阿扑吗啡对离体蟾蜍交感神经节细胞的作用

阿扑吗啡对离体蟾蜍交感神经节细胞的作用 122 吴少云王邦安汪萌芽 () () 细胞内技术, 初步观察了阿扑吗啡 对交感神 应用离体蟾蜍椎旁神经节 摘要PV GA PO () () (经节细胞的作用。和 10ƒ灌流 30 分别使 64% = 25, 83% = 24和 100% 1, 3 A PO mm o lL s n n n ) = 11的 细胞产生浓度依赖性的缓慢去极化反应, 在部分细胞可伴有输入膜电阻减少和去 PV G 极 化 幅 度 随 膜 超 极 化 而 增 大, 但 在 全 部 受 试 细 胞 均 未 记 录 到 确 切 的 超 极 化 反 应。11,0A PO () 3ƒ灌流 15不仅使全部受试细胞产生去极化反应 = 20, 还使电刺激交感节前纤维诱 mm o lL m in n 发的顺行动作电位起始段上升速率减慢, 超极化后电位增大、去极化后电位减小, 并在 013ƒmm o l 以上的浓度使顺行动作电位转为兴奋性突触后电位或完全取消突触反应, 但对直接动作电位无 L ()明显影响。另外, 还可逆地降低外源性 电位的幅度 = 10。结果表明对离体蟾蜍A PO A ch n A PO 交感神经节细胞有去极化作用并抑制其胆碱能突触传递。 关键词 阿扑吗啡; 乙酰胆碱; 细胞内记录; 交感神经节; 蟾蜍 中图分类号 424Q 液稀释成 10ƒ灌流 15, 30给药。 蟾 R inge r mm o lL s 通常认为, 在哺乳类或两栖类的交感神 ( ) 蜍 中华大蟾蜍, 27 只, 雄 B ufo ga rga r izan s C an to r( 经 节 存 在 一 种 慢 抑 制 性 突 触 后 电 位 2s () 性, 体重 70?15, 本院实验动物中心提供。g ) 系慢抑制性胆碱能突触传递, 可能是 , IP SP 3, 6, 7 112 实验方法 按前文方法 制备蟾蜍椎旁神 交 感 节 前 纤 维 释 放 的 通 过 激 活 型, A ch M () ( ) 经 节 标本, 并在室温 20, 25?下进行细胞PV G 受体而兴奋交感神经节中的小强荧光细A ch 内记录。 玻璃微电极充灌液用 3ƒ溶液, 并 m o lL KC l () 胞, 后者释放多巴胺 并作用于交感神经 DA 在部分细胞用 3ƒ乙酸钾充灌电极作对照。记录 m o lL 1 到的电信号经 22微电极放大器放大后, A xo c lam p A 节细胞产生慢超极化反应, 介导这一反应 ( ) 同 时在示波器监视和笔录仪 2400进行连Go u ld S 2 的 受体则可能为 型。 但本实验室 DA DA 1 续记录, 快反应信号则经笔录仪的数字化插件进行 ()以往的工作却未能在蟾蜍椎旁神经节 PV G () 记忆后再描出。 由三通道电刺激器 南通电声厂输 3 2 , 这与牛蛙交感神经节可发观察到 sIP SP 出刺激方波, 经隔离器后由吸引电极对交感神经节4 ( 生 2的结果不同。 为此, 应用细胞内 前 神 经 施 加 恒 压 电 刺 激 1, 1, 20, 011,sIP SP m sV ( ) 记录技术观察 受体激动剂阿扑吗啡 去 012。DA H z ) 水 吗 啡, , 对 离 体 蟾 蜍2 结果apom o rp h in eA PO 在 记 录 到 的 细 胞 中, 选 静 息 电 位细胞的作用, 以了解蟾蜍交感神经节细 PV G PV G () () 负 于245、动 作 电 位 幅 度 大 于胞存在 受体并介导 2的可能性。R P mV A P DA sIP SP 1 与方法50、且记录稳定的 45 个神经元进行实验 mV (111 药物和动物 盐酸阿扑吗啡注射液 , 沈 A PO 观察。 ) 阳 第一制药厂, 临用前以 液稀释成所需浓 R inge r 211 对 膜 电 位 的 影 响度灌流给药, 并注意遮光保存。 氯化乙酰胆碱 ,13 , 0A ch A PO ) 上海试剂三厂配成 1母液冷冻贮存, 用前以ƒm o lL 1010ƒ灌 流 30, 40 , 在 所 检 测 的 25 mm o lL s Ξ 本工作接受卫生部优秀青年科技人才基金及院中青年科研启动基金部分资助作者单位: 1 外科手术学教研室 2 细胞电生理研究室 ) ( 个细胞, 均未引起确定的超极化反应, 但 1,和去极化电位减小, 抑或超极化后电位增 ( )() 3, 10灌流 30 分别在 64% = 25, 大 图 4。 在>013浓度的 随 ƒƒ, mm o lL s n mm o lL A PO () () 83% = 24和 100% = 11的 细胞 转为 2并降低 浓度升高可使顺行 n n PV G A P fE P SP ( ) 产生浓度依赖性的缓慢去极化反应 图 1,顺行 的发放率, 抑制 2或完全取消 A A P fE P SP 通常在冲洗 30以上可恢复, 但 10( ƒ) m in mm o l突 触反应 图 3, 4, 具有浓度依赖性并在冲 洗 60以上可逆, 的作用在手动箝制 L m in A PO 灌流的细胞一般只能部分恢复。 在部分细 ( ) ( ) 膜电位到 水平仍然存在 图 3, 4, 作用在胞去极化幅度随膜超极化而增大 图 1, 但 R P B 膜去极化时未记录到超极化反应, 去极化反 不引起膜电阻明显变化的细胞同样存A PO ( ( )在。 在 3 个受试细胞, 灌流 对胞内注射 应可伴有输入膜电阻减小 图 2、增大 图A PO A 去极化电流诱发的直接 无明显影响。) A P 3或无明显变化。 在 11, 30ƒA A PO mm o lL 灌流 15的 20 个受试 细胞, 则全部 m in PV G ( ) 产 生去极化反应 图 2, 3, 同样未记录到可 乙酸钾充灌测的超极化反应。 在用 3ƒ m o lL 的电极记录的细胞, 同样可引起去极化 A PO () 反应, 也未出现超极化反应 = 3。n 图 2 对 电位的浓度依赖性抑制作用 A PO A ch 诱导的去极化反应及其膜电阻变化, 向下折线 : A A PO ) ( 为胞内注射超极化恒定电流脉冲, 未示出引起的超极化 电紧张电位, ?表示灌流的时间。和 对: A PO B CA PO A ch 电位的浓度依赖性抑制作用, ?为 灌流的时间, 实横线 A ch ) ( 表示灌流的时间。记录取自 虚线所示为, , A PO A B C R P 257的同一细胞。mV 在离体蟾蜍椎旁神经节细胞引起 图 1A PO 的去极化反应 () 不同浓度 ƒ引起的去极化反应, 横虚 : A A PO mm o lL ( ) 线表示静息电位水平 255。膜电位对反应的影 : mV BA PO ( 响, 每记录线左侧的数字表示虚线的膜电位水平 以 为 mV ) () 单位, 该细胞的静息电位 是261。 ?: 灌流时 R P mV A PO 间, 校正同时适用于 和 。A B 节212 对顺行动作电位的作用 电刺激交感 前纤维, 可在大部分记录的 细胞诱发 PV G () 快兴奋性突触后电位 2达阈电位水 , fE P SP 对顺行动作电位及 电位的抑制作用 图 3A PO A ch ()平即可爆发即为顺行图 3, 4。在 20 , A P A P A : 笔录仪的膜电位慢记录, 向上折线为顺行 A P 或 f2 个 有 顺 行 反 应 的 细 胞 用 11,0A P A PO ( ) 向下折线为胞内注射超极化恒定电流脉冲 未示出, E P SP 引起的超极化电紧张电位, ?为 灌流的时间, ?是手动 A ch 3ƒ灌流 15, 在引起去极化反应的 mm o lL m in 细胞内电流注射箝制膜电位到 水平, 是对 R P CON T ROL 同时, 导致顺行 起始段上升速率减慢或A P 照, 是冲洗。在 中以 和 标记处采样的数字: W A SH BA a b 化记录, ?为刺激伪迹。该细胞 是257。校正 25适 R P mV mV 用于 和 。 A B 度相对较高, 有必要进行更大范围的浓度测 激试; 再者, 虽本实验结果可基本否定 A PO 活 受体介导的超极化作用, 在特殊条件 DA 1 下翻转为去极化反应的可能性, 但需进一步 了解去极化的作用机理后才能确定。 在本研究的实验条件下, 表现出三 A PO 图 4对顺行动作电位的浓度依赖性影响 A PO 记录 , 均为采样的数字化记录, 取自静息电位为2 方面的作用: 其一是去极化作用, 由于该作用 af 66的 同 一 细 胞, ? 为 刺 激 伪 迹, 是 对 照, mV CON T ROL 在药物浓度达平衡状态时 100ƒ即 可 Λm o lL 为冲洗。注意记录 较 的起始段上升缓慢, 去极化 W A SH b a 在全部测试细胞引起反应, 虽这一最低有效 后电位消失并出现明显的超极化后电位。 浓度仍偏高, 但有明确的浓度依赖性质和可 213 对乙酰胆 碱 反 应 的 影 响在 10 个 细逆性, 可排除非特异性作用的可能, 按上述分 胞, 灌流 15 给予 10的 可诱发 ƒ, s mm o lL A ch 析也不能认为是超极化反应的翻转, 故 A PO( 伴 膜电阻减小的去极化反应 称 电位,A ch 的去极化作用应可肯定。虽在部分细胞 A PO)图 2, 3 。 灌 流 给 予 011 , 3mm o lL ƒ去极化反应伴有膜电阻减小和随膜超极化而 15, 能可逆地降低 电位幅度, 作 A PO m in A ch 增大, 但膜电阻亦可增大或无明显变化, 故其 ( ) 用呈浓度依赖性质 图 2, 在 引起去极 A PO 产生机理如受体及其类型、离子机制、信号传 化时, 手动箝制膜电位到 水平并不能取PR 导过程均有待进一步的研究。的第二个 A PO ()消 对电位的抑制作用 图 3。尤其 A PO A ch 作用是对顺行 的阻抑作用, 在低浓度主 A P 是在 6 个细胞可同时记录到顺行 和 A P A ch 要表现为顺行 起始部上升速率延缓和后A P 电位, 灌流 显示对两者的同时抑 15A PO m in 电位改变, 包括去极化后电位的抑制或超极 () 制作用 图 3, 但在顺性 被完全取消的细A P 化后电位的增大, 由于顺行 是 2和 A P fE P SP 的总和记录结果, 且 对直接 无 A P A PO A P 对胞, 电位并未完全被抑制, 提示 A ch A PO明显影响, 这种作用是顺行 中混合存在 A P 两者的抑制有程度上的差异。7 的 2受抑的结果。 在> 013ƒfE P SP mm o lL 3 讨论的浓度则表现为 明 确 的 2抑 制 作 用, fE P SP 本 实 验 灌 流 11, 30ƒ15 A PO mm o lL m in对 胆碱能突触传递的阻抑作用与 A PO PV G 先前选择性 受体激动剂 的 DA 1 feno ldop am 或 013, 10ƒ, 40 , 在 全 部 测 试 的30mm o lL s2 作用相一致。的第三个作用是抑制外 A PO 细胞均未观察到确定的超极化反应, 而 PV G 源性 电位, 并表现出浓度依赖性, 提示A ch 且改变膜电位水平或将微电极充灌液改为乙 酸钾亦不能显示超极化反应, 表明蟾蜍 PV G 细胞对 不产生超极化反应。 由于 A PO A PO 对胆碱能突触传递的阻抑作用含有突A PO 是对 和 两种类型 受体均有效 DA 1 DA 2 DA 触后机制, 但是否有突触前机制参与? A PO的激动剂, 本结果提示蟾蜍 细胞可能没是激活 受体再突触后抑制胆碱能传递还 PV G DA 是直接作用于受体?抑制胆碱能传 A ch A PO 有 受体存在或不介导超极化反应, 这与DA 1 3 递与其去极化作用是同一事件还 是 不 同 事 前文不能记录到 2的结果相吻合。但 sIP SP 仍有几种可能性待排除, 如 可能对 A PO DA 1 件? 均有待于进一步研究。8 型受体的选择性弱于 型, 可选用特异DA 2 ( 本研究的阿扑吗啡由中国科学院上海药物研 究所金国章研究员惠赠, 图片工作由郭平石实验师th e t ic gang lia. P ro g re N eu ro b io l, 1978; 11: 77 )完成, 特此致谢。 , 169( )收稿日期: 1996 年 11 月 15 日 , . 5 W e igh t F F P ad ien A BA ce ty lcho line and slow 参 考 文 献 synap t ic inh ib it io n in f ro g sym p a th e t ic gang lio n . , 1973; 55: 225, 228ce llsB ra in R e s 1 蒋志根, 马如纯, 邓乃健 1 交感神经节的胆碱能 6 汪萌芽, 郑建全, 刘健 1 氯化筒箭毒碱抑制蟾蜍() 性慢突触传递 1 生理科学, 1984; 4 1: 1, 7 椎旁神经节胆碱能传递的时反应量2效关系 1 中 2 , . R uffo lo R R N icho ls A JR ecen t exp e r im en ta l () 国药理学通报, 1995; 11 1: 67, 70 and co ncep tua l advance s in d rug recep to r re2 7 梅仁彪, 王邦安, 汪萌芽 1 山茛菪碱抑制离体交. sea rch in th e ca rd io va scu la r sy stemA dvance s 感神经节的胆碱能突触传递 1 中国药理学通报,, 1988; 17: 239, 348in D rug R e sea rch () 1996; 12 5: 453, 455 3 李万德, 汪萌芽, 蒋晓婷等 1 蟾蜍椎旁神经节胆 许绍芬主编 1 神经生物学 1 上海: 上海医科大学 8 碱能传递的实验观察 1 皖南医学院学报, 1988; 7 出版社, 1990: 106, 123 () 1, 2: 1, 6 4 , . Kuba K Ko k e t su KSynap t ic even t s in sym p a2 Ξ Ef f ec ts of A pom orph in e on Toad Sym pa the t ic Gan g l ion Ce lls in V itro , W u Sh ao yu n W an g B an gan W an g M en gya ) (241001 , , D ep t ofC e l l E lec t rop hy s iology la bW a n n a n M ed ica l C ol leg eW u h uA bstra c t U sin g in t race llu la r reco rd in g tech n iqu e s o f th e to ad p a rave r teb ra l gan g lio n () () , PV G n eu ro n s in v it ro th e effec t s o f dop am in e recep to r ago n ist apom o rp h in e A PO o n th e . 1, 3 10 ƒ30 , sym p a th e t ic gan g lio n ce lls w e re stu d iedSup e rfu sed b y A PO an d mm o lL fo r s () ( ) ( ) 64% = 25, 83% = 24100% = 11th e n n an dn o f PV G n eu ro n s w e re slow ly depo la r ized 2, re sp ec t ive ly in co n cen t ra t io n dep en den t an d reve r sib le m an n e ran d no ce lls w e re h yp e rpo la r2 . izedT h e depo la r izin g re spo n se s w e re in c rea sed b y m em b ran e h yp e rpo la r iza t io n an d accom 2 . 20 p an ied b y dec rea sed inp u t re sistan ce in som e o f th e te sted ce llsD u r in g b a th o f ce lls b y 0. 3, 3ƒ15, , A PO mm o lL fo r m in in add it io n to th e depo la r iza t io n in a ll ce llsth e r ise ra te o fin it ia l com po n en t o f th e o r tho d rom ic ac t io n po ten t ia l evo k ed b y p regan g lio n ic st im u la t io n an d , ƒth e am p litu de o f af te r depo la r iza t io n w e re dec rea sedan do r th e am p litu de o f af te r h yp e rpo 2 2la r iza t io n w a s co n cen t ra t io n dep en den t ly in c rea sed w itho u t m ea su rab le ch an ge s o f d irec t ac2 . > 0.t io n po ten t ia l evo k ed b y in t race llu la r depo la r izin g cu r ren t in jec t io nA t co n cen t r t io n 3mm o lƒL , th e o r tho d rom ic ac t io n po ten t ia l o r fa st ex c ita to ry po st syn ap t ic po ten t ia l w a s re2 2. , ve r sib ly in h ib ited o r n u llif ied M o reo ve rT h e am p litu de o f exo geno u s A ch in du ced depo la r2 10 . iza t io n in ce lls w a s dec rea sed b y A PO sup e rfu sio nT h e re su lt s in d ica te th a t A PO ex h ib it s , depo la r izin g ac t io n w itho u t an y h yp e rpo la r iza t io nan d dep re sse s cho lin e rg ic t ran sm issio n o f .to ad sym p a th e t ic gan g lio n in v it ro ; ; ; ;key word s apom o rp h in eace ty lcho lin ein t race llu la r reco rd in gsym p a th e t ic gan g lio n b u fo b u fo Ξ P ro jec t p a r t ly funded by th e M in ist ry o f H ea lth o f PRC.