HPLC法测定米格列奈钙及其有关物质
第 卷增刊
试验室. . 年 月血 西 ? 法测定米格列奈钙及其有关物质 孟 霞,彭敬东
西南大学化学化工学院,重庆
摘 要:采用高效液相色谱法,室温下使用 。 × . ,色谱柱,以 乙腈一 . /溶液体积比为 :为流动相,检测波长为 ,流速为 . ,测定米
格列奈钙及其有关物质,米格列奈钙的浓度
在 ~/ 范围内线性关系良好,相关系数为 .。还与非水溶液滴定 法、元素分析方法对照验证,结果证明该方法适用于米格列奈钙及其有关物
质
的测定。
关键词:米格列奈钙;有关物质;高效液相色谱法;含量测定 米格列奈钙是由日本 制药
在该原料药的合成过程中,有其他杂质的产生,
公司研制的一种治疗糖尿病的新药 ,是继瑞格
它们的存在会影响米格列奈钙的疗效,故在质量
列奈、那格列奈后第 个美格列脲类药物,与瑞格
控制中必须严格控制它们的含量,以确保本品的
列奈、那格列奈以及传统磺酰脲类药物相比,具有
药效。本实验所建立的高效液相色谱法,与已报 作用
新颖、起效更快、作用持续时间更短、疗 道文献 相比,不仅提高
了检测灵敏度,还能同时
效更强的优势 。其作用机制是通过关闭胰腺 测定米格列奈钙及其合成关键中间体。本文还与 细胞膜上的依赖性 通道,造成 内流, 非水溶液滴定法、元素分析法等对
照验证,
使细胞内 浓度增加而使细胞外含胰岛素的囊 结果证明本方法具有分离效果好,重现性好,专 泡脱粒,从而刺激胰岛素的分泌,降低血糖而达 属性强,准确性高等优点,可作为本品的含量测 到治疗目的 。
定方法,对米格列奈钙的质量控制具有明显的实 米格列奈钙合成工艺已有报道?“,其中文 用价值。米格列奈钙及其中间体的结构式如图 献 提供的路线是目前制备米格列奈的最优路线。 所示。 /
? 人人。以 ‘
图 米格列奈钙及其中间体的结构式
一中间体 ; 一中间体 ; 一米格列奈钙 实验部分 柱温箱、 二级管阵列检测器 、 百一 . 仪器 色谱工作站、意大利高效液相色谱仪美国 公 型元素分析仪。
司,包括 在线真空脱气机、泵、
作者简介:孟 霞 一 ,女,硕士研究生; . . ~?. .
第 卷增刊 分析试验室 ?年 月. . 试剂 的波长处有最大吸收。考虑各中间
体和成品在
所用的乙腈、甲醇为色谱纯, : 、 末端均有较大的吸收,选择在 波长进
行测
定。 、 均为分析纯;米格列奈钙样品批 . . 溶剂的选择 由于本品在流动相中不能完 号: 、 、 和对照品、中间体、
全溶解,在甲醇中和乙醇中的溶解性较好,但本 中间体 均由重庆人本药物研究院提供。 品在以乙醇为溶剂时,主峰峰形较差,主峰理论 . 试验溶液的制备
塔板数较低。用甲醇为溶剂时,本品的主峰理论 标准品溶液:精密称取米格列奈对照品 塔板数较高,而且该溶剂峰不影响本品的含量测 . ,置于 容量瓶中,加甲醇使溶解并
定,故选用甲醇为溶剂。
稀释至刻度,摇匀;供试品溶液:取米格列奈钙样 . 系统适用性和专属性考察
品批号: . ,置于 容量瓶中,
按上述色谱条件,取 . 项下标准品溶液、中 加甲醇使其溶解并稀释至刻度,摇匀即得;中间 间体溶液、混合溶液各 注入液相色谱仪,记 体溶液:取中间体 约 . 和中间体 约 . 录色谱图,可知米格列奈保留时间为 . ;中 ,分加置于的容量瓶中,加甲醇溶解并稀 间体 的保留时间为 . ,中间体 的保留时 释至刻度,摇匀即得;混合溶液:取供试品溶液液 间为 .,图
示的是混合溶液中米格列奈 及各中问体溶液各 份,混合即得。
钙及其有关中间体的 图。由图可知,中间体 . 色谱条件
与主峰之间的分离度符合要求。
色谱柱: ? 柱 . , ;检测波长: ;流动相:乙腈. . / 用调节 至 :;柱温:
室温;流速: ./ ;进样量: 。
结果与讨论
. 色谱条件的选择
. . 色谱柱、流动相的选择 选用常用的十八??二?一 ? ??二 一
烷基硅烷键合硅胶柱;选用甲醇、乙腈与水、 . / 的醋酸铵、、 、醋酸钠、四
/丁基溴化铵等各种缓冲液体系对本品进行洗脱, 图 混合溶液中米格列奈及其有关中间体
最后筛选出乙腈一 . / 溶液体系,在 一中间体 ; 一中间体 ; 一米格列奈钙 此体系中,本品主峰的理论塔板数较低,将 . / 溶液用调节 至 后,米格
取 . 项下供试品溶液 ,再加 . / 列奈钙主峰峰形好,主峰与相邻杂质峰的分离度 的约,于 ?水浴中加热后取样
符合要求,主峰的理论板数较高,故选用此流动 检测,结果如图 所示;加 的 ./ 的
相作为本品含量测定的流动相。将流动相的 调 ,于 ?水浴中加热 后取样
检测,结
到 和 . ,考察本品的分离情况,结果表明本品 果如图 所示;加的 %的,于 ?水
的主峰和杂质峰的分离度无明显变化。说明本品 浴中加热 后取样检测,结果如图 所示; 流动相的 有微小变动,对本品的有关物质检查 取本品 . 呶置坩埚中,直接加热破坏后,加入 无影响。甲醇溶解摇匀,取 进行检测,结果如 .. 检测波长的选择 取 . 项下标准品溶 图 所示;取在紫外光下照射 天的样品 . 液、中间体溶液各适量,分别在 ~ 范围,加 甲醇溶解,摇匀,取 进行检测,
进行紫外波长扫描。结果显示,中间体 在
结果如图 所示。
和 波长处有最大吸收;中间体 在
和/ 波长处有最大吸收;米格列奈钙在第 卷增刊. . 分析试验室 年 月? / / .
图 酸破坏性试验
图 高温破坏性试验
. 』/图 碱破坏?性试验
图 光照破坏性试验
好,可用于米格列奈及其有关物质的检查。
. 线性范围
称取米格列奈钙对照品 . ,置于容量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇
匀,精
密量取该液 . 、 . 、 . 、 . 、 . 、 . 、 . 和分别置于 容量瓶中,加
甲醇稀释至刻
/
度,摇匀,按上述色谱条件,分别取上述标准溶液
注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度对峰
图 氧化破坏性试验
面积进行线性回归分析,数据见表 ,线性方程为
由图 ~图 可知,将本品进行酸、碱、一,相关系数:. 。结果表 降解和热、光降解破坏后检测,降解产物与主峰
明本品浓度在 ~ / 范围内呈良好线性关
之间的分离度较好。说明该色谱系统的专属性良
系。
表 校正曲线的回归分析
. 方法精密度 中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。另精密称取米格列
取米格列奈样品批号: 约 ,称
奈对照品适量,同法配制,按上述色谱条件,分别
份,分别置于容量瓶中,加甲醇溶解并稀释 取上述溶液 皿注入液相色谱仪,记录色谱图,
至刻度,摇匀,精密量取 置于 容量瓶 用外标法计算其含量,得相对标准偏差为 . .
第 卷增刊 分析试验室? 年 月
. %,数据见表 。结果表明方法精密度符合要 注入液相色谱仪,连续进 次,记录色谱图,根据
求。 峰面积计算相对标准偏差。测定结果见表 ,结果
. 仪器精密度 表明仪器精密度符合测定要求。
取 ./ 的米格列奈对照品溶液 止
表 方法精密度 :
表 仪器精密度
. 溶液稳定性考察
根据主峰峰面积计算相对标准偏差。结果见表 ,
取 . / 的米格列奈钙对照品溶液, 结果表明本品溶液在室温下放置 ,样品溶液
按上述色谱条件,分别于 、 、 、 、 、 、 、 稳定。
、 取 注入液相色谱仪,记录色谱图, 表 溶液稳定性考察
表 样品含量测定结果
. 检出限测定
以上述色谱条件,按信噪比为 对最低检测 批号 含量/%
限进行测定。结果表明:浓度为 . ,进样 .皿时,主产物峰信号与基线 倍噪
音基本一.
致。即检出限为 . × × × ~ . . 。 . 含量测定
方法对照
取米格列奈钙样品适量,加甲醇溶解并制成 . 非水溶液滴定法
每 中约含 的溶液作为供试品溶液。另 中国药典 版二部附录/ 。
精密称取米格列奈对照品适量,同法配制。分别 由于本品结构中含有 个叔胺,可能具有一 取上述供试品和对照品各 注入液相色谱仪, 定的碱性,因此选用来测定本品的含量,根 记录色谱图。按外标法以峰面积计算,三批样品 据消耗的滴定液的量计算本品的含量。
的含量测定结果见表 。
测定方法:取本品 . 批号:,
一?