【word】 白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用

【word】 白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用 白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖 抑制作用 142浙江中西医结合杂志2008年第18卷第3期Zh~iangJITCWM(Vo1.18No.32008 白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用 马泳泳温州医学院附属第一医院血液科温州325027 摘要目的:观察白藜芦醇(resveratrol,Res)体外单独及联合阿糖胞苷(Ara-C)对白血病HL-60 细胞的抑制作用.方法:在体外培养条件下观察不同浓度Res,Ara-C作用48小时后分别对HL-60 细胞增殖的影响.然后根据以上抑制结果,选择对HL-60细胞抑制率15%,30%的Ara-c药物浓 度.再与不同浓度的Res联合用药.在联合药物处理HL-60细胞48小时后,同样用MrrI’法检测联 合用药对细胞增殖抑制作用.结果:Res,Ara-C体外单独用药均能显着抑制HL-60细胞的生长增 殖,Res联合Ara.C(2.5g/m1)后,对HL-60细胞的增殖抑制作用显着提高,与单独用药组比较,差 异有显着性意义(P<0.05).结论:Res体外能显着抑制人HL-60细胞的增殖,Res联合Ara—C能显 着提高对HL-60细胞的增殖抑制作用. 关键词HL-60增殖白藜芦醇阿糖胞苷 InhibitoryEffectofResveratrolCombinedwithCytarabineonProliferationofHL-60CellsinVitroMA Yongyong.DepartmentofHemotology,theFirstAffliatedHospitalofWenzhouMedicalCollege,Wenzhou (325000),China AbstractObjective:Toexploretheinhibitoryeffectofresveratrol(Res)aloneorcombinedwithcyt— arabineonproliferationofHL-60cellsinvitro,Methods:Thecellgrowthinhibitionratesofcellswerede— tectedbymethylthiazolyltetrazolium(MrrI’)aftertreatmentbyResorcytarabineofdifferentconcentra. tionalonefor48hr.Basedontheaboveresults.theagentconcentrationofcytarabinewiththeinhibition rateofnearly15%一 30%waschosenandcombinedwithRes.Theinhibitionratesofcellsaftertreatment bycombinationofcytarabinewithdifferentdosageofReswerealSOdetectedbyMrrI’method.Results: SingleagentexperimentshowedResorcytarabinealonehadsignificantinhibitoryeffectonproliferationof cells.Theconcentrationofcytarabinewithinhibitionratenearly15%一 30%was2.5g/m1.Theinhibi— toryeffectonthecellproliferationtreatedbycombinationofReswith2.5g/mlcytarabinewasobviouMy improved.Thedifferencebetweenthatbycombinationandsinglemedicinewassignificant(P<0.05). Conclusion:RescansignificantlyinhibittheproliferationofHL-60cells.CombinationofReswithcytara- binecanimprovetheinhibitoryeffectonthecellproliferation. Keywordsvitroproliferationresveratrolcytarabine ‘ 目前,化疗仍是白血病最主要和最基本的治疗手 段.阿糖胞苷(Ara.C)是白血病化疗的一线药物,其 杀伤白血病细胞的能力与其诱导肿瘤细胞的凋亡有 关.Ara.C的临床应用受到白血病耐药的限制,其诱 导凋亡能力减弱,促进其耐药形成….白藜芦醇 (resveratrol,Res)是一种多酚类化合物,已在虎杖,葡 萄等72种植物(隶属12个科,32个属)中被发现,我 国中药植物虎杖鲜根中有较高的含量.近年研究 明Res对胃癌,乳腺癌等肿瘤具有显着体外增殖抑 制作用’4J.通过体外实验观察Res单独及联合联合 Ara-C对白血病HL-60细胞增殖的影响,初步探讨 Res单独及联合其他化疗药物用于白血病治疗的可 能性. 1实验 人白血病HL-60细胞株(购自南京凯基生物公 司);Res(购自美国Sigma公司,纯度>99.9%),用 二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)溶解,配成 400Ixmol/L贮存液,消毒后,分装,一20~C冻存备用; 噻唑蓝(MYr)和DMSO(均为美国Amresco公司产 品).处理细胞时,DMSO浓度?0.1%(实验证实该 浓度对细胞生长无影响);RPMI-1640培养基(南京 凯基生物公司);0.25%胰酶(美国GIBCO公司产 品);胎牛血清(杭州四季青公司). 2实验方法 2.1细胞培养人白血病HL-60细胞在5%CO, 37?条件下,用含10%胎牛血清,1%L一谷氨酰胺, 浙江中西医结合杂志2008年第l8卷第3期 ZhejiangJITCWM(Vo1.18N.1 100U/ml青霉素,lOO~g/ml链霉素的RPMI一1640培 养液传代培养. 2.2M1Tr法检测Res,Ara—C单独使用对白血病 HL-60细胞的增殖抑制作用将HL-60细胞调整浓 度至1×10/ml,接种于96孑L板,单一药物作用实验 时,每孑L分别加入不同倍比稀释浓度的药物.Res 的浓度分别为25/xmol/L,50p~mol/L,100Ixmol/L, 200p~mol/L;Ara—C的浓度范围设置为1.25ug/ml, 2.5ml,5ml,10.0t~g/ml.同时用含相应溶剂 细胞培养液作为溶剂对照组,另设空白对照组(不 含药物和细胞),每组设3组复孑L.37c【=,5%CO孵 育48小时后,每孔加人5mg/mlMr1Tr液20txl,再孵 育4小时,去上清,每孑L加入DMSO100txl,室温振荡 10min,于酶标仪492nm处测A.比色时,以空白对 照组调零.然后计算抑制率,抑制率=(1一处理组 A/溶剂对照组A)×100%.以上实验重复3次. 2.3M1Tr法检测不同浓度Res联合Ara—C对白血 病HL-60细胞的增殖抑制作用根据Ara—c单一用 药物对HL-60细胞的抑制率,选择抑制率在15%, 30%左右的Ara—C浓度作为联合用药时该药的浓 度,然后与不同浓度的Res(25/xmol/L,50p~mol/L, 100p~mol/L,200~mol/L)联合用药.联合药物作用 时,实验分为三组:不同浓度Res+2.5mlAra—C 组,溶剂对照组和空白对照组.实验方法同上,同样 计算抑制率. 2.4统计学处理实验数据均用(戈?s)表示,单因 素处理各组间样本均数的多重比较采用单因素方差 和LSD—t检验;单因素各处理组样本均数与对 照组样本均数的多重比较采用单因素方差分析和 Dunnett—t检验;两组比较采用成组t检验.用SPSS 10.0软件分析结果,P<0.05表示有统计学意义. 3实验结果 3.1Res和Am—C分别单独用药对白血病HL-60细 胞增殖抑制作用Res,Ara—C对HL-60细胞均有不 同程度的增殖抑制作用,并在一定范围内呈浓度依 赖性.见表1,2. 3.2联合用药对HL-60的增殖抑制作用Res联 合Am—C后对白血病细胞的增殖抑制作用显着提 高,见表3. 表1不同浓度Res对HL一60细胞的 增殖抑制作用(x_4-s)% 143 表2不同浓度Ara—c对ttI-60细胞的 增殖抑制作用(孟?s)% 堕堕堕笪堑鎏堡一 1.252.505.0010.00 抑制率l4.274-4.6520.13?5.7047.40?9.1682.37?14.95 表3Res联合Ara—c时对HL-60细胞的 增殖抑制作用(?s)% Res/ixmol/L 联合用药48小时增殖抑制率 一 c(2.5g/m1) Ara— 与2.5ixg/mlAra—c或相应浓度Res比较,P<0.05 4讨论 近年研究证实,Res对人体具有调节脂类代谢, 保护心脑血管和抗炎,抗过敏与抗肿瘤等多种药理 作用一.Res为天然化合物,无毒副作用,故其药用 价值极大.Am—C具有免疫调节,抗肿瘤,抗病毒作 用,对细胞的杀伤通过抑制细胞的核酸进行,作用于 细胞的不同周期』.本组结果与之相近 可见,R.s联合Ara—C后对白血病细胞的增殖抑 制作用明显提高.Res联用化疗药物后降低了两药 各自的剂量,但抑制效应不变,即两种药物很小剂量 就能达到各自单用但需很大剂量时才能产生的效 果.说明联合用药具有用量小,疗效好,副作用小, 不易耐药等特点. 参考文献 1ZhangY.LeiXY.Effectofbel一2antisenseoligodeoxymmle— otidesondrugsensitivityofleukemiacells.HematolJ,2003, 4:187—197 2曹庸,张敏,于华忠,等.不同植物,同种植物不同组 织部位中自藜芦醇含量变化研究.湖南林业科技,2003, 12(4):32 3董剑达,金洲祥,李春明.白藜芦醇体外对人胰腺癌细胞 增殖和细胞周期的影响.现代中西医结合杂志,2007,16 (12):1595 4Pozo—GuisadoE.MerinoJM.MU]eroNavarroS.eta1.Res— veratrol—indueedapoptosisinMCF一7humanhreastcancer cellsimolvesacaspase—independentmechanismwithdown— regulationofBcl一2andNF—kappaB+hatJCancer.2005115 (1):74—84 5Granados—SotoV.Pleiotropieeffectsofresveratro1.DrugNews Perspeet,2003,16(i):299—307 6CapizziRL.Curativechemotherapyforacutemyeloidleuke— mia:thedevelopmentofhigh—doseara—Cfromthelaboratmy tobedside.InyestNewDrugs,1996,】4(3):249-256 收稿Et期:20074)8—27