免疫组化

免疫组化 一 免疫组化; LP 法,操作步组 , 1, 切片常组至水。如需抗原修组～可在此步后组行 脱蜡 2. 组液洗 冲3min/2 次。 3. 组了降低源性组化物组造成的非特性背景染色 内氧异, 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分组。 4. 组液洗 冲5min/2 次。 5. 滴加 Ultra V Block ～ 在室下孵育 温5 分组以封组非特性的背景染色异。 ;注,孵育不要超组 10 分组～否组组致特性染色降低。如果一抗的稀组会异 液中含有 5 10% 正常羊血～组一步可以省略。, 清 6. 组液洗 冲5min/2 次。 7. 滴加一抗工作液 37 ?孵育 1 2 小组。;具孵育组组和度由组组者最组定, 体温决 8. 组液洗 冲5min/2 次。 9 , 滴加 Primary Antibody Enhancer( 增强子 ) , 在室下孵育 温20 分组。 10 ,组液洗 冲5min/2 次。 11 ,滴加 HRP Polymer( 组组二抗 ) ～在室下孵育 温30 分组。 ;注, HRP Polymer 组光敏感～组避免不必要的光暴露组存在不透明的并 小中。, 瓶 12 ,组液洗 冲5min/2 次。 13 ,向 1ml DAB Plus Substrate ( 或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen ;或 AEC Plus Chromogen , , 混后滴加到匀切片上～孵育 3 15 分组。;具组组由染色深定。, 体浅决 14 ,自水充分洗 来冲, 组染～水 脱, 透明 , 封片。 二,免疫组化 ( 三步法 ) 操作步组 , ; 1 ,、石切片至水。 蜡脱蜡 ; 2 ,、 3%H 2 O 2 室孵育 温5-10 分组～以消除源性组化物组的活性内氧。 ; 3 ,、蒸组水洗～ 冲PBS 浸泡 5 分组 x2 ;如需抗原修组～可在此步后组行,。 ; 4 ,、 5-10% 正常山羊血; 清PBS 稀组,封组～室孵育 温10 分组～组去血～勿洗。滴加 一抗 工作液～ 清37 ? 孵育 1-2 小组或 4 ? 组夜。 ; 5 ,、 PBS 冲洗～ 5 分组 x3 次。 ; 6 ,、滴加适量 生物素组组二抗 工作液～ 37 ? 孵育 10-30 分组。 ; 7 ,、 PBS 冲洗～ 5 分组 x3 次。 ; 8 ,、滴加适量的 辣根组或性酸组组组的组卵白素 工作液～ 碱磷霉37 ? 孵育 10-30 分组。 ; 9 ,、 PBS 冲洗～ 5 分组 x3 次。 ; 10 ,、组色组组色 3-15 分组; DAB 或 NBT/BCIP , ; 11 ,、自水充分洗～组染～水～透明～封片。 来冲脱 三. 冰组切片免疫组化染色步组, 冰组切片 4-8um ～室放置 温30 分组后～入 4 ?丙组固定 10分组～PBS 洗～5分组x3～用组化组孵育氧5-10分组～消除源性组化物组的活性。以内氧 下同石切片免疫组化蜡