[doc] 精液分析中精子密度室内质量控制方法研究

[doc] 精液中精子密度室内质量控制研究 精液分析中精子密度室内质量控制方法研 究 中国优生与遗传杂志2005年第l3卷第9期?87? 精液分析中精子密度室内质量控制方法研究 汤洁..张宁..闫素文..李侠 (1.解放军202医院全军优生优育中心,沈阳1100032.解放军208医院心内科.长春130061) 摘要:目的建立一种可行的精液密度测定的质量控制方法.方法采用血细胞计数板和计算机辅助精液分析(CA- sA)两种方法.对所选取的与精子头部直径相近的质控珠进行高,中,低三种密度测定,分另q于日内及日间测试l2次.结果 采用血细胞计数板方法测试高,中,低三种密度结果的日内变异系数分另q为12.09%,8.86%,4.72%,日间变异系数分另q为l6. 7l%,lO.65%,lO.22%.CASA法日内变异系数分另4为6.65%,5.93%,3.80%,日间变异系数分另q为7.9o%,6.84%,6.14%. 结论质控珠可用于以上两种测试精子密度方法的室内质量控制,从而达到保证实验室测试精子密度质量的目的. 关键词:精液分析;质量控制 中图分类号:R446.144文献标识码:A文章编号:1006—9534(2o05)09—0087—02 Thestudyofinternalqu~tycontrolonthespermdensityinsemelianalysis.TANGJie,ZHAGNG?,YANSu一n,eta/. (202HospitalofPIA,Shenyang,110003) Abstract:ObjectiveTosetupafeasibletechniqueofinternalqualitycontrolonthespermdensity.Methods:Usingthetwomethodsof blood—cellcounterandcomputerassistantspermanalysis(CASA),12timesseparatelyineverydayand12dayswedetectthedensityofquali- tycontrolbeadoflow,moderate,higIIdensityandthediameterofqualitycontrolbeadissimilarwiththatofasperm.Results:Usingtheblood — eeUcounter,theintradayCVsoflow,moderate,higIIdensitywere12.09%,8.86%,4.72%andextradayCVsoflow,moderate,highdensi? tywere16.71%,10.65%,10.22%.UsingCASA,theintradayCVsoflow,moderate,hishdensitywerc6.65%,5.93%,3.80%,andex- tradayCVsoflow,moderate,highdensitywere7.90%,6.84%,6.14%.Conclusions:Thequalitycontrolbeadcanbeusedininternalquality controlonthespermdensityforthetwomethods.ThatCanhelpto&_gsugethequalityoftheanalysisonspermdensity. Keywords:Semenanalysis;Qualitycontrol 精液质量分析是男性生殖能力的重要手段,在男性 不育症的诊断,治疗和科研中具有极其重要的作用.目前测 定精子密度普遍使用的有血细胞计数板计数精子密度法及 近几年发展起来的新技术一计算机辅助精液分析(CASA)方 法,无论方法先进与否试验测定中的质量控制都是实验结果 准确性的保证.本文对精液密度室内质量控制进行了研究, 现报告如下. 与方法 一 ,仪器 1.?J1r一9OOO伟力彩色精子质量检测系统. 2.血细胞计数板,上海医学光学仪器厂生产. 3.NikonSE型,配10×,20×物镜显微镜. 二,材料及方法 1.质控珠:选取与精子头直径相近的直径为2.8ttra球形 珠(为Roch公司产品),配制成高,中,低三种浓度. 2.稀释液:每100ml含NaCO,5g,36%甲醛lml,龙胆紫饱 和水溶液0.5ml.用于血细胞计数法. 3.密度测定:血细胞计数板法按文献…方法进行密度计 数.CASA法直接进人系统进行分析.每种密度的样品分别 用2种方法1内Et重复计数l2次和分别连续12Et每Et计数 1次,准确记录每次测试结果. 4.统计学方法:采用SPSS软件对所测结果进行分析,计 算平均值和变异系数,并进行’检验. 结果 一 ,质控珠的3种密度为:20×l0’,IIlI左右,50×l0’,IIlI 左右,100×l0’,IIlI左右.采用C/uSA法和血细胞计数板法进 行日内测试结果见表1. 表l两种密度测试方法日内测定3种密度的测试结果 二,3种密度的质控珠:20xl,IIlI左右,50x10’,IIll左 右,100×l0’,IIlI左右.采用CASA法和血细胞计数板法进行 日间测试结果见表2. 袭2两种密度测试方法日闻测定3种密度的测试结果 三,按实验室测定方法测定某一密度的质控珠,WHO要 ? 88?中国优生与遗传杂志2005年第l3卷第9期 求5,12次就可以用其平均数和误绘制质控图,在质控 图上以目标值两侧2和3个标准误的范围(即警戒限和处置 限)来设定控制限1.按日常测试在质控图上标记每次结果 点,一旦某次测定结果被判定为”不合格”,可按表3原则给 出误差不同类型,从而指导原因查找. 表3质控图的基本控制原则 控制原则误差敏感 一 个结果超出处置限 连续两个结果都超出警戒上限或低于警戒 下限 连续两个结果.一个高于警戒上限,一个低 于警戒下限 连续八个结果全部高于或低于均值 随机误差或系统误差 系统误差 随机误差 系统性误差 讨论 精液分析在男性生殖力的评估中起着极为重要的作用, 精液常规检验中精子密度是医生和患者关注的项目,质量控 制得好是结果可信的保证. 实验结果表明CASA不仅改变了传统繁琐的手工操作方 法,而且提高了密度测定的精密度(三种密度下日内和日间 CV值均小于8,O%),其CV值远远低于血细胞板计数法的 CV值(P值均小于0.05).血细胞计数板法的测试结果日内 日间变异很大,说明此方法重复性较差,结果的可信度较低. 究其根源是由于血细胞计数板法中计数池深0.1ram,精子相 互重叠不处于同一平面上,会造成计数结果误差】.因此目 前较少采用此方法进行精子密度的检测.本研究采用血细 胞计数板法测定,目的是确认质控珠进行精液密度分析的质 控同样适用于此检测方式,对于目前仍采用该检测方式的单 位也可以采用此质控珠进行室内质量控制工作. 本实验中采用的质控珠化学性质及表观形态稳定,易于 获得,可将其配制成所需密度,分装成多份日常工作中进行 重复检测,根据测得的平均值及标准误结果绘制室内质控图 并对日常工作进行监控.从实践应用和实验结果表明此质 控珠可用于以上两种测试精子密度方法的室内质量控制. 由于在CASA系统操作中识别精子时,需将灰度和域值 调整到可将精子全部采集而不采集卵磷脂小体等非精子微 小颗粒的环境,从而清楚的标记精子与非精子成分,本质控 珠直径大小与精子头部直径相近便于人员培训和熟练掌握 操作.所以质控珠的应用不仅限于室内质量控制还有助于高 标准技术员的培训,同时也是检查实验室工作人员一致性的 有效方法. 因此精液分析中应用质控珠操作简便,科学,实用,易于 掌握,便于标准化,为临床提供了一个良好的质量监测与控 制平台.’ 参考文献 [1]朱忠勇,实用医学检验学[M],北京:人民军医出版社,1997.993. [2]世界卫生组织编,WHO人类精液及精子一宫颈牯液相互作用实 验室检验手册[M],第四版,人民卫生出版社,2001.32. [3]JohnsonJE.BooneWR.BlackhurstDW.Manualv~rsuscomputerautoma ted s4~menanalysis.PartI.Comparisonofcountingchambers[J].Fenil Steril,1996.65(1):150. 收稿日期:.2005—04—06 (上接第84页) 儿,极低体重出生儿,高胆红素血症发生率,?F—ET组明显 高于自然妊娠分娩组(P<0.01).而新生儿围产期死亡,畸 形和窒息的发生率,两组没有差异(P>0.05).分析由于观 察组多胎特别是3胎的发生率增高,使早产的发生率(2O. 44%)明显高于对照组(8.77%).多胎是引起早产的重要原 因,并可伴随多种产科并发症及不利的新生儿结局】,而早 产是新生儿高胆红素血症和低体重出生发生的主要原因,高 胆红素血症和低体重出生又是新生儿住院治疗的主要原因. IVF—ET组新生儿96.92%的低体重儿,95.45%的高胆红素 血症患儿和72.22%住院治疗的患儿系多胎早产儿,该研究 结果与早产和低体重是决定新生儿结局的最重要影响因素 的观念相吻合.本研究还提示新生儿围产期死亡,畸形和 窒息的发生率,两组没有差异性(P>0.05),分析主要原因可 能为无论单胎或多胎IvF—ET孕妇均得到孕期高营养饮食 并接受系统而高质量的孕期保健和产科观察与处理;对于多 胎的孕妇一旦有早产的先兆即及时给予促肺成熟药,从而避 免了因肺发育不良而至的肺透明膜病变和反复的呼吸暂停, 从而避免了HIE等严重新生儿并发症的发生,从而降低了新 生儿的窒息发生率和新生儿死亡率.因而认为高质量的围 产保健和高水平的产科处理和新生儿治疗是降低新生儿病 率和死亡率的关键.两组新生儿畸形的发生率没有差异,观 察组7例畸形中,4例心脏畸形,对照组l8例畸形中5例心 脏畸形,观察组心脏畸形相对较高,分析是由于IVF—ET治 疗过程中超促排卵引起的激素异常升高的结果…. 参考文献 [1]陈欣洁.孙筱放,等.胚胎质量对体外受精妊娠结局的影响[J]. 生殖医学杂志.2001.10(1):l9—23. [2]曹泽毅.翁梨驹,郎景和,等.中华妇产科学[M].第一版.854— 875. [3]金汉珍.黄德珉,官希吉,等.实用新生儿学[M].第三版.269— 270. [4]EricsonA,NygrcnKG,OlaussonPO,eta1.Hospitalcareutilizationof infantsbomafterIVF[J].Hum~pood,2002,17(4):929—32. [5]airDaniel,YifatOchshom,GideonFait.etal,Analysisof104twin pregnanciesconceivedwithassistedreproductivetechnologiesand193 spontaneouslyconceivedtwinpregnancies[J].FertiandSteri,2OOO,74 (4):683,689. [6]Addor,V,Samos—Eg~imanB,FawerCL.eta1.Impactofinfertilitytreat. mentsonthehealthofnewborns[J].FenilSteril,1998,69,210,215. [7]SandsAJ.CaseyFA,CraigBG,eta1.Incidenceandriskfact0fsforyen- tricularseptaldefectinlowrisk’neonates[J].ArchDisChildFetalNeo. nata1.Ed.81. ‘ 收疆日期:2005—03—13 ?