【word】 HPLC法测定清热醒脑灵片中栀子苷的含量

【word】 HPLC法测定清热醒脑灵片中栀子苷的含量 HPLC法测定清热醒脑灵片中栀子苷的含 量 ? 药品鉴定?2011年lO月第8卷第28期 HPLC法测定清热醒脑灵片中栀子苷的含量 刘清新,于永军,焦艳?,潘海霞 1.沧州医学高等专科学校,河北沧州061001;2.沧州市药检所,河北沧州061001 【摘要】目的:建立可靠的清热醒脑灵片中栀子苷的含量测定方法.方法:采用HPLC法,HypersilODS2C.色谱柱 (4.6mmx250mm,5Ixm);流动相:乙腈一水(15:85);柱温:20?;检测波长:238nm.结果:栀子苷的线性范围为6_36, 95.40Ixg/ml(r=-0.9999,n=6);平均回收率为99.17%(RSD=2.28%,n=9). 结论:本方法操作简便,专属性及重复性好, 可用于清热醒脑灵片中栀子苷的含量测定,为本品的质量控制提供科学依据. f关键词】HPLc法;清热醒脑灵片;栀子苷 【中图分类号】R291.2[文献标识码】A[文章编号]1673—7210(2011)10(a)一050—03 DeterminationofthecontentsofgeniposideinQingreXingnaolingTabletby HPLC LIUQingxin1,YUYong~un1,JIA0l,肌PANHaixia? 1.CangzhouMedicalCollegeinHebeiProvince.Cangzhou061001.China;2.CangzhouInstituteforDrugControlinHebei Province,Cangzhou061001,China 【Abstract】 Objective:ToestablishamethodfordeterminationofthecontentsofgeniposideinQingreXingnaolingTablet. Methods:TheHPLCmethodwasusedwithHypersilODS2C18column(4.6mm~250mm,5m);theacetonitrile—water (15:85)wasusedasthemobilephase;thecolumntemperaturewas20~C;thedetectionwavelengthwassetat238nm.Re- suits:Thelinearrangeofgeniposidewas6.36—95.40~g/ml(r=O.9999,n=6). Theaveragerecoveryratewas99.17% SD=2.28%,n=6).Conclusion:Themethodisselectiveandreproduciblefordeterminationofthecontentsofgeniposide inQingreXingnaolingTablet,whichprovidesscientificevidenceforqualitycontrolofQingreXingnaolingTablet. 【Keywords]HPLCmethod;QingreXingnaolingTablet;Geniposide 清热醒脑灵片由水牛角,黄芩,黄连,冰片,栀子等十三 味药组成,具有清热解毒,开窍醒脑,息风安神之效,可用于 脑炎,高血压及各种高热的治疗l1l,并收载于卫生部中药 成方制剂第八册.于1993年颁布执行.原质量标准中只有显 微法鉴别,化学法鉴别及常规检查,未对任何药物或有效成 分进行含量测定.本实验采用HPLC法对清热醒脑灵片处方 中栀子所含的主要成分栀子苷进行含量测定,为该制剂的质 量控制提供科学依据.保障临床用药的安全有效. 1仪器与试药 Agilentl100型高效液相色谱仪(G1315B型DAD检测 器,G1311A型泵,G1311A自动进样器,G】316A柱温箱), HypersilODS2Cl8色谱柱(4.6mmx250mm,5m);TU1810 型紫外可见分光光度计:BS124S型电子分析天平:KH一 3200DB型超声波清洗仪. 栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 110749—200714,供含量测定用),乙腈为色谱纯(天津市光复 精细化工研究所),清热醒脑灵片(河北天成药业有限公司生 产,批号:20090212,20090310,20090320),阴性样品为自制: 水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 HypersilODS2C18色谱柱(4.6mmx250mm,5Ixm);柱 50巾茸医药导报CHINAMEDICALHERALD 温:20?;检测波长238nm;流动相:乙腈一水(15:85)[2-3];理论 板数按栀子苷峰计算应不低于1500. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量,加甲 醇制成300g/ml的溶液,作为对照品储备液.精密量取上 述储备液适量,加甲醇稀释制成30~g/ml的溶液,作为对照 品溶液. 2.2.2供试品溶液的制备取本品10片,除去包衣,精密称 定,研细,精密称取粉末适量(约相当于1片重量),置25ml 容量瓶中,加甲醇适量,超声处理30min,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液. 2.2-3阴性对照溶液的制备取不含栀子的阴性样品,按照 “2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备,即得. 2-3空白干扰试验 取上述对照品溶液,供试品溶液,阴性对照溶液各20l, 分别注入液相色谱仪,记录色谱图.见图1. 2.4线性关系试验 精密量取对照品储备液1,2,5,8,10,15ml,分别置 50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀.取上述溶液各20l, 分别注入液相色谱仪,记录色谱图.测定峰面积.以栀子苷 浓度C为横坐标,以峰面积A为纵坐标进行线性回归.见 图2 2011年10月第8卷第28期 A 2O 0 024B810 l C 器 A.栀子苷对照品溶液:B.阴性对照溶液:C.供试品溶液 图1空白干扰试验色谱图 由图1可知,其他原辅料对栀子苷的含量测定无干扰. 一2500 《 一2OOO 璺. / / / / / / / / „??t O 图2线性关系试验 801OOl20 浓度C(txg/n1) 由试验结果可知,栀子苷溶液在6.36-95.40咖1浓度 ? 药品鉴定? 范围内与其峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A: 24.62C+19.77(r=0.9999,n=6). 2.5精密度试验 取对照品溶液,连续进样6次,测定峰面积.结果显示. 各峰面积的RSD值为0.42%. 2.6重复性试验 取批号为20090212的样品,照”2-2.2”项下方法制备供 试品溶液,照上述色谱条件分别测定含量,共测定5份.结果 显示,其平均含量为0.500mg/片,RSD为0.67%. 2.7稳定性试验 取供试品溶液,在20cc条件下,分别于0,1…248h,精 密量取20l,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定栀子苷峰 面积.结果显示,各峰面积的RSD值为0.83%,明供试品溶 液在20?条件下8h内稳定. 2.8回收率试验 按2片重量的80%,100%,120%称取供试品细粉,每一 浓度称取3份样品,加甲醇25ml,超声处理30min,过滤,精 密量取续滤液5m1,精密加入栀子苷对照品溶液5ml,混匀, 作为供试溶液.分别取上述供试品溶液和栀子苷对照品溶 液,按照含量测定项下方法测定.见表1. 表1栀子苷回收率试验结果 由表1结果可知,本法栀子苷回收率较好. 2.9样品含量测定 取本品样品3批,照”2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 按照上述色谱条件分别测定含量.见表2. 表2样品含量测定结果 3讨论 3.1检测波长的确定 取浓度为30g,ml的栀子苷对照品甲醇溶液,采用分 光光度法在200,400nm的波长范围内进行紫外扫描,结果 本品在237.5nm波长处有最大吸收.参照栀子含量测定项 下方法i2]及相关文献报道,确定栀子苷含量测定的检测波 长为238nlTI. (下转第98页) CHINAMEDICALHERALD由国医药导攉51 仙????..删??蚰 ,, 一, x 2 + 0 ?O ? 中医中药? 维持4周以上. 1.4统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行分析处理,计数资料应用 )(:检验,以P<O.05为差异具有统计学意义. 2结果 2.1两组骨髓抑制比较 实验组中骨髓抑制20例,其中,I度l2例,?度6例, ?度2例,?度O例,骨髓抑制发生率为46.51%;对照组中 骨髓抑制35例,其中,I度l5例,?度10例,?度6例,? 度4例,骨髓抑制发生率为87.50%,实验组骨髓抑制发生率 低于对照组(XZ=-5.07,P<O.05),并且实验组无?度骨髓抑制. 见表1. 表1两组骨髓抑制比较(例 里型塑堕堕旦壁星堕垄皇皇 实验组43231262o46.51 对照组40515lO6487.50 注:与对照组对比,x2=5.07,.P<0.05 2.2两组生活质量比较 实验组治疗2周期后,生活质量好转20例,稳定19例, 下降4例,生活质量下降率为9.30%;对照组治疗2周期后,好 转14例,稳定15例,下降11例,生活质量下降率为27.50%. 实验组治疗后生活质量下降率低于对照组(X2=4.62,P<O.05). 见表2 表2两组生活质量比较(例) 注:与对照组对比,X2=4.62,?P<O.05 2.3不良反应 实验组应用地榆升白片过程中无过敏反应及其他不良 反应发生. 3讨论 肿瘤发病率成逐年上升趋势,目前化疗仍然是肿瘤患者 治疗的重要手段之一.骨髓抑制是化疗最严重的不良反应, 重度骨髓抑制甚至危及生命.老年患者骨髓功能差.化疗后 常常出现骨髓抑制,同时骨髓抑制后恢复比较慢,因而防治 2011年1O月第8卷第28期 老年患者骨髓抑制尤为重要. 地榆升自片的成分为中药地榆.地榆含有多种药用化学 成分,主要为皂苷,鞣质和黄酮类.试验显示,地榆能改善骨 髓循环,促进造血干细胞,造血祖细胞增殖分化,防护化疗对 骨髓造血组织的损伤,从而提高外周血细胞水平闭.体外研究 证实.即使低浓度的地榆皂苷也可引起粒一单核系祖细胞集落 数明显高于对照组嘲.地榆皂苷通过促进小鼠骨髓细胞增殖, 使外周血细胞数量增加,地榆皂苷类成分不仅影响造血祖细 胞,而且可能影响造血祖细胞的成熟和分化,并可能具有拟 细胞因子的作用.地榆还有抗炎消肿,抗菌,抗氧化以及抗 肿瘤作用阎.霍丽亚同报道,地榆升白片可以预防干扰素所致 的骨髓抑制作用.地榆升白片能有效提高外周血自细胞计数 和中性粒细胞百分比,减轻骨髓抑制程度.能明显改善头晕, 乏力,腰膝酸软等临床症状.本组研究表明,地榆升白片可 以有效降低老年患者的骨髓抑制,实验组骨髓抑制发生率低 于对照组(P<0.05),并且减少了重度骨髓抑制的发生(实验 组无?度骨髓抑制),减少感染发生的机会;患者骨髓抑制后 常出现倦怠,失眠,易感冒,食欲不振等症状,可导致老年患 者生活质量下降,实验组应用地榆升白片减少了老年患者因 化疗引起的生活质量下降率(9.30%/27.50%);实验组应用地 榆升白片过程中无过敏反应及其他不良反应发生. 综上所述,地榆升白片能够防治老年肿瘤患者化疗所致 的骨髓抑制,同时减少化疗引起老年患者的生活质量下降率. 并且安全性好,治疗过程中无明显毒副作用. f参考文献】 [1]孙燕.内科肿瘤学[M1.北京:人民卫生出版社,2001:995,996. f2]2黄国钧,宋浩亮,罗华菲,等.地榆升自片对小鼠骨髓造血机能损伤的保 护作用m.中药药理与临床,2002,18(6):44—45. 【31高瑞兰.地榆皂甙对正常人白细胞生成的研究[J】.浙江中医学院报. 1998,6(12】:37. [4]高小平,吴建明,邹文俊,等.地榆促造血作用的有效部位筛选m.中国 天然药物,2006.4(2):137—139. [5]夏红吴,孙立立,孙敬勇.地榆化学成分及药理活性研究进展【J1.食品与 药品,2009,11(7):67,69. [6]霍丽亚.地榆升白片预防于扰素所致骨髓抑制的临床观察叽.中国医 药导报.2008.5(18):79—816. [7]赵维勇,张丽珍,田继红.地榆升白片对放疗后骨髓抑制疗效观察阴.现 代肿瘤学,2007,15(2):264-266. (收稿日期:2011.05—09) (上接第5l页) 3.2超声提取时间的选择 参考有关文献报道[5-61,在制备供试品溶液时,取同一批 号样品.以甲醇为溶剂超声提取10,20,30,40min,在同一色 谱系统及色谱条件下试验,结果各样品的平均含量分别为 0.435,0.449,0.494,0.496mg/片,表明30rain时栀子苷基本 提取完全,故确定超声提取时间为30min. 综上所述,本实验建立的清热醒脑灵片中栀子苷的 I-IPLC含量测定方法,经方法学验证结果表明,本法专属性 好,灵敏度高,稳定性及重复性均符合含量测定要求,且操作 简便.可以作为清热醒脑灵片的一个质量控制方法. 98由蛋医弱导搬CHINAMEDICALHERALD f参考文献】 [1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标 准[S】.中药成方制剂:第8册,1993:175. [2]国家药典委员会.中国药典『s].一部.北京:化学工业出版社,2005:173. f3J刘宁.HPLC法测定解郁安神片中栀子苷的含量闭.中国药品标准,2008,9 (6):467-469. [4】邵燕虹,宋丽莉,周燕双.HPLC法测定清热暗疮丸中栀子苷的含量册. 医学综述,2008,14(22):3518—3519. f51张大军,王兆华.高效液相色谱法测定复肾宁片中栀子苷的含量田.中 国实验方剂学杂志,2010,16(12):88—89. f6I黄晓丹,傅英,陈禧翎,等./-/PLC法测定清开灵胶囊中栀子苷的含量咖. 中国中医药信息杂志,2009,16(6):52—53. (收稿日期:201】-o5—27)