性激素结合球蛋白(SHBG )作业指导书

性激素结合球蛋白(SHBG )作业指导书 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 15第 页，共 页 性激素结合球蛋白检验科免疫室 版本:A/0 (SHBG ) 项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用双抗夹心法原理，整个过程18分钟完成。 :10μl标本，一份生物素抗SHBG特异性单克隆抗体和一份钌复合体标记的SHBG特异性单克隆抗体一起反应形成一? 第1步“三明治”样抗原,抗体复合体。 ? 第2步:在加入链亲和素包被的微粒后，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。 ? 第3步:将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过Procell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。通过检测仪的定标曲线得到最后检测结果(定标曲线通过2 定标点和试剂条形码提供的主曲线生成)。 2. 标本要求 只有按如下方法收集的标本才适合用本试剂盒检测。 未稀释的血清必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。 请勿使用EDTA 血浆。 原则:回收率90,110,;斜率0.9,1.1;截距0.95。 在2–8?C可保存72小时;在-20?C可保存1月，只可冻溶一次。 在使用原始试管处理标本时，应遵循生产商所提供的指导。 如标本中有沉淀出现，必须先作离心处理再进行分析。已经加热失活的标本无法分析。不要对使用叠氮化物作为稳定剂的标本或质控标本进行分析。在进行分析前，请确保患者的标本、定标液及质控标本处于20–25?C的温度中。 由于蒸发因素的影响，标本、定标液及质控标本在放入分析仪后请在2小时内完成测定。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂: M 链亲和素包被的微粒(透明瓶盖)每瓶6.5ml;链亲和素包被的微粒，0.72mg/ml;结合力:470ng生物素/mg微粒;经过防 腐处理。 R1 生物素抗SHBG单克隆抗体(灰色瓶盖)每瓶10ml;生物素抗SHBG单克隆抗体(大鼠)1.25mg/L;磷酸盐缓冲液100mmol/L，PH值7.2;经过防腐处理。 R2 钌复合体标记的抗SHBG特异性单克隆抗体(黑色瓶盖)每瓶10ml;钌复合体标记的抗SHBG单克隆抗体(大鼠)1.25mg/L; 磷酸盐缓冲液100mmol/L，PH值7.2;经过防腐处理。 其他所需材料: 常规实验设备 Elecsys E 170/E 411 Elecsys 系统清洗液(SysClean),货号11298500 Elecsys E 170分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液 (ProCell M),货号12135019 Elecsys 检测池洗液(CleanCell M),货号12135027 Elecsys PC/CC杯,货号03023141 Elecsys 清洗液(ProbeWash M)，货号03005712 Elecsys 反应杯/加针头/废物袋(CUP/TIP)，货号12102137 Elecsys 系统清洗适配器(SysClean Adapter M)，货号03027651 Elecsys E 411分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液(ProCell)，货号11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)，货号11662970 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 25第 页，共 页 性激素结合球蛋白检验科免疫室 版本:A/0 (SHBG ) 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 Elecsys 系统清洗液(SysWash)，货号11930346 Elecsys 适配器 (Adapter for SysClean)，货号11933159, Elecsys 反应杯(CUP)，货号11706829 Elecsys 加样头(TIP)，货号11706802 4. 仪器和校准 使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准:每批SHBG试剂的试剂盒上都有条形码记录各批号试剂特异的定标信息。预先确定的主曲线适用于用Elecsys SHBG CalSet试剂盒进行测定的分析仪。 定校间隔:对条形码不同的试剂盒必须重新进行定标(在试剂盒被分析仪识别后的24小时内)。除此之外，以下情况必须重新进行定标: , 同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月(28天)。 , 同一试剂盒在分析仪上使用超过一周 , 根据要求进行标定:如质控结果超出范围时 5. 操作步骤(以E 170为例) 5.1 校准操作步骤: 在编缉各项目的时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标(BLANK键)或两点定标(TWO POINT键)、跨距定标(SPAN键)、多点定标(FULL键)，再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。 5.2 样本检测程序: 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。 批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。 进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。 6. 质量控制 Elecsys通用质控品(PreciControl Universal)1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 7. 计算方法 分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为nmol/L, ug/mL 或 mg/L。 换算方法: nmol/L x 0.095 = µg/mL (mg/L) µg/mL (mg/L) x 10.53 = nmol/L。 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 35第 页，共 页 性激素结合球蛋白检验科免疫室 版本:A/0 (SHBG ) 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 8. 参考范围 比利时、西班牙和德国6个临床医学中心对来自健康男性和女性的标本进行了Elecsys SHBG研究。此项SHBG临床研究同时用Elecsys Testosterone进行了平行测定。 研究结果评估了下列几项指标:SHBG，睾丸激素，和通常采用的来自不同计算方法的参数，如白蛋白这个重要参数。 , 游离睾丸激素指数或游离雄性激素指数激素指数(%FAI)计算如下(摩尔比):%FTI =(睾丸激素nmol.L/SHBG nmol/L)*100 , 游离睾丸激素指数(%FTI)或游离男性 mol/L和% , 游离睾丸激素TFc:n , 有生物活性睾丸激素(BATc):nmol/L和% FTc和BATc通过总睾丸激素、SHBG、白蛋白结合的睾丸激素和平均白蛋白估计浓度4.3g/dL计算获得。 请注意上述适合常规检测目的的计算方法并不适合那些有明显血浆蛋白谱异常的患者血清SHBG和总睾丸激素标本检测。在这种情况下必须考虑其实际的白蛋白浓度。 *如需要可获得有关计算方法的详细描述。也可访问www.issam.ch/freetesto.htm的主页。 获得结果如下: 每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性，必要时根据具体情况制订自己的参考范围。 9. 分析性能 精密度 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 45第 页，共 页 性激素结合球蛋白检验科免疫室 版本:A/0 (SHBG ) 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 10. 干扰因素 测定结果不受黄疸 (胆红素< 1026 µmol/L，或 < 60 mg/dl), 溶血(血红蛋白<1.8 mmol/L，或<2.9 g/dl), 高脂血〔症〕 (脂肪乳剂< 2700 mg/dl) 和生物素(< 60 ng/ml)的影响。(标准:回收率90,110,)。 对于因某些疾病需要而接受高剂量生物素治疗的患者(> 5mg/天)，必须在末次生物素治疗8小时后采集标本。 类风湿因子浓度低于1160 IU/mL对检测没有干扰。 SHBG浓度低于1000 nmol/L没有高剂量钩状效应。 体外对16种常用药物进行试验没有干扰。 试剂中的某些添加成分将试剂成分与少数血清间相互免疫反应产生的干扰减小到最低程度。 所有的测试都含有单克隆鼠抗体，单克隆鼠抗体治疗的患者可能会得到错误的结果。 Elecsys SHBG试剂盒附带有试剂添加剂以减少以上不良影响。 极少数标本中可出现高浓度链亲和素抗体或钌抗体而影响测定结果。 所以必须结合患者病史，各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。 11. 临床意义 性激素结合球蛋白(SHBG)是血液中运输睾丸激素和雌二醇的蛋白质。它是一种大分子球蛋白，分子量大约为95Kd，是由两个相同的亚单位组成的同型二聚体。每个亚单位含有两个二硫键。 虽然C18和C19类固醇可通过17α-羟基集团紧密连接2,3，但是C19酮类固醇，如脱氢异甾酮(DHEA)和甾烯二酮，则不易连接。SHBG对二氢睾酮(DHT)有高的亲合力，对睾丸激素和雌二醇具有中等的亲合力，而对雌激素酮、DHEA、甾烯二酮和雌激素三醇则仅有较低的亲合力。 SHBG与性类固醇结合是可逆的。浓度远远高于SHBG的白蛋白也能与类固醇结合，尽管其结合力明显较低(如睾丸激素结合力低100倍)。 SHBG半衰期大约为7天，主要在肝脏内代谢。其合成和排泄受雌激素调控4,5。SHBG血清浓度取决于所使用的雌激素剂量、持续时间、种类以及如何调控。男性激素和有男性激素作用的促孕激素会降低检测结果。 血清SHBG主要运输类固醇和降低/调节男性激素的作用6,7。血清SHBG浓度降低与男性激素浓度升高或靶器官男性激素作用过强有关。这就说明了男性和女性之间的性别差异，特别是青春期。 SHBG测定是雄性激素水平正常但同时有临床症状提示雄性激素过量情况下判定雄性激素作用过强或慢性作用的重要指标。当怀疑有相对较高浓度的游离雄性激素(如睾丸激素)时，SHBG是一个有效的测定雄性激素的辅助参数8。 由总睾丸激素(TT)与SHBG比值[%FAI或FTI=(TT/SHBG)*100]计算游离雄性激素指数(FAI)，也称之为游离睾丸激素指数(FTI)，也能计算游离睾丸激素大约量(FTc)，FAI和FT之间有正相关关系，另外还考虑了非特异性白蛋白结合的睾丸激素，可以计算有生物活性的睾丸激素(BATc)，BATc是游离睾丸激素和白蛋白结合的睾丸激素(通过结合的白蛋白量计算)之和。仅游离睾 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 55第 页，共 页 性激素结合球蛋白检验科免疫室 版本:A/0 (SHBG ) 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 丸激素有生物学活性，它也是患者临床状态的最好指标。游离且有生物活性的睾丸激素称之为非SHBG结合睾丸激素，可用硫铵 作为结合SHBG的沉淀剂和平衡分析法获测定非结合睾丸激素9,10。 老年男性其SHBG浓度增加，甲状腺机能亢进和肝硬化患者SHBG浓度也常升高。口服避孕药或服用抗癫痫药物时SHBG浓度也 升高。怀孕妇女由于雌激素合成增加，血清SHBG浓度也明显升高。而SHBG浓度降低则将见于下列情况:甲状腺机能减退，多囊 卵巢综合症(PCOS)，肥胖，多毛症，男性激素水平升高，秃头症，和肢端肥大症。 Elecsys SHBG使用两种人SHBG特异性单克隆抗体。 与下列物质无交叉反应:甲胎蛋白(AFP)，皮质醇结合球蛋白(CBG)，DHT，雌二醇，纤维蛋白原，人免疫球蛋白A(IgA)， 人免疫球蛋白G(IgG)，血浆酶原，甲状腺素结合球蛋白(TBG)，睾丸激素，甲状腺球蛋白(TG)，铁传递蛋白，以及促甲状腺 素。 13(参考文献 1. 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