银杏叶黄酮粗提物再精制

银杏叶黄酮粗提物再精制 银杏叶黄酮粗提物再精制 化学工程师 Chemical?20ff2年02月 科 研 与 开 发 文章编号:1002—1124{002)0I一0OO7—02 银杏叶黄酮粗提物再精制 高丽娟宋峰张立华肖国勇林炳昌 c鞍山钢铁学院化工分院辽宁鞍山l[4002J 摘要:确定银香叶黄酮提物再精制的新方法——恒流反相高压液相色谱梯度冼脱法.填料为厦相 Y一ClB7,10—30lml.梯度冼脱液为甲醇:水:3:7和甲醇:水=4:6及纯甲醇.总黄酮含量可达90% (IU'LC)以上. 关键词:反相高压液相色谱;梯度洗脱;黄酮 中国分类号:C~,5772文蘸标识码:A Ref'mgOilFlavoneGruffBringupSubstanceofLeavCankgoBiloaL Gao岛增FengZ,~angL/~tt,aX/aoC,uoya,~gL/n成rg:- (.~shan[n~tute0rIronandIhAnsh.~n1140O2) Abstract:Searchanewr嘲h0dinfetinghavesofCi.kgoBile,aLI~avon<:G几】唱ups【a1.旷恤methodis c'smstanc~e!u6~sp刊RP—HPLC础antelution.ThepackingRP—YWG—G18.10—30I~n.elu- fionismethanol:war=3:7and4:6aswebaspurenmtlranol1b【丑 l~ontenlofFlav~.ereaches90%(}删上)andover. Ke)n.F口rds:I一}?;Gradi~teluti叫;Hav 1盲茸言 银杏口1(LeavesofGinkgoBi[eaL)为银杏科,银杏 属植物银杏(Ginkgobiloa1)的叶子,银杏叶粗提物 (GBE)主舍黄酮,内脂两部分.银杏叶中黄酮类化 合物有使管状血管扩张,抗自由基,抑制脂质过氧化 的作用,以银杏叶为原料制成的药物用于对心血 管,脑血管,动脉硬化,高血压等疾病的治疗,有其它 药物无法达到的特殊疗效.另外,银杏制剂长期服 用几乎无毒副作用.银杏叶制品还可用于生物农 药,保链食品,化妆品等领域.目前银杏叶的研究开 发利用在国内外已经成为热点.银杏叶粗提物的提 取,主要采用水蒸汽蒸馏法,有机溶剂萃取法,超临 界流体萃取法等工艺.粗提物再经液一液萃取,沉 淀或吸附洗脱等分离方法精制,得到精提物.精提 物中黄酮类化合物总音量仅为2o%一36%.由于 黄酮类化合物含量较低,要保证药量,每次服用剂量 就较大.为了既保证药量又能减少每次服用剂量. 就必须提高精制物中黄酮类化合物的含量.基于市 场的需要,我们对银杏叶粗提物的再精制工艺做了 实验规模的改进,得到了精制中黄酮类化合物总含 量9o%(}lPLc)以上的满意结果. 2实验部分 2.1仪器及药品 检测系统:紫外检测器(岛津sP—IOAvP),分 析柱(RESCEKcorporafion,Dimensions250×4.6mm). 填料(PinnacleODS,粒度5Wn),恒流泵(GRSON). 制备系统:恒流泵(0—3mL/min,0,20MPa, Xir,a),半制备柱(1OOn~×10ram,不锈钢,大连依 收稿日期:?0I—10—23 作者简介:l:l丽蝌(1962),女.满族.t授.从qf物州!化学艘附畦教擘和被柑也讲分离 世定棚制备研究1 4最佳配方 A,O9 — 10 65Ol 12% 4% 4% 磺酸 Na,CO 三乙醇胺 甘油 防腐剂,包素,香精 4% 1% 4% 5% 适量 08禹丽娟等:银杏叶黄嗣粗挺抽再精制20O2年第1期 利特),填料(反相YWG—C】BH".10,30tma天津试 剂二厂),旋转薄膜蒸发器(ZrQ一972型,天津玻璃 仪器厂),真空泵(sHz—D型循环水式). 药品及试剂:银杏叶粗提物(鞍山胜利药厂),甲 醇(纯,北京试剂厂),二次蒸馏水(白蒸). 2.2实验步骤 2.2.1检测 (紫外检测器,检测波长360nm,灵敏度 0.1600AUFS;分析柱(250x4.6mm,ODS,5inn);恒流 泵(GILSON),流速1.0mL/min;流动相甲醇:水=6:4 (体积比). 2.2.2粗提物再精制方法 (1)样品配制 称量0.1g银杏叶粗提物,加入20mL甲醇溶解, 备用. (2)色谱柱准备 以10,30lma反相YWG—CI8H为填料,干法填 充于lO0rmnx10ram不锈钢半制备柱中,备用. (3)再精制实验步骤 在室温下,用进样器吸取备用溶液2.OwL,流人 定量管,以0.8mL/min流速洗脱.0,115min,流动 相为甲醇:水混=3:7(体积比);115—165rain,流动 相为甲醇:水混=4:6(体积比);165—210rain,流动 相为纯甲醇.收集115—150mln洗脱流水段液体, 用旋转薄膜蒸发器浓缩,1.2.1检测. 2.3再精制条件的确定 2.3.1固定相的确定 根据样品的极性和环保意识,优先选择反相 YWGl8H"固定相.对各种反相固定相及其粒度做实 验,结果以10,30lma的YWGI8H填料最佳. 2.3.2流动相的确定 在室温下,用进样器吸取备用溶液2.0mL注入 定量管.以0.8mL/min流速洗脱.每5min为一流分 段,取20,~L用1.2.1检测,结果见1. 表1流动相确定实验结果 5,10 5,10 100,】05 50—55 30—35 40—45 】40,145 】20,I25 5,1060,65 313—35I25,I30 I60,l65350—400 I45,1503?,3313 注:出现前杂质时间均为0,5rain;前杂质最多时间均为 5,10min 根据表1数据可得:以甲醇:水=3:7配比做流动 相,分离效果最好,前杂质和产品有极少量混合,但操 作时间太长;以甲醇:水:5:5配比做流动相效果最差, 产品各前杂质完全没有分离;以甲醇:水=4:6配比做 流动相和以甲醇:水=3.5:6.5配比做流动相的分离效 果都优于甲醇:水=5:5配比做流动相的分离效果,低 于以甲醇:水=3:7配比做流动相的分离效果. 为了既保证产品纯度又提高生产效率,做了梯 度洗脱选择. 2.3.3梯度洗脱条件选择 切换时间和流动相配比的选择 操作步骤见"再精制实验步骤",结果见表2. 表2梯度洗脱实验结果 洗问 . 检测结果 由表2结果可得:使用配比为甲醇:水:5:5的 流动相做梯度洗脱实验不能把剩余的前后杂质与产 品进行有效的分离,配比为甲醇:水=4:6的流动相 的分离效果优于配比为甲醇:水:5:5的流动相的 分离效果.所以我们选择使用配比为甲醇:水=4:6 和甲醇:水:3:7的两种流动相作梯度洗脱液. 2.3.4浓缩温度的确定 将含量合格的流分用段旋转薄膜蒸发器减压浓 缩,低于50'E,水蒸发困难,温度太高不利于药物有 效成分的保持,为此在50'E左右减压浓缩. 2.4质量检测 经1.2.1步HPLC检测,曲线略.可得粗提物, 产品及杂质的色谱流出曲线. 3结论 (1)恒流反相高压液相色谱能够实现银杏黄酮 总含量由原料24%提高到产品的90%以上的目标. (2)最好的填料是反相YWG—GI8固定性,最佳 的洗脱方法是梯度洗脱法,流动相是甲醇和水混合液. 5 6 5675 5433