氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究

氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究 ? 208? 药学服务与研究PharmCareRes2010Jun;10(3) 谷大建,等.氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究 氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究 谷大建,王本杰,李宏建 ? 论着? [摘要]目的:研究氨茶碱缓释片试验制剂和市售参比制剂在20名健康男性志愿者体内的药 动学和相对生物利用度,并 进行生物等效性评价.方法:根据双交叉试验方法口服单剂量200mg的两种氨茶碱缓释片, 采用HPLC法测定血浆中茶碱 的浓度.结果:El服单剂量200mg试验制剂后,t,f…,,AUC,.,AUC分别为 (9.13?1.94)h,(3.95?0.56)h, (3.66?0.70)/Lg/ml,(4l_01?7.33)/xg?h?ml_.和(44.29?8.60)g?h?ml,;参比制剂为 (9.85?l_79)h,(4.1O? 0?53)h,(2.69?0.37)/xg/ml,(39.36-4-6.24)/xg?h?ml和(43.32?7.36)/*g?h?ml.氨茶碱缓释片试验 制剂相对生 物利用度为(105?16.7).结论:试验制剂和参比制剂具有生物等效性. [关键词]氨茶碱;迟效制剂;生物等效性;药代动力学;色谱法,高压液相 [中图分类号]R969,R974.3[文献标识码]A[文章编号]16712838(2010)03—0208—04 Bi0equivalenceofaminophyllinesustained-releasetabletsinhealthyvolunteers GUDajian,WANGgeniie,LIHong]ian(1.DepartmentofPharmacy.QianfoshanHospitalofShandongProvince.Ji’nan 250014,China;2.DepartmentofPharmacy,QiluHospitalaffiliatedtoShandongUniversity,Ji’nan250012,China) [-ABSTRACT]0bjective:TostudythepharmacokineticsandrelativebioavailabilityoftestandreferenceaminophyllineSUS tainedreleasetabletsin20healthyvolunteers,andtoevaluatethebioequivalencebetweenthetwopreparations.Methods:A singleoraldoseofZOOmgoftwokindsofaminophyllinesustained—releasetabletswasgivenaccordin gtoaCrOSSOVerdesign. TheplasmaconcentrationoftheophyllinewasdeterminedbyHPICmethod.Results:Afterthesingleoraldoseof200mgof aminophyllinesustained—releasetablets,the,11,t…,c…,AUC】 36andAUC_l_ofthetesttabletswere(9.13-4-1.94)h, (3.954-0.56)h,(3.66?0.70)~g/ml,(41.01?7.33)g?h?ml_.and(44.29?8.6O)/*g?h?ml,respectively.Forthe referencetablets,theparameterswere(9.85?1.79)h,(4.1O?0.53)h,(2.69?0.37)txg/ml,(39.36?6.24)t xg?h?ml and(43.32?7.36)g?h?ml,respectively.Therelativebioavailabilityofthetestaminophyllinesustained —releasetablets was(105?16.7).Conclusion:Thetestandreferenceaminophyllinesustained—releasetabletsarebioeq uivalent. [KEYWORDS]aminophylline;delayedactingpreparations;bioequivalence;pharmacokinetics;chro matography,highpres— surel~quid [PharmCareRes,2010,10(3):208—211] 氨茶碱为茶碱与乙二胺的复盐,其药理作用主 要来自茶碱.氨茶碱是临床上常用的平喘药,治疗 支气管哮喘疗效较好.近年来对茶碱的药理学研究 明,其临床治疗作用仅需较低的血浆浓度,表现为 茶碱血浆浓度尚未达到扩张支气管所需要的水平即 可显示显着的抗哮喘作用,故茶碱的有效治疗浓度 现已重新确定为5,10mg/I[】.为了克服茶碱普 通剂型口服吸收峰浓度高而引起的不良反应,国内 外已有多种茶碱缓释制剂上市.氨茶碱缓释片口服 吸收缓慢,有效血药浓度在体内维持时间较长,从而 较持久地发挥作用.本研究对氨茶碱缓释片试验制 作者简介谷大建(男),副主任药师. E-mail:whgdj@126.corn 作者单位250014济南,山东省千佛山医院药剂科(谷大 建,李宏建);250012济南.山东大学齐鲁医院药学部(王本 杰) 剂进行人体相对生物利用度研究,为新药报批和临 床应用提供理论依据. l材料 Waters2695高效液相色谱仪,Empower数据 采集系统和Waters2996紫外检测器(美国Waters 公司);XW80A型涡旋混合器(上海精科实业有限 公司);Abott高速离心机(美国雅培公司); PK514BP超声清洗器(德国Bandel公司);梅特勒一 托利多AX一205DeltaRange电子天平(瑞士梅特勒 公司).氨茶碱缓释片试验制剂(规格:0.1g/片,山 西亚宝药业集团有限公司,批号070625),氨茶碱缓 释片参比制剂(规格:0.1g/片,吉林精优长白山药 业有限公司,批号070801);茶碱对照品(美国New Jersey公司,批号A0244736);咖啡因(山东新华制 药厂,批号04103581).甲醇(色谱纯,美国J.T. Baker公司,批号E33E38);娃哈哈纯净水(杭州娃 药学服务与研究PharmCareRes2010J[In;10(3) 谷大建,等.氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究?2O9? 哈哈集团有限公司).空白血浆由山东大学齐鲁医 院血库提供. 2方法和结果 2.1志愿者选择和试验本研究得到山东大 学齐鲁医院伦理委员会批准,所有志愿者均签署知 情同意书.健康男性志愿者2O名均为在校大学生, 平均年龄(23.2?1.6)岁,体重(71.3?5.7)kg,于 试验前统一行血,尿常规及肝,肾功能检查.所有志 愿者体格检查,肝,肾功能等实验室检查正常,无急, 慢性疾病及家族遗传病史,试验前2周内无用药史, 3个月内未参加其他新药临床试验.采用单剂量两 周期双交叉试验.受试者按体重配对后,随机分为 两组,编号为l,20.志愿者于试验前一天22:()() B 后禁食,试验当日晨抽取空白血样后,立即空腹口服 试验制剂或参比制剂200mg,200ml温开水送服. 于服药后1,2,3,4,4.5,5,5.5,6,7,8,12,24,36h 取肘静脉血4ml,5.0x10.r/rain离心5rain(离心 半径9.8cm),取血浆分双份于一2O?贮存,备测. 周期间清洗期为一周.第二周期服药剂量,取血时 程,留样方法同第一周期. 2.2色谱条件AGTVenusilXBP—C8色谱柱 (150mm×3.9mm,4.6m);流动相:水一甲醇 (80:20);流速1.0ml/min;进样量20l;柱温 28.C;检测照品+内标咖啡因;C:空白血浆斗茶碱对照品十内标咖啡因 D:1号志愿者口服试验制剂3h后血浆样品+内标咖啡因;l:茶碱;2:咖啡因 2.3血浆样品预处理 2.3.1溶液的配制(1)内标溶液:精密称取咖啡 因25.7mg,置于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀 释至刻度,摇匀,配成浓度为1mg/ml的母液.精 密吸取1ml母液,置25mt容量瓶中,用流动相稀 释并定容至刻度,得浓度为40/~g/ml的内标溶液. (2)对照品溶液:精密称取茶碱对照品25.2mg,置 于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇 匀,配成浓度为lmg/ml的茶碱储备液,再用流动 相稀释得到浓度为100,10,1g/ml系列储备 液.(3)样品溶液:取空白血浆适量,加入一定体积 的标准储备液配制系列浓度的标准样品溶液. 2.3.2血浆样品预处理取血浆300l,加内标 (40/~g/ml咖啡因溶液)20I,加甲醇6001,涡旋 振荡2min,1.008×l0r/min(离心半径9.8cm)离 心5min,移取上清液100I进样,进样量为2OI. 2.4方法学评价 2.4.1提取回收率取空白血浆适量,制备低, 中,高3个浓度(0.5,2和16g/m1)的茶碱样品, 按2.3.2项下操作,每一浓度进行5样本分析.同时 以流动相代替血浆配制浓度为0.5,2和16g/ml 的茶碱对照品溶液,按2.3.2项下操作,每一浓度 进行5样本分析,得相应峰面积.以血浆样品与标 准品峰面积比值计算提取回收率,结果3种浓度的 茶碱对照品血浆质控样品提取回收率分别为 (89.3?3.1),(89.0?3.1)和(97.0?0.8)Koo (一5). 2.4.2标准曲线制备取空白血浆适量,分别用浓 度为100,10,1/~g/ml系列标准储备液配制成相当 于茶碱血浆浓度为0.2,0.5,1,2,5,1O,20g/ml的 样本,按2.3.2项下操作,每一浓度进行5样本分 析,进样20l,记录色谱图.以待测物浓度(f)为横 坐标,待测物峰面积与内标峰面积比值(R)为纵坐 标,用加权(w一1/)最小二乘法进行线性回归,得 线性回归方程为R===0.423f+0.068,r一0.9981. 茶碱在0.2,20/lg/ml范围内线性关系良好. 2.4.3最低定量限取空白血浆配制成含茶碱血 浆浓度为0.2/~g/ml的样品,进行5份平行样本分 析,并根据当天标准曲线计算每一样本浓度.该浓 度的日内精密度为8.03Koo(“:5),表明茶碱的定量 一 ISSN1671-2838PharrnCareRes药学服务与研究2010Jun;10(3) ? 210?WWW.pcarjourna1.net.enE-mailPl1armCR@163. c.m/PharmCR@yahoo.com.cnPhn/Fax86—2165519829 下限可达0.2ug/ml. 2.4.4日内和日间精密度取空白血浆,加入茶碱 储备液适量,配制低,中,高3个浓度(0.5,2和 16/,g/m1)的茶碱质量控制样品,每一浓度进行5样 本分析,连续测定3d,根据当日标准曲线,计算质量 控制样品浓度.根据质量控制样品测定结果,计算 测定方法的精密度.结果表明3种浓度的茶碱标准 血浆质控样品日内RSD分别为3.57,2.94和 1.32,日问RSD分别为4.22,3.66和4.92 (“一5). 2.4.5相对回收率按2.4.4项操作,每个浓度平 行测定5份样本,计算相对回收率,评价方法的准确 度.结果3种浓度的茶碱标准血浆的相对回收率分 别为(99.04士1.72),(99.38--+-2.87)和 (101.35?1.15)(一5). 2.4.6稳定性实验按2.4.4项操作,每一浓度进 行5样本分析,考察茶碱血浆样品于一20|C放置 24h和7d的稳定性,以及经历2次冷冻一解冻循环 的稳定性.结果RSD均<1O,表明茶碱血浆样 品一2O?放置24h,7d及经历2次冷冻一解冻循环 后稳定. 2.5药动学参数20名健康志愿者单剂量口服 200mg氨茶碱缓释片试验制剂与参比制剂后,茶碱 血药浓度一时间曲线见图2.根据所测茶碱血药浓 度一时问数据,利用DAS2.0实用药动学程序计算 主要药动学参数(t,AUC.,.,AUC.…),c和 tma~采用实测值,结果见表1.氨茶碱缓释片试验制 剂相对生物利用度以体内茶碱AUC.数值表征的 平均相对生物利用度(F)为(105?16.7). 2.6生物等效性评价利用DAS2.0软件对氨茶 5 4 3 q z 皂0 图2志愿者单剂量口服200mg氨茶碱缓释片 后茶碱的血药浓度一时间曲线 Figure2Meanplasmaconcentration—timecurves oftheophyllineafterasingleoraldoseof 200mgofaminophyllinesustained— releasetabletsinhealthyvolunteers O:参比制剂;?:试验制剂;7/=20 表1志愿者口服200mg氨茶碱缓释片 后的主要药动学参数 Table1Mainpharmacokineticparametersafter asingleoraldoseof200mgofaminophylline sustained-releasetabletsinvolunteers (7”/一20,?) 碱缓释片参比制剂和试验制剂主要药动学参数 AUC.,,AUC.…c进行多因素方差分析,和双 单侧t检验以及9O置信区间评估,t,n~x用非参数检 验(秩和检验).结果表明,试验制剂和参比制剂单 剂口服双交叉两周期试验药物问和周期间无显着性 差异.进一步双单侧t检验和(1—2a)置信区间分 析,在a一0.005水平上进行双单侧检验表明,其检 验统计量t,t.均>....一1.7247,表明两制剂个 体间,周期间和剂型间符合生物等效性的统计学要 求,符合生物等效的假设.AUC.,,AUC.…C… 经对数转换后9O置信区间分别为99.07, 1O8.7,95.9,107.9和120.7,133.0, 可判定两制剂具有生物等效性. 3讨论 目前,茶碱临床血药浓度检测和药动学研究的 体内分析方法,主要有荧光偏振免疫法,紫外分光光 度法和HPIC法.HPLC法是常用的茶碱分离,分 析方法,具有专属性好,精密度高,特异性强,干扰小 的优点.文献报道的茶碱血浆预处理采用的提取 溶剂氯仿,二氯甲烷毒性大,沸点高,而乙醚易乳 化’.本研究采用甲醇一水作为流动相,成本低廉; 采用甲醇沉淀法,操作简便,使用血样二倍体积的甲 醇沉淀完全,可减少有机溶剂用量,不影响分析测 定,适合快速分析.在确定的HPLC分离条件下, 选择最大吸收波长270nm定量检测,有利于提高 茶碱的检测灵敏度,且峰形对称,保留时间短.本法 检测灵敏度高,最低检测浓度为0.2ug/ml.温度 对本实验测定结果有显着影响,温度升高,保留时间 提前,峰面积减小,因此测定时应使用柱保温箱,以 便使温度恒定,测得的结果更可靠和准确.整个试 验过程顺利,志愿者依从性良好,氨茶碱缓释片试验 制剂和参比制剂均未见不良反应发生. 药学服务与研究PharmCareRes2010Jun;10(3) 谷大建,等.氨茶碱缓释片的人体生物等效性研究 【参考文献】 [1]黎友伦,罗永艾.氨茶碱的药理作用与临床应用EJ].医学导报, 2005,24(9):807-809. IiYoulun.IUOYongai.Pharmacologyandclinicalapplication ofaminophylline[J].HeraldMed,2005,24(9):807809. Chinese. [2]蔡涛,祝业光.高效液相色谱法测定茶碱缓释片中茶碱的含 量[J].中国药事,2007,21(1):4647. CaiTao,ZhuYeguang.DeterminationoftheophyllineinSHS tained—releasetabletsbyHP1CfJ].ChinPharmAff,2007,21 (1):46—47.ChinesewithabstractinEnglish. [3]楼永海,胡大平,孙渊,等.口服单剂量茶碱缓释片的人体生 (上接第204页) 1资料和方法 1.1一般资料选择2007年1月至2008年1月在江苏省 阜宁县陈集中心卫生院住院,无前列腺素应用禁忌证,有剖 宫产指征,宫缩乏力性出血高危因素的孕产妇120例,年龄 22,39岁,其中孕37,42周110例,孕?42周10例;巨大 儿3O例,羊水过多9例,瘢痕子宫18例,合并子宫肌瘤3例, 患妊娠高血压症9例,前置胎盘3例,胎盘早剥2例,各种原 因所致产程延长或停滞及产妇疲劳紧张42例,静滴缩宫素 (安徽省蚌埠市宏业生化制药厂,1OU:1m1))2.5U3d无 宫缩2O例.产后出血诊断标准:产后2h内失血 量?500ml者.应用前瞻性分层随机方法,对每一高危因素 先完全随机化分为两组,然后将各因素组合并,分成试验组 及对照组,每组各6O例,两组特征相近,高危因素在试验组 与对照组之间均衡分布,无统计学差异. 1.2方法试验组于切皮(即剖宫产手术开始)的同时舌下 物等效性评价[J].中国药业,2004,13(6):30—31. LouYonghai.HuDaping,SunYuan,eta1.Bioequivalence assessmentaftersingledoseoftheophyllinesustained—release tabletsinhealthyvolunteers[J].ChinaPharmaceuticals, 2004,13(6):3031.ChinesewithabstractinEnglish. E4]刘新宇,吴芳,陈连剑.单剂量VI服茶碱缓释胶囊的人体生物 等效性评价[J].药学实践杂志,2001,19(3):146—148. IiuXinyu,WuFang,ChenIianjian.Hioequivalenceassess— mentaftersingledoseoftheophyllinesustained——releasecap._ su]esinhealthyvolunteers~J].JPharmPract,2001,19(3): 146148.ChinesewithabstractinEnglish. [收稿El期]2olo一0311[修回日期]201o一0517 [本文编辑]阳凌燕姚春芳 含服米索前列醇(北京紫竹药业有限公司,0.2mg/片) 400/*g,对照组不用药.两组均在娩出胎儿后宫体注射缩宫 素2OU.对照组中35例(58.3)出现出血>300ml,宫缩 较差时,立即给予米索前列醇400g舌下含服,配合按摩子 宫,快速缝合子宫切口等措施. 1.3监测指标监测:(1)术中胎儿娩出后产妇出血量,术 毕阴道积血量及产后2h出血量.(2)产前及产后24hHb 及其变化情况.(3)应用米索前列醇后各种不良反应. 1.4统计学处理计量资料以?S表示,t检验分析.计 数资料以表示,y检验分析. 2结果 2.1两组产后出血量比较试验组术中及术毕阴道积血量 及术后2h累计出血量显着少于对照组(P<0.05),产后出 血发生率极显着低于对照组(P<0.01),产后24hHb平均 下降值明显低于对照组(P<0.05).见表1. 2.2用药后的不良反应米索前列醇应用后有25例(25/ 表1两组产后出血情况比较 P<O.05,一P<o.O1,与对照组两个亚组分别比较;:出血>3ooml,宫缩较差时舌下含服 400g米索前列醇 95,26.32)出现不良反应,其中出现畏寒或寒战症状 22例,给予异丙嗪25mg肌注后缓解.22例中14例寒战后 发热,给予物理降温,补液等对症支持治疗后好转.轻度恶 心3例,无呕吐,腹泻,腹痛,头痛等不良反应. 3讨论 3.1米索前列醇用于预防产后出血的可行性米索前列醇 是前列腺素E1的类似物,是促进子宫收缩的有效制剂,给 药途径包括舌下含服,口服,阴道给药,宫腔给药,直肠给药 及多种给药途径联合.各种用药途径中舌下含服起效最快, 因此本研究采用了舌下给药.此给药途径较阴道或直肠用 药方便,并且无感染或污染机会.给药时间则选择切皮的同 时,主要是考虑舌下给药时药物必须经舌下黏膜吸收进人体 循环,若过晚给药可能起不到相应作用,而过早给药则可能 因子宫收缩过强而危及胎儿.服药后2min内即可在血循 环中检出此药血浆活性代谢产物米索前列醇酸,10min内 血浆水平达到高峰,半衰期为1.5hE. 本研究采用前瞻性随机对照的方法,结果表明,舌下含 服400Fg米索前列醇有良好的子宫收缩作用,与对照组比 (下转第2l6页)