HPLC法测定米格列奈钙及其有关物质

HPLC法测定米格列奈钙及其有关物质 第 卷增刊 分析试验室. . 年 月血 西 ? 法测定米格列奈钙及其有关物质 孟 霞,彭敬东 西南大学化学化工学院,重庆 摘 要:采用高效液相色谱法,室温下使用 。 × . ,色谱柱,以 乙腈一 . /溶液体积比为 :为流动相,检测波长为 ,流速为 . ,测定米 格列奈钙及其有关物质,米格列奈钙的浓度 在 ~/ 范围内线性关系良好,相关系数为 .。还与非水溶液滴定 法、元素分析对照验证,结果证明该方法适用于米格列奈钙及其有关物 质 的测定。 关键词:米格列奈钙;有关物质;高效液相色谱法;含量测定 米格列奈钙是由日本 制药 在该原料药的合成过程中,有其他杂质的产生, 公司研制的一种治疗糖尿病的新药 ,是继瑞格 它们的存在会影响米格列奈钙的疗效,故在质量 列奈、那格列奈后第 个美格列脲类药物,与瑞格 控制中必须严格控制它们的含量,以确保本品的 列奈、那格列奈以及传统磺酰脲类药物相比,具有 药效。本实验所建立的高效液相色谱法,与已报 作用机制新颖、起效更快、作用持续时间更短、疗 道文献 相比,不仅提高 了检测灵敏度,还能同时 效更强的优势 。其作用机制是通过关闭胰腺 测定米格列奈钙及其合成关键中间体。本文还与 细胞膜上的依赖性 通道,造成 内流, 非水溶液滴定法、元素分析法等对 照验证, 使细胞内 浓度增加而使细胞外含胰岛素的囊 结果证明本方法具有分离效果好,重现性好,专 泡脱粒,从而刺激胰岛素的分泌,降低血糖而达 属性强,准确性高等优点,可作为本品的含量测 到治疗目的 。 定方法,对米格列奈钙的质量控制具有明显的实 米格列奈钙合成工艺已有报道?“,其中文 用价值。米格列奈钙及其中间体的结构式如图 献 提供的路线是目前制备米格列奈的最优路线。 所示。 / ? 人人。以 ‘ 图 米格列奈钙及其中间体的结构式 一中间体 ; 一中间体 ; 一米格列奈钙 实验部分 柱温箱、 二级管阵列检测器 、 百一 . 仪器 色谱工作站、意大利高效液相色谱仪美国 公 型元素分析仪。 司,包括 在线真空脱气机、泵、 作者简介:孟 霞 一 ,女,硕士研究生; . . ~?. . 第 卷增刊 分析试验室 ?年 月. . 试剂 的波长处有最大吸收。考虑各中间 体和成品在 所用的乙腈、甲醇为色谱纯, : 、 末端均有较大的吸收,选择在 波长进 行测 定。 、 均为分析纯;米格列奈钙样品批 . . 溶剂的选择 由于本品在流动相中不能完 号: 、 、 和对照品、中间体、 全溶解,在甲醇中和乙醇中的溶解性较好,但本 中间体 均由重庆人本药物研究院提供。 品在以乙醇为溶剂时,主峰峰形较差,主峰理论 . 试验溶液的制备 塔板数较低。用甲醇为溶剂时,本品的主峰理论 品溶液:精密称取米格列奈对照品 塔板数较高,而且该溶剂峰不影响本品的含量测 . ,置于 容量瓶中,加甲醇使溶解并 定,故选用甲醇为溶剂。 稀释至刻度,摇匀;供试品溶液:取米格列奈钙样 . 系统适用性和专属性考察 品批号: . ,置于 容量瓶中, 按上述色谱条件,取 . 项下标准品溶液、中 加甲醇使其溶解并稀释至刻度,摇匀即得;中间 间体溶液、混合溶液各 注入液相色谱仪,记 体溶液:取中间体 约 . 和中间体 约 . 录色谱图,可知米格列奈保留时间为 . ;中 ,分加置于的容量瓶中,加甲醇溶解并稀 间体 的保留时间为 . ,中间体 的保留时 释至刻度,摇匀即得;混合溶液:取供试品溶液液 间为 .,图 示的是混合溶液中米格列奈 及各中问体溶液各 份,混合即得。 钙及其有关中间体的 图。由图可知,中间体 . 色谱条件 与主峰之间的分离度符合。 色谱柱: ? 柱 . , ;检测波长: ;流动相:乙腈. . / 用调节 至 :;柱温: 室温;流速: ./ ;进样量: 。 结果与讨论 . 色谱条件的选择 . . 色谱柱、流动相的选择 选用常用的十八??二?一 ? ??二 一 烷基硅烷键合硅胶柱;选用甲醇、乙腈与水、 . / 的醋酸铵、、 、醋酸钠、四 /丁基溴化铵等各种缓冲液体系对本品进行洗脱, 图 混合溶液中米格列奈及其有关中间体 最后筛选出乙腈一 . / 溶液体系,在 一中间体 ; 一中间体 ; 一米格列奈钙 此体系中,本品主峰的理论塔板数较低,将 . / 溶液用调节 至 后,米格 取 . 项下供试品溶液 ,再加 . / 列奈钙主峰峰形好,主峰与相邻杂质峰的分离度 的约,于 ?水浴中加热后取样 符合要求,主峰的理论板数较高,故选用此流动 检测,结果如图 所示;加 的 ./ 的 相作为本品含量测定的流动相。将流动相的 调 ,于 ?水浴中加热 后取样 检测,结 到 和 . ,考察本品的分离情况,结果表明本品 果如图 所示;加的 %的,于 ?水 的主峰和杂质峰的分离度无明显变化。说明本品 浴中加热 后取样检测,结果如图 所示; 流动相的 有微小变动,对本品的有关物质检查 取本品 . 呶置坩埚中,直接加热破坏后,加入 无影响。甲醇溶解摇匀,取 进行检测,结果如 .. 检测波长的选择 取 . 项下标准品溶 图 所示;取在紫外光下照射 天的样品 . 液、中间体溶液各适量,分别在 ~ 范围,加 甲醇溶解,摇匀,取 进行检测, 进行紫外波长扫描。结果显示,中间体 在 结果如图 所示。 和 波长处有最大吸收;中间体 在 和/ 波长处有最大吸收;米格列奈钙在第 卷增刊. . 分析试验室 年 月? / / . 图 酸破坏性试验 图 高温破坏性试验 . 』/图 碱破坏?性试验 图 光照破坏性试验 好,可用于米格列奈及其有关物质的检查。 . 线性范围 称取米格列奈钙对照品 . ,置于容量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇 匀,精 密量取该液 . 、 . 、 . 、 . 、 . 、 . 、 . 和分别置于 容量瓶中,加 甲醇稀释至刻 / 度,摇匀,按上述色谱条件,分别取上述标准溶液 注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度对峰 图 氧化破坏性试验 面积进行线性回归分析,数据见表 ,线性方程为 由图 ~图 可知,将本品进行酸、碱、一,相关系数:. 。结果表 降解和热、光降解破坏后检测,降解产物与主峰 明本品浓度在 ~ / 范围内呈良好线性关 之间的分离度较好。说明该色谱系统的专属性良 系。 表 校正曲线的回归分析 . 方法精密度 中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。另精密称取米格列 取米格列奈样品批号: 约 ,称 奈对照品适量,同法配制,按上述色谱条件,分别 份,分别置于容量瓶中,加甲醇溶解并稀释 取上述溶液 皿注入液相色谱仪,记录色谱图, 至刻度,摇匀,精密量取 置于 容量瓶 用外标法计算其含量,得相对标准偏差为 . . 第 卷增刊 分析试验室? 年 月 . %,数据见表 。结果表明方法精密度符合要 注入液相色谱仪,连续进 次,记录色谱图,根据 求。 峰面积计算相对标准偏差。测定结果见表 ,结果 . 仪器精密度 表明仪器精密度符合测定要求。 取 ./ 的米格列奈对照品溶液 止 表 方法精密度 : 表 仪器精密度 . 溶液稳定性考察 根据主峰峰面积计算相对标准偏差。结果见表 , 取 . / 的米格列奈钙对照品溶液, 结果表明本品溶液在室温下放置 ,样品溶液 按上述色谱条件,分别于 、 、 、 、 、 、 、 稳定。 、 取 注入液相色谱仪,记录色谱图, 表 溶液稳定性考察 表 样品含量测定结果 . 检出限测定 以上述色谱条件,按信噪比为 对最低检测 批号 含量/% 限进行测定。结果表明:浓度为 . ,进样 .皿时,主产物峰信号与基线 倍噪 音基本一. 致。即检出限为 . × × × ~ . . 。 . 含量测定 方法对照 取米格列奈钙样品适量,加甲醇溶解并制成 . 非水溶液滴定法 每 中约含 的溶液作为供试品溶液。另 中国药典 版二部附录/ 。 精密称取米格列奈对照品适量,同法配制。分别 由于本品结构中含有 个叔胺,可能具有一 取上述供试品和对照品各 注入液相色谱仪, 定的碱性,因此选用来测定本品的含量,根 记录色谱图。按外标法以峰面积计算,三批样品 据消耗的滴定液的量计算本品的含量。 的含量测定结果见表 。 测定方法:取本品 . 批号:, 一?