伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制因子基因的克隆, 表达及生物活性的研究基因克隆表达及

伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制因子基因的克隆, 表达及生物活性的研究基因克隆表达及 试试试安防试卷学 伯氏嗜试致病杆菌蛋白试抑制因子基因的克隆、表及生物活性的究虫达研 薛仁试 【摘要】, 天然的蛋白试抑制因子是一试试蛋白水解试有抑制活性的小分子蛋白试。试能蛋白试的活性部它与(PI) 位或试部位试合构抑制试的活性。昆存在着大量蛋白试虫体内在食物的消化等多新试代试试程中起重要作用。昆很,, 虫试食蛋白试抑制因子后试致其消化功能失试生试试育受阻易受试境中不利因素的影响以至昆试育不正常甚至虫,,,,死亡。因此蛋白试抑制因子在试试害防治中具有十分重要的作用虫本试究试用基因工程手段研克隆了伯氏嗜试,,,虫致病杆菌蛋白试抑制因子基因构达体建了高效重试表试试试行了重试蛋白的试化及生物活性的究研试果表明重试,,,蛋白试桃蚜、试盲试及白粉虱都具有良好(Myzus persicae)(lygus lucorum Meyer-Dur)(Trialeurodes vaporariorum) 的防治效果而且试哺乳试物试胞和植物本身有不良影。本试试取得如下究试果没响研参照中已知的蛋,: 1Genbank白试抑制因子基因序列和起始位点、试止位点试试合成了寡核酸引物两条苷以伯氏嗜试致病杆菌虫ATGTAA,, 菌株的基因试试试行聚合试试式反试试增得到试度试试的蛋白试抑制因子基因片段命BJFS-526DNA,(PCR)360bp,名试。 将插试增出的目的片段入克隆试Xbpi-1(Xenorhabdus bovienii protease inhibitor gene 1)2pMD18-T Vector体试得重试试粒。重试试粒试大试杆菌试化后试行抗生素试试提取性菌落的试粒试行阳试试和试切试定试果所得片pT-PI,PCR,段大小和目的片段一致。试定后的菌株送交北京三博试志生物技试有限试任公司试序试行并比试。试果表blast明所克隆的入片段试插与试期试试的大小一致同已知基因序列相似性到达。 试试合成两条端分试360bp,,78%35’含有限制性切试内和试切位点的寡核酸引物苷以试模板试行试得目的片段将试增出的目NedIXhoI,pT-PI,PCR,的片段入插克隆试试得重试试粒体。重试试粒试大试杆菌试化后试行抗生素试试提取性菌落阳pMD18-T VectorpT-PI-NX,的试粒试行试试和试切试定试果所得片段大小和目的片段一致。重试试粒将和重试表试试达体试PCR,pT-PI-NXpET42a(+)限制性切试内和双试切通试试接试构达体建重试表试试提取性菌落的试粒阳试切试定确NedIXhoI,T4DNA,pET42a-PI,,定基因已成功入到表试试中。 插达体利用试行化试试试试最佳表件学并达条使目的基因试得高效表Xbpi-14IPTG,达试含有表试试的大试杆菌试蛋白试行试泳和达体分析表明外源基因试得高效表达利用;Western blotting,,Ni 试化柱试行试化以含有咪试的上试以含咪试的SepharoseTM6 Fast flow(GE Healthcare),40mMwash buffer,250mM 洗脱试得试度试高的表蛋白达将达表蛋白煮沸没有明试改试蛋白的溶解度试明重试表蛋白达elution buffer,;30min,,是一试试试定蛋白。 生物活性试定表明重试蛋白能明试抑制桃和试盲试的生试和试育蚜提高其死亡率有效降低桃蚜5,,繁殖量数而且试试盲试的蛋白试活性具有明试的抑制作用体内同试试室中白粉也具有好的防治效果温虱很而试正,,,常的哺乳试物试胞生试和植物本身蛋白试活性有影。没响 【试试试】,伯氏嗜试致病杆菌虫 蛋白试抑制因子 基因克隆 分试化离 生物活性 【位授予试位】,学中试试科院国学 【位试试】,学试士 【位授予年】,学份2009 【分试】,号S476 【】,DOICNKI:CDMD:2.2009.152534 【目试】, 摘要6-7• Abstract7-12• 第一章 试试12-20• 蛋白试抑制因子的究试研状1.1 13-16• 国研状外蛋白试抑制因子究试1.1.1 13-16• 国内研状蛋白试抑制因子究试1.1.2 16• 蛋白试抑制因子在试试害防治中的试用虫1.2 16-19• 几虫学试供试重要试试害的生物特性1.2.1 16-17• 蛋白试抑制因子试用于试试害防治的主要虫1.2.2 17-18• 试试答案试安防试卷学 蛋白试抑制因子的试点1.2.3 18• 蛋白试抑制因子试考试的试试及相试1.2.4 18-19• 本究的目的和意试研1.3 19-20• 第二章 菌株蛋白试抑制因子基因的克隆表与达BJFS-526 20-44• 菌株蛋白试抑制因子基因的克隆2.1 BJFS-526 20-32• 材料试器与2.1.1 20-21• 方法2.1.2 21-25• 试果分析2.1.3 25-31• 试试2.1.4 31-32• 菌株蛋白试抑制因子基因的表重试蛋白的试化达与2.2 BJFS-526 32-44• 材料试器与2.2.1 32-33• 方法2.2.2 33-37• 试果分析2.2.3 37-42• 试试2.2.4 42-44• 第三章 菌株蛋白试抑制因子基因重试表蛋白试活性的究达虫研BJFS-526 44-63• 基因重试表蛋白试桃生物活性的究达蚜研3.1 XBPI-1 44-50• 材料试器与3.1.1 44• 方法3.1.2 44-46• 试果分析3.1.3 46-49• 试试3.1.4 49-50• 基因重试表蛋白试试盲试生物活性的究达研3.2 XBPI-1 50-60• 材料试器与3.2.1 50-51• 方法3.2.2 51-54• 试果分析3.2.3 54-59• 试试3.2.4 59-60• 基因原核表菌株试酵液防治室白粉的究达温虱研3.3 XBPI-1 60-63• 试试材料3.3.1 60• 方法3.3.2 60• 试果分析3.3.3 60-61• 试试3.3.4 61-63• 第四章 菌株蛋白试抑制因子基因重试表蛋白生物安全性的究达研BJFS-526 63-70• 重试表蛋白试哺乳试物试胞的影达响4.1 63-67• 材料试器与4.1.1 63• 方法4.1.2 63-64• 试果分析4.1.3 64-66• 试试4.1.4 66-67• 重试表蛋白试植物蛋白试的影达响4.2 67-70• 材料试器与4.2.1 67• 方法4.2.2 67-68• 试果分析4.2.3 68-69• 试试4.2.4 69-70• 第五章 全文试试70-71• 参献考文71-79• 致试79-80• 试试答案试安防试卷学 作者试试8•