精液白细胞与精子DNA完整性、精子参数的关系

精液白细胞与精子DNA完整性、精子的关系 精液白细胞与精子DNA完整性、精子参数 的关系 山东医药2009年第49卷第40期 精液白细胞与精子DNA完整性,精子 参数的关系 高玉堂,陈明强,王俊.,文陶非,张柏岩,林桂花.,刘睿智 (1吉林省长春市妇产医院,长春130041;2吉林大学白求恩医学院) 摘要:目的探讨精液白细胞与精子DNA完整性,精子参数的关系.方法分析156例 男性不育患者精液标 本,采用联苯胺染色法检测精液白细胞,吖啶橙荧光染色检测精子DNA完整性.采 用计算机自动分析精子密度与 活力,采用精子形态检测系统下人工修正方法进行精子形态分析.结果精液白细胞 异常者精子密度,精子活力 降低(P<0.05),精子DNA完整率异常率增高(P<0.05).精子DNA完整率异常者 精子密度,活力降低(P< 0.05),精子形态无明显变化(P>0.05).结论精液白细胞可直接影响精子参数,精 子DNA完整率,又可能通过 精子DNA完整率异常影响精子参数. 关键词:不育,男(雄)性;精液;白细胞;DNA完整性;精子参数 中图分类号:R698.2文献标志码:A文章编号:1002-266X(2009)40-0014-02 Relationshipofseminalleucocyte.humanspermDNAintegrityandspermparameters tang,CHEN一qiang,WANGJun,WENTao-fei,ZHANGBai—yan, GAOYu— HNGui.hua.LIURui—zhi (1ObstetricsandGynecologyHospitalofChangchun,Changchun130041,P_R.China) Abstract:ObjectiveTostudytherelationshipbetweenseminalleucocyte,humanspermDNA integrityandsperm parameters.MethodsSpermsamplesobt~nedfrom156patientsofmaleinfertilitypatients.S eminalleucocytewasmeas- uredbyusingBenzedrinestainingmethod.SpermDNAintegfitywasanalyzedbyusingfluoresceinstainingofacridineo卜 ange.Spermdensityandmotilityweredetectedbycomputerassistedspermanalysis.Spermmorphologyanalysiswasper- formedbyusingsemiautomatedspermmorphologyanalyzer.ResultsSpermconcentrationandmotilityinabnormalleuco— cytepatientsweresignificantlylowerthanthatinnormalleucocytepatients(P<0.05).AbnormalrateofspermDNAin— tegrityinabnormalleucocytepatientswashigherthanthatofnormalleucocytepatients(P<0.05).Spermconcentration andmotilityinabnormalspermDNAintegritypatientsweresignificantlylowerthanthoseofnormalpatients(P<0.05). ConclusionSeminalleucocytemayinfluencethespermparametersbyinfluencingspermDNAintegrity. Keywords:infertility,male;semen;leucocyte;DNAintegrity;spermparameter 白细胞在细菌感染的男性不育者精液中经常被 检测到.白细胞精子症影响精液参数,使精子密度, 活力和形态下降_lJ.精子DNA完整性对男性不育 是一个有价值的评价指标J.白细胞精子症与 DNA损伤增加相关联_3J.目前对精子DNA损伤是 否为白细胞影响精子参数的机制尚不清楚.本文就 精液白细胞与精子DNA完整性,精子参数的关系进 行研究. 1资料与方法 1.1临床资料156例男性不育者均来自2008年1 基金项目:吉林省科技发展计划项目(20082114). }通讯作者.E—mail:lrz420@126.com 14 月,2009年5月吉林省生殖医学研究所门诊,年龄 23—4l岁,婚后正常性生活2a以上不育,无外伤及 遗传性疾病家族史,无性功能障碍病史,体检未发现 有明显睾丸,附睾及输精管异常.除外隐睾症,腮腺 炎,无精子症,生活或工作环境有毒性物质或高温者. 1.2检测方法 1.2.1样本收集禁欲3,7d后手淫或取精器取 精液于干燥消毒量杯内,置37?水浴箱内液化.按 WHO精液参数检测方法进行常规检测. 1.2.2精液白细胞分析采用联苯胺染色法,取新 鲜混匀精液1滴于载玻片上,加人1滴联苯胺染液, 混合均匀,置盖玻片后于37?放置20min后镜检. 山东医药2009年第49卷第40期 按1X10/ml为标准,小于1X10/ml时为白细胞 正常,大于1X10/ml时为白细胞异常. 1.2.3精子DNA完整率检测采用吖啶橙(AO) 荧光染色对精子DNA完整率进行检测.制备精子 涂片后,荧光显微镜检测,激发波长为460—470 nm,滤色片要求530nm.精子头部呈红色或橙黄色 荧光为AO染色阳性,精子头部呈绿色荧光为AO 染色阴性.每片计数200个精子,计算AO阴性精 子百分率.正常精子DNA为双链,镜检呈绿色,而 损伤的精子DNA则断裂为单链,镜检为橙黄色或红 色.正常精子DNA完整率i>90%. 1.2.4精子参数分析采用WLJY-9000型彩色精 液分析系统检测精子密度与精子活力,采用WLJY一 9000型彩色精子形态检测系统下人工修正方法进 行精子形态分析,并且采用严格标准进行判读.同 一 份精液样本由2位专业检测人员进行分析. 1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件,计量 资料数据用?s示,采用非参数Mann—Whitney 检验,计数资料比较采用检验,以P?0.05为差 异有统计学意义. 2结果 2.1精液白细胞对精子参数的影响精液白细胞 异常者共22例,其精子密度,精子活力,精子形态分 别为(67.00?50.78)X10./ml,(29.13? 18.47)%,(12.03土8.41)%.精液白细胞正常者 共134例,其精子密度,精子活力,精子形态分别为 (51.58?44.18)X10/ml,(21.79?16.24)%, (10.32?4.58)%.精液白细胞异常者的精子密 度,精子活力低于精液白细胞正常者(P<0.05),两 者精子形态的差异无统计学意义(P>0.05). 2.2精子DNA完整率27例精液白细胞异常者 中精子DNA完整率异常8例.129例精液白细胞 正常者中精子DNA完整率异常15例.精液白细胞 异常者的精子DNA完整率异常率高于精液白细胞 正常者(=5.756,P=0.016). 2.3精子参数精子DNA完整率异常者23例,其 精子密度,精子活力,精子形态分别为(39.37? 29.87)×10/ml,(22.53?13.48)%,(10.04? 4.69)%.精子DNA完整率正常者133例,其精子 密度,精子活力,精子形态分别为(65.43?42.06) ×10/ml,(30.15士18.44)%,(10.62?7.64)%. 精子DNA完整率异常者的精子密度,活力低于精子 DNA完整率正常者(P<0.05),而两者精子形态差 异无统计学意义(P>0.05). 3讨论 白细胞精子症在男性不育中约占10%, 20%l5J .精液白细胞影响精子质量].Erenpreiss 等报道精子DNA损伤影响精子质量,特别是精子 密度.精液白细胞与精子参数的密度,活动力和形态 有显着的负相关性,对DNA完整性有弱的影响_1]. 精液白细胞浓度与精子中染色质变化直接关联_8]. 本研究发现,精液白细胞异常者的精子密度,精子活 力降低,而精子形态无明显变化,精液白细胞异常者 精子DNA完整率异常率增高. 精子DNA损伤影响精子质量,特别是精子密 度.白细胞增加能以级联方式诱发DNA损伤,特 别是在形态和活力异常的精子中.DNA损伤精子 发生率与精子形态,活动力,密度有高度的负相关 性_9J.关于精子DNA完整性与精子参数的关系,相 关报道并不一致.本研究发现,精子DNA完整率异 常者的精子密度,活力降低,而精子形态变化不明 显.根据文献报道,结合本研究结果,精液白细胞可 能影响精子DNA完整率,通过精子DNA完整率异 常影响精子参数. 参考文献: [1]MoskovtsevSI,WillisJ,~VhiteJ,eta1.Leukocytospermia:relation— shiptospermdeoxyribonucleicacidintegrityinpatientsevaluatedfor matefactorinfertility[J].FertilStefil,2007,88(3):737-740. 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