【精品文献】复方高原春颗粒对缺氧脑损伤CAI区Fos蛋白表达的影响

【精品文献】复方高原春颗粒对缺氧脑损伤CAI区Fos蛋白达的影响 论文范文 题目:复方高原春颗粒对缺氧脑损伤CAI区 Fos蛋白表达的影响 编辑:司马小 作者:李朝晖 韩文 郭志坚 张如珍 【摘要】 目的 研究中藏药高原春颗粒对缺氧脑损伤CAI区Fos蛋白表达的影响。 利用缺氧脑损伤模型～通过免疫组织化学方法～观察24 h缺氧结束时及复氧后24 h两个时段大脑海马CAI区Fos蛋白表达的变化～同时观察预防性应用高原春颗粒后对上述指标的影响。结果 缺氧后大脑海马CAI区Fos蛋白表达减少～而服用高原春颗粒后～缺氧大脑海马CAI区Fos蛋白表达有一定程度的增加。结论 中藏药复方高原春颗粒的抗缺氧作用可能与影响大脑海马CAI区Fos蛋白表达有关。 【关键词】 高原春颗粒 缺氧 组织化学 fos蛋白 THE EFFECT OF GAO YUANCHUN COMPOUND PILLS ON Abstract Objective To study the effect of Gao Yuanchun Compound on Fos protein expression of CAI area in anoxic brain injury. Methods Objective To use of anoxic brain injury model and detected with Immunohistochemical method. The changes of the brain CAI area Fos expression in two stages of 24h at the end of hypoxia and reoxygenation after 24h was observed. At the same time, the impact of these indicators after the application of TCM herbs was also observed. Results The expression level of the hippocampus CAI area Fos protein reduced in anoxic brain, and a certain degree of growth in same area after the use of TCM herbs. Conclusion Role of anti-anoxia of the Gao Yuanchun compound pills is that it may affect the brain hippocampus CAI area Fos protein expression. Key words Gao Yuanchun pills Anoxic Immunohistochemistry Fos protein 国内外学者近年来就传统中药在抗脑缺血缺氧损伤中的作用及机制开 展了一系列研究～结果表明人参、银杏、丹参、当归、黄芪等中药具 有一定的抗缺血缺氧作用 ,,～,,。 本研究利用缺氧脑损伤模型～观察缺氧24 h结束时及复氧24 h时两 个时段大脑海马CAI区Fos蛋白表达的变化情况～并观察预防性应用 复方高原春颗粒后对上述指标变化的影响～以探索高原春颗粒抗脑缺 氧损伤作用及其相关机制。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验药物 高原春颗粒主要成分为中藏药黄芪、红景天、葶苈子等。处方由青海 大学医学院中医系提供～颗粒剂由广东一方制药有限公司提供,批 号:030412,。颗粒剂采用动态提取～真空低温浓缩、瞬时喷雾干躁 和干法制粒制备～经理化和薄层鉴别～在性状、气味、理化反 应、水分、溶化性、含量、卫生学检查等方面均符合相应质量。 1.1.2 实验动物与主要试剂 实验动物:SD大鼠由上海市实验动物中心提供～25只～体重200〒20 g～雌雄不拘。试剂:免疫组化试剂～兔抗C-Fos抗体,工作浓度1:1000,和生物素化羊抗兔IgG、 ABC Kit、Texas Red,工作浓度1:200,、 3～3二氨基联苯胺DBA Sigma购自Sigma公司。 1.2 实验方法 1.2.1 分组:25只大鼠适应性喂养1周后～随机分为3组:药物组,10只,、低氧组,10只,、常氧组,5只,。 1.2.2 给药方法:药物组于实验前48、24、1 h灌胃给药～高原春颗粒给药剂量为1g/kg/d～溶于生理盐水～浓度为20,,低氧组和常氧组只给等量生理盐水。 1.2.3 动物模型建立:将低氧组和药物组大鼠放入低压舱～暴露于相当于海拔5000米高度的空气压力环境中～维持24 h。常氧组大鼠臵低压氧舱中24 h。 1.2.4 Fos 免疫组化染色与Fos 检测:对缺氧24 h模型大鼠行戊巴比妥(50，100 mg/kg)腹腔注射麻醉～开胸～左心室插管～灌注肝素盐水50 ml(100 u/ml)～迅速剪开右心耳继续灌注4%多聚甲醛磷酸缓冲液300 ml～续灌30 min后开颅取脑～去除小脑和脑干～以4%多聚甲醛固定～常规方法制切片。采用ABC法检测Fos蛋白。另一部分动物出舱后～在常氧条件下饲养24 h～然后再取脑组织作免疫组织化学研究。 Fos的检测:在高倍视野下(10〓40)～观察大脑海马CAI区～胞核有棕色颗粒者为阳性细胞～选取5个高倍视野计数阳性细胞～并计算百分率。阳性细胞百分率=阳性细胞/(阳性细胞数+阴性细胞数) 〓100%。 1.4 统计方法 所有相对含量资料均采用,x〒S,表示。各组间均数间的两两比较～应用SPSS11.0统计软件进行单因素方差分析。 2 结果 海马CAI区Fos蛋白免疫组化染色观察结果:常氧组～海马CAI区有少量Fos蛋白表达～主要集中在椎体细胞层～位于细胞核内～呈弱阳性,缺氧组～缺氧24 h海马CAI区Fos蛋白表达与常氧组比较明显减少～P<0.05～复氧24 h后海马CAI区Fos蛋白表达进一步减少甚至消失～P<0.05,药物组～缺氧24 h海马CAI区Fos蛋白表达较常氧组及缺氧组大幅度增加～P<0.05～复氧24 h后海马CAI区仍有一定的Fos蛋白表达,与对照组相比差异无显著性～P,0.05 ,详细结果见表1,. 表1缺氧及复氧后脑海马CAI区Fos蛋白表达变化情况 (x〒S) 分 组缺,复,氧时间NFos常氧组51.000〒0.291缺氧组缺氧24h50.560〒0.227,复氧24h50.120〒0.106,,药物组缺氧24h52.247〒0.191,,?复氧24h50.952〒0.235 注:,表示与对照组比较～P,0.05,,表示与缺氧组缺氧24h比较～P,0.05,?表示与缺氧组复氧24 h比较～P,0.05. 3 讨论 本研究表明～缺氧后海马CAI区神经元内Fos蛋白表达减少～而中藏药组能使海马CAI区Fos蛋白表达较对照组及缺氧组大幅度增加,其影响可能是通过促进缺氧后微血管的扩张～以增加脑组织的血液供应～影响缺氧后早基因表达产物Fos蛋白的表达～使缺氧后神经营养因子、神经生长因子和DNA修复酶的产生增多～阻止神经元损伤的发生。 复方高原春颗粒是根据中医对高原病病因病机的认识而配制的。高原低压缺氧和气候寒冷等因素是高原病的主要病因。中医认为清气不足～宗气的生成和作用低下～肺朝百脉输精于皮毛的功能发生障碍～进而导致心、脑、脾、肺、肾等重要脏腑的生理活动虚衰不足～加之寒凝血流失畅～于是在气虚的基础上又形成了瘀血、痰饮、水湿等病理产物～其过程中气血水三者常相互影响～互为因果～最终形成本虚标实的一系列病理变化。本方选用黄芪为君药～以升举胸中大气～激发因低氧低温造成的脑、心、肺、脾、肾等对缺氧敏感脏器的功能活动,1,～辅以传统的抗缺氧良药红景天益气活血而标本兼顾。高原缺氧首先影响到人的心、肺、脑功能～致人出现头痛、头昏、心慌、胸闷、气促等一系列类似于肺心病的症状和体征～方中葶苈子泻肺平 喘～利水消肿～是一味治疗肺心病的要药～与黄芪和红景天为伍～补泻互济～以加强心肌收缩力～降低肺动脉压～改善血液循环～减轻肺部淤血,？,。全方益气强心～肃降肺气～温肾助阳～使气血和调～百脉流畅～津液输布通达～减轻和消除由于缺氧所致一系列病理生理变化。动物研究也显示～该方具有抗缺氧功效,,,。 【参考文献】 ,1, 袁红霞～陈艳春. 黄芪的现代药理研究及临床应用,,,.山东中医药大学学报～2000～24,5,:397,400 ,2,陈亚东～曹秀兰.高山红景天对小鼠耐缺氧抗疲劳及耐低温作用的影响,,,.中国中医药科技～2002～9,3,:157,158 ,3,衡冲～兰宏民～席剑.黄芪葶苈大枣汤为主治疗肺心病并心力衰竭35例,,,.陕西中医～2002～23,2,:105,106 ,4,韩文～郭志坚～张如珍～等.复方高原春颗粒抗缺氧作用的试验研究,,,.中国实验方剂研究,2006,12(7):59-60