银芪抗病毒颗粒质量研究

银芪抗病毒颗粒质量研究 银芪抗病毒颗粒质量研究 第29卷第5期 2006年05月 工Vo1.29Na5 May.2006 银芪抗病毒颗粒质量研究 刘文全,李兴尧,张元明,李文烈,马静- (1.石家庄以岭药业股份有限公司,河北石家庄050035;2.石家庄中奇制药技术有限公司,河北石家庄050010) [摘要]对处方中金银花,黄芪等主要药材进行了薄层鉴别,采用高效液相色谱法对绿原酸含量的测定进行了考察. 结果表明,绿原酸在0.456—3.192lag范围内呈现良好的线行关系,平均回收率为99.87%,RSD为I.58%.该方法简单,专属性 强,重现性好,能有效控制制剂的质量. [关键词]银芪抗病毒颗粒;薄层色谱法;高效液相色谱法;绿原酸 [中图分类号]R927.2[文献标识码]B[文章编号]1003—5095(2006)05—0062—02 由金银花,黄芪等制成的银芪抗病毒颗粒具有 补中益气,清热解毒之功效,主要用于治疗风热感 冒,瘟病发热,热血毒痢,喉痹,丹毒以及免疫力低 下,上呼吸道感染,小儿肺炎等症,对感冒易感人群 有一定预防作用.药理实验表明,金银花提取物具有 显着的抗菌作用,其主要成分为有机酸,其中绿原酸 和异绿原酸是金银花抗菌作用的有效成分.3,4一二 咖啡酰奎宁酸,3,5,4,5一二咖啡酰奎宁酸的混合物 也为其抗菌有效成分.黄芪主要含黄芪苷甲,乙,丙 等皂苷以及芒柄花素,毛蕊异黄酮,2,,4,一二羟基一 5,6一二甲氧基二氢异黄酮和熊竹素等黄酮类化合 物,黄芪味甘,性温,具有补气,利尿,排毒,排脓,敛 疮,生肌等功效[]. 为有效控制银芪抗病毒颗粒的质量,笔者制订 了金银花,黄芪的薄层鉴别方法,方法简单且专属性 强,用高效液相色谱法制订了绿原酸的含量,专属性 强,重现性好. 1仪器与试剂 超声波清洗器(中国宁波);万分之一电子天平 (sartoriusBP121S);Agllent1100高效液相 色谱仪(美国). 金银花对照药材(批号为1060-200002),黄芪 甲苷(批号为0781—200210),绿原酸对照品(供含 量测定用,购自中国药品生物制品检定所),甲醇 (色谱纯,天津康科德),水为重蒸馏水.其余试剂 为纯. 2实验内容 2.1鉴别 [收稿日期]2006-03-22 [作者简介]刘文全(1977-),男,助工,主要从事药物分析, 质量检验工作. 金银花的TLC鉴别:取本品4g,研细后加乙酸 乙酯置水浴上回流提取1h,放冷,过滤,将滤液蒸 干.残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;取金银花对 照药材1g,同法制得对照药材溶液;取不含金银花 阴性样品,同法制得阴性样品溶液.取以上3种溶液 各10—20pL,分别滴于同一含羧甲基纤维素钠的 硅胶G薄层板上,展开取出晾干,置紫外灯365nm 下检测,显相同颜色斑点. 黄芪的TLC鉴别:取本品3g,加石油醚超声处 理30min,过滤,弃去石油醚.加甲醇30IllL,置水浴 上加热回流1h,过滤,回收甲醇后将滤液浓缩至 干,残渣加水10IllL,用饱和正丁醇溶解,振摇提取3 次.合并正丁醇提取液,用氨试液提取2次,再用水 洗2次.将正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5mL作为 供试品溶液.取不含黄芪的阴性样品同法制成阴性 样品溶液,取黄芪甲苷对照品制成每1IllL含0.5mg 溶液,作为对照品溶液.取上述3种溶液各10pL, 分别滴于同一硅胶G薄层板上,以氯仿一甲醇一水 于10?以下放置.将下层溶液展开取出,晒干后喷 以10%硫酸一乙醇溶液,于105?烘至斑点显色清 晰. 2.2含量测定 金银花主要含绿原酸,异绿原酸及黄酮类成分, 其水煎膏剂及煎膏对多种细菌和病毒有抑制作用. 选取绿原酸作为质量控制指标. (1)色谱条件与系统适应性条件用十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈一0.4%磷酸水溶液为 流动相:检测波长为327nm;柱温为40?;理论板 数不低于4000. (2)对照品溶液的制备称取适量绿原酸对照 品,加入50%的甲醇,制成每1IllL含0.228mg的溶 第5期刘文全等:银芪抗病毒颗粒质量研究?63? 液,作为对照品溶液. (3)供试品溶液的制备取本品研细,精密称 取i.5g,置具塞锥形瓶中,加入50%的甲醇溶液50IIlL, 加塞密闭,称定重量,采用超声处理(250W,40kHz) 30min,放冷,称重,用50%甲醇补足减少的重量,摇 匀,过滤,弃去初滤液.精密吸取续滤液5IIlL,置25IIlL 容量瓶中,用50%甲醇定容至刻度,摇匀,用微孔滤 膜(0.45um)过滤,即得供试品溶液. (4)空白试验称取处方量1/20的除去金银 花的中药材,按制备工艺制得空白样品,按供试品溶 液的处理方法进行处理,得空白样品溶液.吸取空白 样品溶液,对照品溶液及样品溶液,按照选定的测定 条件进行检测,结果呈阴性且无干扰. (5)线性关系考察分别精密吸取对照品溶液 (0.228mg/mL)2,4,6,8,10,12uL,注入液相色谱 仪,测定峰面积.以峰面积对进样量(ug)进行线 性回归,得回归方程为y=102.73+2801.4x,r=0.999. 结果表明,绿原酸在0.456—3.192ug范围内进样 量与峰面积线性关系较好,见表1. 表1线性关系考察结果 堡昼0.4560.9121.368i.8242.2802.736仟亘/g 峰面积A1363.42619.23923.35297.36582.59033.7 (6)精密度实验吸取对照品溶液,连续进样 5次,测定峰面积,检测结果见表2.吸取样品溶液连 续进样5次,测定峰面积,检测结果见表3. 表2对照品溶液峰面积检测结果 峰面积A3296.3263286.3i73290.4963300.1843301.i02 RsDf%i.187 峰面积A6648.4566645.9826658.1246640.1366646.147 RSO/~1.098 (7)稳定性实验吸取相应的供试品溶液,每 隔一定时间进样,测定峰面积,检测结果表4. 表4稳定性试验结果 时间/h048RSO/~ 样品峰面积A6643.1656630.1986621.2976631.553i.18 (8)回收率实验结果(表5) 表5回收率结果 ,一 样品中绿添加对照测出绿原回收平均回RSD "原酸量/mg品的量/mg酸的量/mg率/%收率/%/% 3结果与讨论 3.1直接在紫外光灯365nm下鉴别金银花,斑点 清晰,干扰少. 3.2鉴别黄芪样品通常采用通过D.大孔吸附树 脂(内径1.5cm,长12am),以50IIlL水洗脱,弃 去水洗液再用30mL40%乙醇洗脱,弃去乙醇洗脱 液,再用50mL70%乙醇洗脱.收集洗脱液,蒸干,作 为供试品进行斑点分离效果较好.实验发现,去掉上 述实验过程分离效果一样好,也无干扰. 3.3对照品溶液和供试品在常温下见光易分解,如 需保存时间更长,应置l0?以下保存,对照品分解 后其液相谱图紧接主峰后将出现一小峰. 3.4该方法简单,专属性强,重现性好,能有效控制 制剂质量. [参考文献] [1]郑占虎.中药现代化研究与应用[M].学苑出版社,1988. [2]孙文基.天然药物成分定量分析[M].中国医药科技出版社,2003. [3]张贵君.现代实用中药鉴别技术[M].人民卫生出版社,2000. [4]沈映君.中药药理学[M].上海:科学技术出版社,1997. [52刘永和上银黄胶囊质量研究[T].中国药品标准2004,5(1):60—62. StudyonQualityCriteriaforYinHuangKeLi LIUWen—quan1.LIXing-yao2.ZHANGYuan-ming1.LIWen—lie1.,hlAJ/n (1.Yi1ingPharmaceuticalIncorporationLimitedCompany,ShiJiazhuang050091,China:2 .ZhongQiPharmaceutical TechnologyLimitedCompany.Shijiazhuang050010,China) Abstract:LoniceradasystylaandAstragatusmembranaceusinYinHuangKeLiwasmadequalitativedifferentiationwith TLC.thecontentofChlorogenicacidwasdeterminatedwithHPLC.Result:thedeterminationresultwassatisfying.The ChlorogeniCacidshowedagood1inearityrelationshipatarangeof0.456g一 3.192g.theaveragerecoverywas99.87%. RSD=I.58%(n=6).Conclusion:ThemethodiSsimpleandaccurate.canbeusedtocontrolthequalityofthiSpreparation. Keywords:YinHuangKeLi:TLC:HPLC:ChlorogeniCacid