HPLC 梯度洗脱同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量

HPLC 梯度洗脱同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量 HPLC 梯度洗脱同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量 许润春，苏柘僮 (成都中医药大学，四川 成都 610075) Determination of Arctiin and Arctigenin in the Liquid Preparation of Fructus Arctii by HPLC Gradient Elution XU Run-chun , SU Zhe-tong (chengdu university of TCM , chengdu 610075，china) 摘要:目的:建立一种同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量的 18柱(4.6mm HPLC梯度洗脱法。方法:采用Dionex Summit高效液相色谱系统，ODS C ×250 mm，5μm)，乙腈,1水为流动相梯度洗脱，流速1.0ml/min，测定波长280nm， 柱温30?下对牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元进行含量测定。结果:牛 蒡子苷进样浓度在0.098,0.98mg/ml、牛蒡子苷元进样浓度在0.0304, 0.304mg/ml范围内线性关系良好(r = 0.9997、r = 0.9995)，平均回收率分别 为100.8,，RSD为1.9,(n=6)和98.6,，RSD为2.3,(n=6)。结论:该方法准确 可靠、重现性好，可用于牛蒡子液体制剂的含量测定。 关键词:牛蒡子苷;牛蒡子苷元;HPLC;梯度洗脱 Abstract :Objective :To develop a new quantitative analysis method for determining arctiin and arctigenin in the liquid preparation of fructus arctii by HPLC gradient elution . Methods : ODS C18 column(4.6mm ×250 mm， 5μm)was used with mobile phase of acetonitrile-water for gradient elution .The flow rate was 1.0ml/min and detection wave-length was set The linear rang of arctiin was within 0.098,0.98mg/ml at 280nm . Results : (r = 0.9997)，Arctigenin was within 0.0304,0.304mg/ml(r = 0.9995).The average recovery was 100.8,，RSD was 1.9,(n=6) and 98.6,，RSD was 2.3 ,(n=6). Conclusion: This method has good repeatability and flexibility . 1 作者简介:许润春(1973—)，女，广西都安人，成都中医药大学药学院讲师，从事中药炮 制 、 制剂 的教 学 、科 研工 作 。Tel: (028)87825696; Fax: (028)87825595; E-mail : runchunxu@163.com -1- 1 It can be used for quality control in production of the liquid preparation of fructus arctii. Key words: arctiin ; arctigenin ; HPLC ; gradient elution 牛蒡子为菊科牛蒡属植物牛蒡Arctium lappa L(的成熟果实，其味辛苦、 寒。具疏散风热、宣肺透疹、消肿解毒之功效。主要化学成分为木脂素及其苷类 (主要是牛蒡子苷和牛蒡子苷元)、挥发油和油脂等;药理活性主要为抗菌、抗 病毒、降血糖、利尿及泻下作用、抗肿瘤作用和免疫活性等。现代药理研究结果 表明牛蒡子中的活性成分为牛蒡子苷元，在口服条件下牛蒡子苷在肠内菌的作用 下转变为牛蒡子苷元这一活性形式而发挥疗效[1]。可见，同时控制牛蒡子制剂中 牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量，才能真正达到控制该制剂质量的目的。本文建立 了一种同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量的梯度洗脱HPLC 法。 1 仪器与试药 Dionex Summit高效液相色谱系统:P680 HPLC pump，ASI-100 Automated Sample Injector，Thermostatted Column Compartment TCC,100，UVD 170U， CHROMELEON? --PDA 软件;乙腈为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为 纯;牛蒡子苷标准品(中国药品生物制品检定所);牛蒡子苷元(HPLC>98%，成都 思科华生物技术有限公司);牛蒡子液体制剂(自制)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 DiamonsilTM(钻石)色谱柱(4.6mm ×250 mm，5μm);检测 波长280nm;柱温30?;流速1.0ml/min;进样量: 10μl。梯度洗脱条件为乙腈 ,水，洗脱程序见表1: 表1 梯度洗脱程序 时间(min) 乙腈 水 0,8 30,25 70,75 8,13 25,24 75,76 13,40 24,70 76,30 2.2 线性关系考察 精密称取牛蒡子苷对照品9.8 mg，牛蒡子苷元对照品7.6 mg， 分别置10ml、25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为贮备液。分别精密吸 -2- 2 取贮备液1，3，5，7，10ml，置10ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，按上述 色谱条件测定。以进样浓度X (mg/ml)对峰面积Y(mAU)进行线性回归，得标准曲 线回归方程，牛蒡子苷: Y=8.0545X ,0.6275， r = 0.9997(0.098,0.98mg/ml); 牛蒡子苷元: Y=14.8994X + 0.2410，r = 0.9995(0.0304,0.304mg/ml)。 2.3 供试品溶液的制备 精密吸取0.5ml牛蒡子液体制剂，置25ml量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，过0.45µm滤膜，即可。 2.4 精密度试验 分别精密吸取牛蒡子苷(0.98mg/ml)和牛蒡子苷元 (0.304mg/ml)对照品溶液10μl，连续进样6次，计算得峰面积的RSD分别为0.98 ,、1.07,。 2.5 稳定性试验 按2.3项下方法制备的样品液，分别在0、2、4、6、8h进行测 定，牛蒡子苷和牛蒡子苷元峰面积的RSD分别为1.9,、2.3,，表明样品在8h内 稳定。 2.6 重复性试验 取同一批样品按2.3项供试品溶液制备方法操作，平行制备6 份溶液，测定牛蒡子苷和苷元峰面积的RSD分别为2.8,、1.7,。 2.7 加样回收试验 精密吸取已知含量的牛蒡子液体制剂(牛蒡子苷含量 28.5mg/ml，牛蒡子苷元含量5mg/ml)样品6份，每份0.2ml，置25ml量瓶中，分 别精密加入牛蒡子苷(0.98mg/ml)、牛蒡子苷元(0.304mg/ml)对照品溶液6ml、 3ml，按2.3项供试品溶液制备方法操作，测定，得平均回收率为:100.8,，RSD 为1.9,(n=6);98.6,，RSD为2.3,(n=6)。 2.8 样品测定 按上述方法对3个牛蒡子液体制剂样品进行测定，并计算牛蒡子 苷和牛蒡子苷元的含量，色谱图见图1,3。结果见表2。 图1 牛蒡子苷对照品 -3- 3 80.0 m AU W VL:280 nm 1 - 29.152 60.0 MinAr = 10.000 MinAr = 10.000 40.0 20.0 m in -10.0 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 图2 牛蒡子苷元对照品 110 m AU W VL:280 nm 1 - 9.602 75 50 2 - 29.250 25 m in -10 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 图 3 牛蒡子液体制剂样品 表 2 三批样品含量测定结果 编号 牛蒡子苷(mg/ml) 牛蒡子苷元(mg/ml) 1 27.96 5.37 2 28.79 4.83 3 27.13 5.81 3 讨论 3.1 牛蒡子中主要有效成分为牛蒡子苷和牛蒡子苷元，牛蒡子苷元为其发挥疗效 的直接活性成分，牛蒡子苷是其前体物质[2]。而牛蒡子药材中牛蒡子苷的含量达 5.3,,7.3,，平均 6.7,;牛蒡子苷元的含量 0.1,,1.5,，平均 0.55[3],。 在本研究的制剂中牛蒡子苷的平均含量为 27.96mg/ml，牛蒡子苷元平均含量为 5.34mg/ml，后者为前者的 19,。可见，以牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量同时控 制制剂的含量是非常必要的。 3.2 参考有关文献，本研究考查了不同的洗脱条件如:甲醇,水=1:1.1;乙腈 4 ,水=25:75;甲醇,乙腈,水(0.25mol/l 磷酸)=23:38:39 等，均因分离度、 峰形、出峰时间等达不到要求而放弃。根据实验的情况，最终拟定了本文介绍的 梯度洗脱方法，得到较好的分析效果，并且可以同时测定同一个样品中牛蒡子苷 和苷元的含量。 参考文献: [1] 任常胜，朱庆玲(牛蒡子的研究概况(中国民族医药杂志，2003，12:36 [2] 胡英杰，樊蕴华，肖敏勋. 蜗牛酶水解牛蒡子苷制备苷元的研究. 广州中医 药大学学报，2004，21(6):473 [3] 毕葳，雷海民，何远景. 不同产地牛蒡子药材质量评价. 中国中医药信息杂 志，2005，12(4):47 -5- 5