【doc】凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺致神经管畸形中的作用研究

【doc】凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺致神经管畸形中的作用研究 凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺 致神经管畸形中的作用研究 CH1NESEJOURNALOFANATOMYVo1.21No.11998解剖学杂志1998年21卷1期 卅 凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷 酰胺致神经管畸形中的作用研究 马保半壁至主柬卫半,/,6 搞薹目的:为摄讨凝集素受体在叶馥.雏生素C侍止环蔫酰胺馥大鼠胚胎神经譬畸形中的作甩.方法实验组 (升瞳,维生素C预防组)和对照组孕鼠均于精环礴酰胺后24小时剖照取胎.常规石蜡包埋切片,用刀豆凝集素,花 生凝集素和荆豆凝集素为分子掇针作亲台组织化学染色.对两组胚胎神经臂的神经上皮.界膜及神经臂周围问竟 质相应糖基进行定性?定位和半定量的比较观察.结果,对照组胚胎的刁豆凝集素和花生凝集素染色明星增强.说 嘲环蒜酰睦可使神经上皮细胞面相应的受体糖蛋白增高.从而干扰了神经上皮的正常细胞增殖,迁移,粘着和讽 别过程?导致神经臂畸形.结论实验组的染色明显弱于对J曙I组.说明叶瞳.维生素C可抻尉相应的受体糖蛋白的异 常增高.从而使神经上皮的正常纲矗增殖,迁移等过程不受明显髟响,防止神经昔畸形的发生.. 关-词芝竺;苎墨墨;大鼠)i错叶敲 研究证明.环鳞酰胺有强烈致大鼠胚胎神 经管畸形和骨骼发育异常等作用,正常对照组 的畸形发生率为0}环鳞酰胺组神经臂畸形发 生率为98.3E1,z3.而叶酸,维生素C有明显拮 抗环磷酰胺的致畸和促进胚胎生长发育作用. 其神经营畸形的发生率为10.6,与环鳞酰胺 组比较差异显着.组织切片显示,它们主要促进 神经管的神经上皮细胞增殖,以及时修复环鳞 酰胺所造成的损害].本研究利用刀豆凝集素 (ConA).花生凝集素(PNA)和荆豆凝集素 (UEA)为分子探针,对两组胚胎神经臂和周围 问壳质的相应受体进行定性,定位和半定量的 比较研究,以探讨其凝集素受体的变化及叶酸, 维生素C预防神经管畸形的作用机理. l材料和方法 1.1标本制备未经产雌性SD大鼠20只 (山东医科大学实验动物中心提供),体重180g , 250g.雌,雄按2.1台笼过夜,次日晨作阴 道涂片,查出精子者定为受精第1天.将孕鼠随 机分为对照组和实验组.对照组10只,于受精 第13天一次性腹膜腔注射CP15mg/kg,使其 42一 致神经管畸形.实验组10只,在给CP前先灌 服叶酸60mg/kg,肌肉注射维生素C125mg/ kg}然后再注射环鳞酰胺,时间与剂量同对照 组.两组孕鼠均于给环鳞酰胺后24小时(受精 后l4天)剖腹取胎,常规石蜡包埋,连续切片厚 5lam.试剂:叶酸和维生素C由济南第三制药 厂生产.环裤酰胺由上海第十二制药厂生产.生 物素标记ConA,PNA,UEA及ABC药盘由美 国Vector公司生产. 1.2卵白素,生物素,辣根过氧化物酶显示 ConA,PNA和UEA受体切片常规脱蜡, 10牛血清封闭20分钟,分别滴加ConA(10 ~g/m!),PNA(10~g/m!).UEA(20/~g/m1). 37?温育60分钟.漓加1:50卵自素结台 HRP,37?温育30分钟,DAB/H202室温显 色,每步骤间均用PBS冲洗3次,每攻5分钟, 苏木素复染.阴性对照组以PBS代替生物素标 记ConA,PNA,UEA.阳性部位呈棕黄色,根据 着色程度及密度分为阴性(一),弱阳性(+),阳 性(++)和强阳性(+++)4缀. 2结果 2.1刀豆凝集素染色对照组神经管上皮损 伤严重,核固缩,核碎裂多见.与实验组比较 ConA染色可见内,外界膜及神经管周围闻充 质着色均有增强;神经上皮着色显着增强.而实 验组神经管细胞损伤较轻,细胞排布密集整齐. 各部着色均不同程度弱于对照组(表1,图1, 2) 襄1刀豆簟素集色蝻暴 2.2花生凝集素染色对照组神经上皮的损 害办较严重;内界膜不规整,着色带较宽;神经 上皮着色明显强于实验组者.实验组的内,外界 膜及神经管周围间充质着色均弱于对照组}神 经上皮着色显着弱于对照组(表2,图3,4). 裹2花生簟素集色蝻暴 2.3剂豆凝集素染色对照组和实验组神经 管各部位和神经管周围间充质染色均呈阴性. 3讨论 3.1细胞粘着靠细胞膜上的糖蛋白分子完成, 称粘着分子这些糖蛋白分子寡糖链在细胞间 的粘着,识别,相互诱导,细胞分化氇日胞与基质 的粘着和细胞迁移等起重要作用].正常情况 下,当细胞分裂增殖及迁移活跃时,细胞表面的 粘着分子减少或消失r5}反之则增加.而凝集素 是探测细胞表面糖的主要探针,从而被用来揭 示细胞间和与周围基质的关系,分析这些细胞 的分化发育程度J. 3.2钟慧军等曾报道,环磷酰胺导致神经管畸 形主要是抑制神经上皮的细胞分裂和对其直接 严重损伤].本研究表明,环磷酰胺还可使神经 管的ConA和PNA受体糖蛋白明显升高,细胞 间的粘着增强,从而干扰神经上皮的正常细胞 增殖,粘着,识别和迁移过程,也是引起神经管 畸形的主要原因而叶酸,维生素C豫了有促进 神经上皮的细胞分裂,及时修复环磷酰胺所致 的损伤,使神经管的闭合按时完成外口],还可以 保护神经管各部的ConA和PNA受体糖蛋白 不异常升高.使神经上皮的正常细胞粘着,识 别,增殖和迁移过程不受明显影响,这是防止神 经管畸形的又一重要环节. 参考文麓 1钟慧军,高英茂.环礴酰艘对SD大鼠的致畸作用爱 神经管畸形形态发生的动态观察.解胡,1990, 21(1)lO7. 2栾世铁,武玉珍,马盘龙,等.叶酸.维生素C拮抗环磷 酰胺致大鼠胚胎神经管畸形的研究.山东医科大学学 报,1995.33(1):12. 3蔡文琴,王伯主编.实用免疫细胞化学与棱酸分子 杂文技术.成都:四川科学技术出版社,1994,128. 4AuberyM.Codog~oP.Roleofcellsurfaceglyco? proteinsinembryocelladhesiontoextracellular matix.BiochemSociTrans.1989,17:27. 5L|nne毋蚰nD.BkE.CeIladhe口nmoleculesin neuraldevelopment.DevNeurosci,1989,ll:49. THER0LE0FLECTINRECEPT0RSINF0LICACID ANDVITAMINCWHICHPREVENTSNEURALTUBEDEFECTS INDUCEDBYCYCL0PH0SPHAMIDEINRATS LuanShiqin,MaBaohua,ChertNaiwen,SongWeihua (DepartmentofHistologyandEmbryology, ShandongMedicalUniversity,dinah250012) InordertoexploretherolesoflectinreceptorsinfolicacidandvitaminCwhichprevents neuraltubedefects(NTD)inducedbycyclophosphamide(CP),pregnantretsinthetreatedgroup (folicacidandvitraminC)andthecontrolgroupweredissectedat24hoursafterbeinggivenCP. Theembryoswereroutinelyembeddedwithparaffinandsectionedinseries.TheConA,PNA, andUEAwereusedasmoleculeprobestoexploretherelated0Iig0sacchar{des— lectinreceptorsof theneuralepithelium?thelimitingmembraneandthemesenchymearoundtheneuraltubeanda comparativeobservationwasmadeontheirquality,distributionandsemiquantity.Theresults showedgreatstainintensityforConAandPNAinthecontrolgroup.suggestingthatCPcould increasethequantityofthereceptorglycoproteinsintheneuralepitheliumfthusinterferingwith thenorms[processofceltprotiferation?migration?adhesionandrecognition,andcausingne ural tubedefects.Stainingsinthetreatedgroupwassignificantlyweakerthanthatinthecontrol group?suggestingthatthefolieacidandvitaminCcouldinhibittheabnormalincreaseofthere— latedreceptorglycoproteins,andprotectthenormalprocessofcellproliferationandimigration fromtheinterferenceofCP.whichmightbeanotherimportantwayforfolicacidandvitraminC topreventneuraltubedefects. KeywordsneuraItubefdefectsIIectin;rats 解剖学杂志1998年2l卷1期 中国解剖学会1998年年会文摘汇编征订通知 中国解剖学会第十届会员代表大会暨1998年学术年会将于今年10月底1】月初 在广西南宁召开,参加大会的 编将由《解剖学杂志》编辑部负责出版发行,全书60万字,价格每本40元(古 邮寄费),于10月l5日发行.欲 订购的单位及个人可直接去邮局汇款至:上海市翔般路800号第二军医大学《解 剖学杂志硇辑部.邮编200433.截 止日期:1998年4月底. 《群翻学杂志》?辑部 —— 44