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微生物。病毒.doc 目前已知病毒5种核酸类型是DNA、+DNA、RNA、+RNA、,RNA 人类免疫缺陷病毒的病毒粒子中含有+RNA分子及反转录酶 多数病毒粒子的直径在100nm上下 病毒粒子中的包膜是来自寄主细胞膜的 一些丝状噬菌体如M13等，感染寄主细胞后不裂解寄主细胞 双链RNA病毒的复制方式:有一些以全保留复制，另一些则以半保留复制 RNA病毒、,RNA病毒、逆转录病毒的病毒粒子中携带着核酸复制所需要的酶 通过溶源转变溶源性细菌所获得的新的遗传性状是来自前噬菌体基因 E.coli k12对λ噬菌体及其同源噬菌体产生免疫性 一步生长曲线主要可分潜伏期、裂解期、平稳期 脊椎动物病毒侵入寄主细胞后，紧接着发生的步骤是少数病毒部分脱壳 类病毒是一类专性细胞内寄生的分子生物，它只含有单链环状RNA分子 拟病毒是利用植物细胞内依赖于RNA的RNA聚合酶进行复制的 朊病毒的主要特征是只有蛋白质，没有核酸 T7噬菌体进行次早期转录时利用的一种RNA聚合酶是新合成T7RNA聚合酶 T4噬菌体进行次早期转录时利用的一种RNA聚合酶是更改后的细菌RNA聚合酶 T4噬菌体侵入寄主细胞后，其早期转译所产生的蛋白质中，最重要的一种是修饰寄主的RNA聚合酶的更改蛋白 各种病毒中病毒粒子直径最大的是牛痘苗病毒 烟草花叶病毒粒子所含有的核酸是+RNA 二十面体对称的病毒粒子的五邻体位于12个顶角上 具有分段基因组的病毒是RNA病毒 +RNA病毒的RNA是具有侵染性的 +RNA病毒的病毒粒子中不携带核酸复制所需要的酶 如果有一个λ噬菌体感染E.coli的溶源菌，那么噬菌体DNA能注入细胞，但不能复制 双链DNA噬菌体是利用细菌原有的RNA聚合酶进行早期转录的 逆转录酶不具有以RNA为的RNA聚合酶的酶活性 T4?DNA ?噬体是病毒 -DNA ?噬菌体是病毒 ?RNA ?呼肠孤病毒是病毒 RNA ?水泡性口膜炎病毒是,病毒 TMV+RNA ?是病毒 ?人类免疫缺陷病毒是+RNA病毒。 衣壳是由许多在电镜下可辨认的形态亚单位衣壳粒构成，而后者又是由一种或多种的蛋白质亚基构成的 病毒包涵体是指在某些感染病毒的寄主细胞内出现了光学显微镜可见的，大小，形态，数量不等的小体称为包涵体，包涵体在实践上可用于病毒病的诊断，用于生物防治 噬菌斑的形成可用于:检出，分离，纯化噬菌体和进行噬菌体的计数 大肠杆菌T偶数噬菌体的DNA中含有5-羟甲基胞嘧啶代替胞嘧啶 在烈性噬菌体中，一些大肠杆菌丝状噬菌体既不杀死宿主细胞，也不引起宿主细胞裂解 大肠杆菌丝状噬菌体是通过.穿出细胞方式释放病毒粒子 影响噬菌体吸附作用的内外因素主要有噬菌体数量，阳离子，辅助因子，pH值;温度等 RNAmRNA 正链病毒是指其病毒粒子中所携带的核酸序列与序列相一致的病毒。 负链RNA病毒是指其病毒粒子中所携带的核酸序列与mRNA序列相互补病毒 晚期转录是指在新噬菌体DNA复制完成后进行的转录作用 T4噬菌体的转录作用可分为3个阶段:早期转录是利用大肠杆菌的RNA聚合酶进行转录，其早期蛋白中最重要的一种蛋白质是更改蛋白，次早期转录是利用更改后的大肠杆菌RNA聚合酶进行转录的，晚期蛋白质主要是结构蛋白，装配蛋白和溶菌酶等 T7噬菌体的转录作用可分为3个阶段:早期转录是利用大肠杆菌的RNA聚合酶进行转录，其早期蛋白质中最重要的一种蛋白质是T7RNA聚合酶，次早期转录是利用T7的RNA聚合酶进行转录的，晚期蛋白质主要是结构蛋白、装配蛋白和溶菌酶等。 双链DNA噬菌体经转录、转译所产生的早期蛋白质中最重要的是次早期mRNA聚合酶或更改蛋白等;次早期蛋白质有DNA酶、DNA聚合酶、5羟甲基胞嘧啶合成酶和晚期mRNA聚合酶等;晚期蛋白质有头部蛋白、尾部蛋白、装配蛋白和溶菌酶等 溶源性细菌指在其染色体组上整合有温和噬菌的核酸，并能正常生长繁殖而不被裂解的细菌 白喉棒杆菌只有当其染色体DNA整合了温和噬菌体的DNA后，才能产生白喉毒素。这种现象称为溶源转变 噬菌体一步生长曲线依次可分为潜伏期，指噬菌体核酸侵入宿主细胞后至第一噬菌体粒子装配前的一段时间;裂解期，指宿主细胞迅速裂解、溶液中噬菌体粒子急剧增多的一段时间。平稳期，指感染后宿主已全部裂解，溶液中的噬菌体效价达到最高点的时期 噬菌体效价表示每毫升试样中含有侵染性的噬菌体粒子数，一种被普遍采用的较精确测定噬菌体效价的是双层平板法 烈性噬菌体增殖过程，依次为吸附，侵入，生物合成，装配?释放等5个阶段 温和噬菌体是一类既能进入裂解周期又能进入溶源周期的完整的病毒粒子;而前噬菌体系指处于整合态的温和噬菌体核酸(或DNA) 温和噬菌体的核酸类型都是ds DNA 温和噬菌体存在3种形式:游离态，系指成熟并具有侵染性的游离噬菌体粒子，整合态，系指前噬菌体状态，营养态，系指前噬菌体脱离寄主染色体，DNA处于积极复制及装配状态 在植物细胞表面上，至今未发现有病毒特异性受体，故植物病毒侵入细胞方式是被动的，主要有:借人工嫁接伤口而侵入;借昆虫刺吸式口器咬伤植物细胞而侵入;和借带病汁液与植物伤口相接触而侵入 痘病毒在宿主细胞内脱壳步骤:先在吞噬泡中借溶酶体释放的酶类脱去包膜及部分衣壳蛋白，再由病毒编码新合成的脱壳酶实现彻底脱壳 马铃薯纺锤形块茎病类病毒(PSTV)是一个裸露的、环状的RNA分子。整个分子由两个互补的半体所组成。共形成122个碱基对和27个内环 特征细菌病毒 细胞结构 有，无， 核酸种类DNARNADNARNA 及，或， 繁殖方式二等分裂，增殖， 人工配制培养基，接种至活组织或活体培养， 培养方式 敏感，不敏感 对青毒素的敏感性 噬菌体进入溶源途径或裂解途径，主要是由噬菌体的两种调控蛋白即CI蛋白和Cro蛋白所控制的 T4噬菌体的装配过程，依次为:DNA分子缩合，衣壳包裹DNA形成头部，尾丝和尾部其他部位独立装配，头部与尾部结合，最后装上尾丝 41 动物病毒侵入宿主细胞的种方式为:()吞噬作用， 2_ ()膜融合， 3 ()与宿主细胞膜上特异受体相互作用， (4)直接穿过细胞膜 比较项目真病毒类病毒 大小大，小， 成分核酸和蛋白质等只有核酸， DNARNA RNA 核酸类型或， 宿主范围动物、植物、昆虫、植物 细菌 亚病毒核酸类型侵染对象 ssRNA 类病毒环状植物 ssRNA 拟病毒环状植物病毒 RNA ssRNA 卫星线状植物病毒 流感病毒的包膜来源于宿主细胞的细胞膜，而包膜上的刺突则来源于病毒自身。刺突由血凝素和神经氨酸酶组成，其中只有后者与病毒的吸附作用有关 人类免疫缺陷病毒是一类具有包膜、含+RNA的球状病毒 在-RNA病毒的病毒粒子中，合成的与负链等长的+RNA不起mRNA作用 在负链RNA病毒中，转录产生的mRNA与复制产生的+RNA不完全相同 双链RNA病毒中的呼肠孤病毒，其RNA复制方式为全保留复制 昆虫病毒的包涵体在显微镜下，一般均呈多角状，故称为多角体病毒 植物病毒一般不能通过种子传播 类病毒可借助植物种子传播病害 烟草花叶病毒的结晶具有感染性 噬菌体感染大肠杆菌细胞后，其线状基因组的粘性末端在宿主连接酶作用下共价环化 在噬菌体感染寄主后的潜伏期后期，寄主细胞内已含有一部分完整的噬菌体粒子了 据目前所知，类病毒的侵染对象都是高等植物 病毒:病毒是一种超显微的非细胞生物，每一种病毒只含一种核酸; 它们只能在活细胞内营专性寄生，靠其宿主代谢系统的协助复制核酸、合成蛋白质等 组分，然后再进行装配而得以增殖; 在离体条件下，他们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。衣壳:衣壳由衣壳粒以对称形式、有规律地排列成杆状、球状或其他形状而构成病毒的外壳。 衣壳的中心包含着病毒核酸。 包涵体:在某些感染病毒的宿主细胞内，出现光学显微镜可见的，大小、形态和数量不等的小体，称为包涵体 溶源性:溶源性是溶源性细菌一个稳定遗传特征，其特点是每个溶源性细菌的染色体上都整 合有前噬菌体，它随着细菌繁殖而复制，从而使每个子代细菌均具溶源性。 溶源性细菌:指在核染色体组上整合有温和噬菌体核酸(即前噬菌体)并能正常生长繁殖不 被裂解的细菌。 溶源转变:少数溶源菌由于整合了温和噬菌体的前噬菌体而使自己产生了除免疫性以外的新表型的现象 一步生长曲线:一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体群体生长规律的实验曲线。以培养时间 3 为横坐标，以噬菌斑数为纵坐标作图。一步生长曲线共分时期即潜伏期、裂解期和平稳期。 噬菌体效价:每毫升试样中所含有的侵染性的噬菌体粒子数。也即噬菌斑形成单位数烈性噬菌体:噬菌体侵入敏感细菌细胞中，凡在短时间内完成吸附、侵入、复制、装配与释5 放个阶段而实现增殖的噬菌体，称为烈性噬菌体。 温和噬菌体:温和噬菌体的DNA只整合在宿主的核染色体组上，随宿主DNA的复制而同步复制。在一般情况下不进行增殖和引起宿主细胞裂解 RNA 类病毒:类病毒是当今所知道的最小、只含一种成分、专性细胞内寄生的分子生物。朊病毒:朊病毒是一类能侵染动物并在宿主细胞内复制的小分子无免疫性的疏水蛋白质 刺突:有些病毒粒子表面尤其是在有包膜病毒粒子表面具有的突起物称为刺突。 核衣壳:核衣壳是病毒蛋白质衣壳和病毒核酸的合称。 衣壳粒:衣壳粒构成病毒衣壳，它是病毒在电镜下可辨别的最小形态单位，每个衣壳粒可由 同种或不同种蛋白质亚基构成。 包膜:有些较复杂的病毒，在其核衣壳外还包裹一层由类脂或脂蛋白组成的囊膜，称为包膜。 病毒粒子:病毒粒子是指成熟的、结构完整的、有感染性的单个病毒。 噬菌斑:将少量噬菌体与大量宿主细胞混合后，将此混合液与琼脂培养基在培养皿中充分混匀，铺平后培养，结果发现在平板表面布满宿主细胞的菌苔上，可以用肉眼看到一个个透明 的空斑，称为噬菌斑。 空斑:单层细胞受动物病毒感染后而形成一个个空斑。 枯斑:指植物叶片经植物病毒感染后，出现局部坏死病灶。 自发裂解:在溶源菌的分裂过程中，极少数细胞中原来处于整合态的前噬菌体转变成营养态的裂解性噬菌体，引起宿主细胞裂解的现象 凯隆载体:人工构建一种特殊噬菌体载体，在其上可插入不同大小外源DNA片段。当其侵入宿主细胞后，即可整合在核染色体上并进行复制和表达，可用于基因中 1. 为什么说病毒是一类非细胞结构的大分子生物, 1.RNADNA答案无细胞结构:无细胞壁，无细胞膜，无核糖体;只含一种核酸:或;无能量代谢;无个体生长，无二等分裂;对一般抗生素不敏感;在离体条件下，能以无生命化学 大分子状态长期存在，并保持其侵染性。 2. 病毒核酸共分哪几类,试对每种类型写出一种病毒名称。 2.?DNAE.coliT4+DNA?RNA答案病毒:噬菌体;病毒:噬菌体;病毒:呼肠孤病 +RNA-RNA 毒;病毒:烟草花叶病毒;病毒;水泡性口膜炎病毒。 21. 试述噬菌体对发酵工业的危害及防治措施。 21. 答案危害:轻则延长发酵周期，影响产品产量，重则引起倒罐，甚至被迫停产。 预防措施:不使用可疑菌种，保持环境卫生，不随便排放或丢弃活菌，注意通气质量， 加强管道及发酵罐灭菌，筛选抗性菌株。 发现噬菌体污染的应急措施:尽快提取产品，使用药物抑制，改用抗性菌株 22. 简述逆转录病毒在宿主细胞内复制、增殖的主要步骤。 22.+RNA-DNA 答案以为模板在逆转录酶作用下合成。 +RNA-DNARNA-DNA 与两者组成杂种双链，其中经水解留下。 -DNA?DNA 经复制，产生。 Ds DNA 整合到宿主基因组上。 DNAmRNA+RNA它既可以自身转录出，继而合成衣壳、刺突和逆转录酶等，并与 组成子代病毒粒子;也可与宿主核染色体同步复制。 23.56mRNA 试述类不同核酸类型的病毒的种合成方式。 23.DNA-DNAmRNA 答案双链病毒:以为模板合成。 DNA-DNA-DNAmRNA 正链病毒:，再以为模板合成。 RNA 双链病毒:病毒粒子携带转录酶 RNA-RNAmRNA 部分双链病毒:以半保留方式转录，以为模板合成。 RNA-RNAmRNA 部分双链病毒(呼肠孤病毒)以全保留方式转录。以为模板合成。 RNA+RNAmRNA-RNA-RNA正链病毒:病毒粒子携带转录酶以作为或， mRNA 合成 RNA-RNAmRNA 负链病毒:病毒粒子携带转录酶以为模板合成 +RNA-DNA-DNA?DNA逆转录病毒:病毒粒子携带逆转录酶，逆转录为，复制成， mRNA 然后整合到染色体上，再转录出。 27. 试述病毒核酸的生理功能。 储存病毒遗传信息; 控制病毒自我复制; 影响病毒变异，经诱变处理后病毒核酸，可使病毒发生变异; 影响病毒对宿主的感染范围，病毒核酸比病毒粒子感染范围广，但感染力低; 可使宿主细胞发生病变。 ?外膜脂类， ?刺突， ?内膜蛋白， ?核心蛋白， RNA ?， ?反转录酶;人类免疫缺陷 病毒模式 ?头部， ?颈部， ?颈须， ?尾鞘， ?尾管， ?基板， ?刺突， ?尾丝 T4噬菌体 ?潜伏期， ?裂解期， ?平稳期 ?隐晦期， 3/cm ?噬菌斑数， min ?感染后时间(); T4噬菌体 ?吸咐，?侵入，?增殖，?成熟，?裂解，?整合，?同步复制，?自发或诱导1. 试述检验溶源菌存在的主要实验步骤及结果。 1.答案步骤:将少量溶源菌与大量敏感指示菌混合;再与琼脂培养基混合并倒平板;培养; 观察是否出现溶源菌菌落。 结果分析:在平板上如发现中央有一菌落，其四周为透明圈的特殊噬菌斑，则证明有 溶源菌存在。 2. 试述利用双层平板法测定噬菌体效价的主要步骤及其优点。 22.答案主要步骤:制备底层平板(含,琼脂);再倒上层平板(将上层琼脂培养基，宿主菌 悬液，噬菌体试样混合并倒平板);保温培养;进行噬菌斑计数。 优点:?弥补皿底不平缺陷，?噬菌斑大小一致、边缘清晰、不易重叠，?噬菌斑大， 利于计数。