂盒(批号为AE6003/ AE6013/AE6022/AE6026/AE7001),按试剂盒说明 书操作.按照《全国艾滋病检测技术规范》(2004年) 标准判断.筛查和确证试验均按试剂盒说明书操作. 2.3辅助试验应用美国RocheAmplicorRT—PCR 试剂盒检测病毒载量,按试剂盒说明书操作. 3复查 分别于首次检测后3个月,6个月和1年随访,采 集血样,放置一8O?保存,用同样方法进行复查. 结果 1首次检测结果 1.1抗体检测结果用日本富士明胶颗粒PA试剂 盒和第3代梅里埃EIISA试剂盒同时做筛查检测,用 HIVBlot2.2WB试剂盒进行确证,结果见1和图 1,按照《全国艾滋病检测技术规范》(2004年)判定标 准判为HIV一1抗体阳性. 1.2补充检测结果由于受检者明确无性接触史,静 注吸毒史,输注血液或血制品等与HIV感染有关的高 危行为,为慎重起见,作病毒载量检测,同时作抗体检 测方法学比较,包括HIV抗体筛查比较试验和病毒载 量辅助检测.结果见表1. 表1HIV感染检测结果 Table1ResultofHIVtestsincludinginitiateand~llow—up 2复查结果 为排除假阳性和"窗口期"感染的可能,按照《全国 艾滋病检测技术规范》(2004年)要求对其作追踪随 访,分别在3个月,6个月和1年采血,用同样方法复 检(表1).3次筛查试验结果与首次检测一致,WB确 证试验带型分别为gp120p24,p24和p24p55(图1),病 毒载量检测为阴性.根据《全国艾滋病检测技术规范》 判定为HIV抗体阴性,即该女学生没有感染HIV. 3筛查试验比较 4次检测,使用的试剂批号不同,但同试剂不同批 号间结果一致,其中Et本富士明胶颗粒试验PA,金豪 ELISA,吉比爱ELISA检测结果为阴性,第3,4代酶 里埃ELISA和雅培硒标方法检测结果为阳性. 4集中检测结果 中国病原生物学杂志 JournafolPathogenBiology 2008年2月第3卷第2期 February2008,Vo1.3,No.2 为了解不同试剂间和同试剂不同批号问的检测差 异,收集首次,3个月,6个月和1年后4次采集的血 样,同时用上述抗体检测试剂检测,结果见表2.其中 日本富士明胶颗粒试验PA,金豪ElISA,吉比爱 ElISA,科华ElISA试剂检测为阴性.第3,4代酶里 埃ElISA和雅培硒标试剂检测为阳性.除科华 ElISA试剂外,均与表1结果一致.比较3种批号 HIVBlot2.2wB试剂检测结果,同批号试剂检测带 型一致.但不同批号试剂检测却出现不一致的带型(表 2,图2). 表24次采集的血样集中检测结果 Table2Resultsoftheparalleltestingofthesamplescollected4times I10 iI,c 二17(: 0 3m 6m l, SP(: 'PC C l 2 3 图23种批号WB试剂检测带型 Fig.2WBbeltTypeswith3differentlutnumbersofreagent inconfirmatorytesting 讨论 本实验室自2004年成立为HIV抗体确证实验室 以来,一直按照《全国艾滋病检测技术规范?检测程序 要求和结果判定标准,对检测对象进行检测和报告结 果.随着艾滋病疫情由吸毒,性乱人群向各普通人群 蔓延,检测工作覆盖面逐步扩大,标本来源变得复杂 化,筛查试验假阳性现象增多,确证试验不确定结果逐 年增多,且在本实验中首次发现了确证假阳性标本. 本次实验的检测对象在首次HIV抗体检测确证 试验出现2条弱带gpl20p24,被判为HIV一1抗体阳 性,但由于没有相关高危行为,且追踪1年确证试验带 型没有进展,加之病毒载量检测结果阴性,最终确定为 HIv抗体阴性,即没有感染HTV.但用筛查试验对首 次,3个月,6个月和1年后4次采集的血样检测中,第 3,4代梅里埃ElISA结果均为阳性,且s/co比值较 高,均接近或>6.0,雅培硒标试剂法均为弱阳性,而日 本富士明胶颗粒PA试剂,金豪,吉比爱和科华 ElISAi式剂法均为阴性.由于同一试剂对4次血样 的检测结果相同,且酶联方法s/cO比值接近,说明该 检测对象是特异体质者,随访调查中得知,该女生有过 敏性体质.目前国产或进口HIV抗体筛查试剂有数 1O种之多,由于各类试剂检测原理不同,选择的固相 抗原位点不同,制作工艺不同,造成检测的敏感性和特 异性不同.筛查实验室的检测策略是在筛查检测中选 择敏感性高的试剂,避免漏检.确证实验室的检测策 略是选择敏感性和特异性均高的试剂,避免漏检或假 阳性结果的出现.但由于检测试剂的批间差异,质量 中国病原生物学杂志 JournalofPathogenBiology 2008年2月第3卷第2期 February2008,Vol,3,No.2?1O3? 的不稳定性,试剂本身的特性及人群体质差异等因素, 难免会出现漏检或假阳性结果.本实验不同筛查试剂 的检测结果不一致,可能是各类试剂包被的抗原位点 不同造成的,有待进一步探讨. 该检测对象的首次WB确证检测带型是2条弱带 gpl20p24,此类带型在本实验是首次出现.在对4次 采集的血样集中检测中应用3种批号HIVBlot2.2 WB试剂,分别是AE6022,AE6026,AE7001,发现同 一 批号试剂检测带型一致,不同批号试剂检出的带型 不同,相应为p24,p24p55,gpl20p55p24,表明WB确 证试剂存在批间差异.目前国内可供选择的确证试剂 只有新加坡GenelabDiagnostics公司生产的HIV Blot2.2WB试剂盒,尚无其他可选择的确证方法作 比较.而且本实验在近几年的确证检测中出现越来越 多的不确定结果,经随访后有许多受检对象最终被排 除HIV感染,国内其他实验室也有此类报道]. 艾滋病实验室检测是重要的环节,检测结果的不 准确或不确定性都会导致许多负面影响. 因此,针对目前艾滋病抗体筛查和确证检测现状, 作者提出几点建议:1)对筛查试验出现阴性或阳性不 一 致结果,或筛查试验均阳性,而确证结果处于临界阳 性状态者需进行流行病学史调查,并结合流行病学史 作最终结果判定;2)对确证结果处于f临界阳性状态且 带型为弱阳性或阳性带型少见者,建议更换其他批号 WB试剂重复检测;3)WB确证检测结果若同时出现1 条env带和1条p24带应判为HIV抗体不确定,出具 "HIV抗体不确定"报告,并定期随访.目前国内可选 用的确证试剂盒单一,确证试验假阳性风险加大,希望 尽快研发或引入更多高质量的HIV抗体确证试剂供 实验室选择. 【参考文献】 E1]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范[c].2004. [2]黑发欣,张启云,孙伟东,等.HIV抗体筛查实验阳性确认实验可 疑和阴性标本的对比分析[J].中国艾滋病性病,2006,12(1):4 6. 【收稿日期】2007—07—03【修回日期】2007—09—10 ? 病例报告 鼠疫误诊1例 魏荣杰 (青海省地方病预防控制所,青海西宁8?602) 【摘要】本文报告鼠疫误诊死亡病例1例.经尸体剖检,血清学和细菌学检验,流行 病学调查确诊后按照人间鼠疫疫区 处理标准及原则(GB15978—1995)进行处理. 【关键词】鼠疫;误诊;病例报告 【中图分类号】RSl6.8【文献标识码】D【文章编号】1673—5234(2008)02—0103—01 [JournalofPathogenBiology.2008Feb;3(2):103,99.] OnemisdiagnosedcaseofPlague wEIRong— jie(QinghaiInstituteforEndemicDiseasePreventionandControl,Xining811602.China) [Abstract]ThearticlereportedonemisdiagnosedcaseofPlaguethathaddied.Thecasewasm adeadefinitediagnosis throughtheautopsy,serologyandetiologyexamination,epidemiologyinvestigationthenthe epidemicsituationwaspro— cessedbyThestandardandprincipleofhumanplagueepidemicsituationprocession(GB159 78—1995). [Keywords]Plague;misdiagnosis;casereport 患者,男,42岁,牧民.因"全身不适,咳嗽3d.加重伴胸闷 气短1d",就诊于当地县医院.患者入院前3d放牧时自感全 身不适,于入院前2d在村卫生室静点先锋铋并肌注安痛定(量 不详),未见好转.入院时查体:体温36.3?,脉搏123次/ min,呼吸24次/rain,血压100/70mmHg(1mmHg一0.133 kPa);神志清,烦躁,全身中毒症状;颜面和口唇发绀;结膜充 血,水肿,口腔粘膜光整,咽部充血,双侧扁桃体I度肿大;胸, 腹,背及四肢皮肤有大面积瘀斑,左手拇,食指有约1cm和1.5 cm陈旧伤口;双侧腹股沟皮肤暗红,未触及淋巴结肿大;双肺 呼吸音粗,左肺底可闻及细小湿哕音,心界扩大,心律不齐,心 音低弱,可闻及早搏;腹软,轻度压痛,无反跳痛;肝脾肋下未 及.实验室检查:血红蛋白12Og/I,血白细胞33.7×1O./I,中 性粒细胞96;尿隐血(+),尿蛋白(十十);便隐血(+),便白细 胞4,5/hp.心电图:窦性心动过速.胸部x线片:双肺纹理粗 而乱,左肺中下叶内带见大片絮状高密度阴影,双肺门阴影增 大,透光度增高.心影增大,左室增大明显.初步诊断:左肺肺 炎并心衰.给予吸氧,内科一级护理及抗炎,对症,利尿,强心 等治疗.患者病情加重并出现休克及呼吸衰竭等症状,经抢救 无效于当晚死亡.尸体解剖发现左侧腋下淋巴结肿大约4cm ×4cm,与周围组织粘连,活动性差;尸体材料作鼠疫细菌学检 (下转99页)