妊娠中期羊水染色体诊断及随访结果分析

妊娠中期羊水染色体诊断及随访结果 2 妊娠中期羊水染色体诊断及随访结果分析 郑育红蒋永华银益飞孙筱放 广东省广州市第二人民医院妇产科研究室?广州市生殖与遗传重点实验室510150 ? 215? ? 生殖健康? 中国图书分类号R715文献标识码A文章编号1001-4411I2O07)02-0215-03 【摘要】目的:2002-2004年本院妊娠中期羊水染色体检查及产后随访结果,为今后产前诊断提供经验.方法: 原位传代培养羊水细胞并制备染色体,G显带分析核型,产后随访.结果:638例中发现27例异常染色体,其中2l一三体2例, l8一三体2例,部分2l一三体l例,异位5例,倒位8例,嵌合4例.结论对高危妊娠妇女进行羊水染色体核型检查是必须的, 开展相关的B超检查及分子诊断,可以进一步提高产前诊断的准确率. 【关键词】羊水染色体产前诊断随访 Theanalyzedofkaryotypesofamnioticfluidcellandfollowup ZHENYu—Hong,JIANGy0一 Hua,YINYi—eta1.TheSecondPeople”sHospitalofGuangzhou,Guangzhou Re— searchInstituteofObstetricsandGynecology,Guangzhou510150,Guangong,China [Abstract]Objective:ForbetterprenatMdiagnosis,638ca窨 esofkaryotypesofamnioticfluidcellwereretrospectivelyanalyzed andfollowedup..Me~ods:AmnioticfluidcellswereculturedinsituandtheirkaryotypeswereanalyzedbyGband,followedthemafter delivery.Results:27abnormalkaryotypeswerefoundfrom638ca8e.Amongthem,therewere2Cag~tof2ltrisomy,2ca8eof18trisomy, 1caseofpart21tfisomy,5caseoftranslocation,8case8ofinversionand4casesofmosaicism.Conduslon:Itisnecessarytoanalysiskar- yotypesofarrmioticfluidcellforhighriskgravida,combinedwithmoleculediagnosisCanbebettertoprenataldiagnosis. (Keywords]Karyotypesofamnioticfluidcell;Prenataldiagnosis;Followup 利用妊娠中期羊膜腔穿刺术进行细胞遗传学检查是产前 诊断胎儿染色体病的主要方法之一,笔者分析了2002—2004 年638例孕妇在本院进行妊娠中期羊水细胞染色体核型检查 资料及随访结果,探讨此时期胎儿染色体异常发生率及主要 类型. 1对j|l及方法 1.1对象来源.2002—2004年在本院就诊,符合产前诊断指 征的638例孕妇,年龄在21—47岁之间,孕13—26周.其中 双胎4例(单羊膜囊1例).产前诊断指征分布见表1. 裹12002-2O04年羊水染色体诊断指征 ?包括孕期服药史;?包括年龄接近35岁,近亲结婚scI辅助生 殖技术妊娠,x线,电离辐射等;?同时具有2项以上指征者.按第一指 征分类 1.2实验方法.?标本收集:无菌下抽取羊水20nIl,注入 2个lOlIll无菌离心管内,经100—150g离心5rain后,吸弃 上清液,留0.5lIll制成细胞混悬液.?接种与培养:采用本 实验室常规的原瓶传代培养….将细胞混悬液注入盛有2ml 培养基(GIBCO,DMEM)的培养管内,在37?CO培养箱 内静置5—7d,以后2d换液1次.?收获:收获前4h加入 秋水仙素,用胰酶消化使细胞从管壁上脱落,收获.?制片: 吉姆撒染色,镜下观察,记数分散良好的中期分裂相20—3O 个,分析3—5个,显微摄影留档. 2结果 2.1羊膜穿刺并发症.除畸胎引产及1例穿刺1个月后不明 原因流产,无因穿刺操作引起的感染及流产,羊膜穿刺术对 分娩方式无影响. 2.2羊水培养成功率.本组病例羊水培养的最小孕周13周, 最大孕周26周,胎粪样羊水4例,血性羊水8例(离心前肉眼 观测呈红色).638例羊水均培养成功,无污染,成功率100%. 2.3染色体检查结果.高龄初产为产前诊断指征者占首位, 高达40.44%.638例羊水染色体中有27例为染色体异常,检 出胎儿染色体异常率4.23%,其中21一三体征2例,18一三 体征2例,部分2l一三体征1例,易位5例,其中4例平衡 易位,1例罗氏易位,倒位8例,均为9号染色体倒位,嵌合 体4例,43例染色体正常变异(Y?18号染色体,小Y,随 体次缢痕多态性,常染色体大小长臂等).妊娠中期异常羊水 染色体核型分布见表2. ? 216? 衰2妊娠中期异常羊水染色体核型分布 2Oo7年第22 3讨论 3.1胎儿异常核型分析 3.1.1三体.发现21,18一三体各2例,其中1例21一三体 及18一三体来自高龄初产组,余2例患者年龄均小于3O岁, 分别来自产前筛查21一三体,l8一三体高风险组.2l例21一 三体儿分娩史的孕妇羊水染色体检查均未发现三体.三体的 机理一般是由于生殖细胞在减数分裂中发生在第二次分裂时 染色体不分离所致,以21,18一三体常见,随母亲怀孕年龄 的增高其发病率也增高.但是我们从此次病例总结中可以发 现年龄低于3O岁的妇女三体发生率为0.5%,高龄初产组发 生率为0.7%,检验,=0.0038,P>0.005,无显着差 异,因此对有产前诊断指征的非高龄孕妇进行染色体检查是 必须的.虽然本次病例总结在21一三体儿分娩史组中未发现 染色体异常,但是应该注意到此类人群的三体发生率明显高 于一般人群】,再次妊娠时需要进行羊水染色体检查. 3.1.2父母中一方染色体异常.本次病例总结中,父母一方 染色体异常组的胎儿染色体异常的发生率最高(23.53%), 而且有部分患者是由于羊水染色体检查发现胎儿染色体异常, 要求父母进行外周血染色体检查发现父母中一方为染色体异 常携带者.父母染色体异常多见于染色体平衡易位或者罗氏 异位,由于平衡异位没有染色体的丢失,罗氏异位缺失的是 断臂的少量染色体,因而其大多数携带者表观无异常.但是 平衡易位携带者与正常人婚配后,其子女可能接受一条易位, 衍生的染色体,造成部分单体或部分三体,破坏了基因组的 平衡,罗伯逊易位可产生6种配子,其中一种正常,一种为 平衡易位配子,其余为不平衡配子,造成部分单体或部分三 体,是导致自然流产和生育畸形儿的主要原因之一【3】.因此 父母中一方为染色体异常者必须进行胎儿染色体检查. 3.1.3嵌合体.发现4例嵌合体,47,】【】【+mar/46,】【】【(14:26), 引产,胎儿里外观畸形;余3例46,xx/46,x,i(xq)(12: 1)-46,xx/47,】【】【+21;46,xx/47,】【】【+6(98:2)未能进行 产后随访.由于羊水细胞除胎儿脱落细胞外,还有部分来自 于胎膜及胎盘等胎儿附属物H,因此羊水染色体检查不能直 接诊断胎儿嵌合体,对于羊水染色体检查发现嵌合体的孕妇, 可以建议抽脐血检查,重复抽取羊水检查意义不大. 3.1.49号染色体臂间倒位.638例孕妇中检出8例46.XX (xY),inv(9),比率达1.125%,其中5例来自父母,余3 例未能进行父母的染色体检查,产后随访均未见异常群体 中9号染色体倒位见于1.8%的人群,目前多数报道认为本 身不具有病理学意义,故一般可以继续妊娠.但是也有报 道提出9号染色体的倒位与生殖功能的缺陷有关,本组病例 中不良孕史组仅出现1例9号染色体倒位,由于病例数少,不 能进行总结. 3.1.5染色体正常变异.本组病例共发现43例正常染色体 变异,其中包括5例小Y,11例犬Y(Y?18号染色体),其 它变异包括D/GS+(以随体柄比正常大1以上)5例,常染 色体的长臂变异,溢痕多态性,大中央着丝粒等,正常变异 的常染色体涉及1,9,13,14,15,16,21,22.随访发现, 除1例1号染色体大长臂的孕妇羊水穿刺后1个月自然流产, 流产胎儿外观未见异常,未复查脐血染色体,随访其他的正 常多态性染色体的胎儿出生后未发现异常,其中包括4例 1qh+的胎儿.有报道,大Y或者小Y染色体导致死胎.原因 可能是Y染色质中DNA重复或缺失所致.关于染色体结构异 态性是否对临床产生效应,目前尚无确切定论,有待进一步 探讨. 3.1.6性染色体异常.共发现3例染色体数目异常,分别为 47,xxy2例,随访一般情况好,未发现特殊,此类患者临床 表现以不育居多,也有部分病例出现性征发育异常,睾丸小 伴阴茎小,因此对此类型的病例随访应延长到青春期. 47,XXX1例.引产,外观无畸形,未做脐血检查.1例性染 色体结构异常46,】【】【,i(x)(ql0)21psk+,引产,腭裂畸 形. 3.2羊水染色体检查存在的缺陷.染色体病是导致新生儿出 生缺陷的一类遗传性疾病.由于染色体病无法治疗,一般依 靠产前诊断终止妊娠.羊水细胞培养制备染色体是目前产前 诊断染色体病最经典,最准确的有效方法之一.但是羊水染 色体培养有着明显的局限性:?羊水染色体的诊断时间受到 妊娠时间的限制,一为16,24周,不能对早期妊娠胎儿进 行诊断,严重的增加了需要进行诊断的孕妇的心理负担及对 异常胎儿引产的风险.?培养技术要求高,培养时间长,从 取样到报告时间要2周左右.?对嵌合现象难以判断.?不 能诊断多种单基因或者多基因遗传病,对于<5Mb片断基因的 粱仕山芬太尼复合异丙酚用于无痛人工流产术的临床观察第2期 异常无法检测.我们在实验中还遇到了一些相关的疑问: 3.2.1血污染的羊水.血污染的羊水,原因可能为抽取过程 中穿刺不能避开前壁胎盘,或者穿刺针损伤胎儿.因此,血 污染来源可能来自胎儿或母亲,血污染一定程度上会抑制羊 水细胞的生长,严重时导致羊水染色体报告与胎儿染色体不 符.本实验室采用原瓶传代培养法,4例血性羊水均培养成 功,其中1例4o岁,外院抽取羊水失败的孕妇,2周后在我 院抽取羊水时,严重血污染,羊水染色体报告为46,XX.为 了对结果进一步确认,我们加做了短串联重复序列(STR, shorttandemrepeats)亲缘性位点分析的分子诊断,得出羊水 中有来自不同于母亲的亲缘性位点,且为女性,因此可以肯 定培养的细胞来自胎儿. 3.2.2B超发现畸形的羊水染色体检查.B超提示胎儿畸形, 羊水过多,NT增厚的异常病例共l2例进行了羊水染色体检 查.其中3例引产后证实同B超观察的畸形病例相同(颈后 淋巴囊肿,无脑儿,肾脏发育畸形),但是羊水染色体检查均 未发现异常核型,仅有1例染色体正常变异的患者. 综上所述,羊水染色体检查对于染色体病胎儿的诊断有 重要意义,对指导优生优育,提高人口素质有重要作用.但 是由于其存在一定的局限性,因此有必要开展B超诊断及短 串联重复序列聚合酶反应(sTR—PCR),荧光原位杂交等分 子遗传诊断技术,不断改进和提高产前诊断的方法,使产前 诊断做到关注年轻孕妇人群,采样孕周提前,缩短采样到诊 断的时间J. - 217? 4参考文献 l郑育红,孙筱放,陈小蔓eta1.原瓶传代培养应用于羊水产前诊 断中的研究.中国优生与遗传杂志.2002,10(6):58—59 2孟金萍.吴爱华,张会珍.77例唐氏综合征儿家庭再孕二胎的产 前诊断.中国优生与遗传杂志,2005,13(4):102—103 3杜传书,刘祖洞主编.医学遗传学.北京:人民卫生出版社, 1983:139—142 4李巨,苏应宽主编.产科理论与手术.沈阳:辽宁科学技术出 版社.1998:84 SKuchinkaBD,BarrittU.MoyaGet.Twoco~$esofconfinedpl~e.- talmosaicismforchromosome4.incldingonewithmaternaluniparental disomy.PrenatDiagn.2001,21:36—39 6CheongKF,KnightI|A,TanMetaLVariantsofchromosome9inphe— notypieallynormalindividual~AnnAcadMedSingapore,1997,26 (3):312—314 7MEjA.Huhen,$eenl~Dhanjal,BarbaraPeril.Rapidandsimpleprena- taldiagnosisofcommomehl’omofomedisordells;advantagesanddisad- vantsgesofthemolecularmethodsFISHand9F—PCR.reproduction 2003,126,279—297 8RobertGBest.BestUpdateonPrenatalDiagnosisandScreening(AC— GA一复旦2005,”基因组医学”国际研讨会.上海,2005,JUNE 27) (2O05-O7-25收稿)[编校刘鹏博] 芬太尼复合异丙酚用于无痛人工流产术的临床观察 梁仕山广东省广州市东山区妇幼保健院麻醉科510080 中国田书分类号Ill6,.1文献标识码B文|.【编号1001.4411(2007}02-0217-02 【摘要】目的:了解芬太尼复合异丙酚用于无痛人工流产术的镇痛效果及不良反应.方法:随机抽取4o例无痛人工流 产术病例分成两组,研究组20例为首剂芬太尼0.001me/kg,复合异丙酚2me/kg;对照组20例为首剂异丙酚2me/kg.结果: 研究组镇痛效果好且异丙酚用量少,差异有统计学意义(P<0.01). 两组不良反应差异不明显.结论;芬太尼复合异丙酚可安 全用于无痛人工流产术,且镇痛效果好. 【关键词】芬太尼异丙酚无痛人工流产术 随着无痛人工流产术的普及,异丙酚被广泛应用,但异 丙酚属催眠性静脉麻醉药,镇痛效果弱,芬太尼复合异丙酚 用于无痛人工流产术中是否可加强镇痛效果.在我院实行无 痛人工流产术的病例随机抽取4o例,分为两组.其中20例芬 太尼复合异丙酚为研究组,另20例单用异丙酚为对照组,观 察其效果及副作用. 1资料与方法 1.1一般资料随机选择我院妇科4o例自愿终止妊娠而无 手术禁忌的早孕妇女,年龄20—4o岁,体重(5o?5)kg. 受术者禁食禁饮6h,术前不用任何药物. 1.2方法4o例受术者随机分为两组,其年龄,体重均无明 显差异.研究组20例,首剂芬太尼0.001me/kg,加异丙酚2 me/kg;对照组20例,首剂异丙酚2me/kg.均于肘正中静脉 或贵要静脉缓慢注射给药,注药时间半分钟,注药完毕后即 按常规行人工流产术.术中按首剂异丙酚的1/4—1/3量追加. 1.3观察观察受术者术前,诱导2min及术后的BP, HR,SpO.异丙酚的用药总量及追加总量,镇痛效果及人工 流产综合征,呼吸抑制,术后至唤醒时间. 1.4镇痛标准优:受术者术中安静,无肢体扭动.良:有 轻微肢体扭动,可继续手术.差:肢体剧烈扭动,无法手术. 2结果 2.1镇痛效果和用药情况见表1.