腺苷钴胺残留溶剂分析方法验证方案

腺苷钴胺残留溶剂分析方法验证 腺苷钴胺残留溶剂分析方法验证方案 Index 目录 1. PURPOSE目的 ....................................................................................................................... 2 2. SCOPE范围............................................................................................................................ 2 3. RESPONSIBILITY职责 ........................................................................................................... 2 4. REGULATION AND GUIDANCE 法规和指南 .......................................................................... 2 5. METHOD DESCRIPTION 方法描述 ........................................................................................ 2 6. GOOD DOCUMENTATION PRACTICE文件管理 ............................... 错误～未定义书签。 7. TEST LIST测试列表................................................................................................................ 4 8. PERSONNEL IDENTIFICATION人员验证 ............................................................................... 5 9. PROCEDURE过程.................................................................................................................. 5 9.1 Prerequisites先决条件.................................................................................................. 5 9.2 Calibration of Instruments仪器仪表校验 ....................................................................... 6 9.3 Accuracy准确度 ........................................................................................................... 6 9.4 Precision精密度 ........................................................................................................... 7 9.5 Specificity专属性 .......................................................................................................... 8 9.6 Linearity range线性 ...................................................................................................... 9 9.7 Limit of detection检测限 ............................................................................................. 10 9.8 Limit of quantitation定量限 ......................................................................................... 10 9.9 Durability耐用性 ......................................................................................................... 11 10. DEVIATION REPORT偏差报告 ............................................................................................. 12 1. Purpose目的 使用气相色谱法测定腺苷钴胺残留溶剂(乙醇、丙酮)的含量，通过验证使用此法的准确性和 有效性，以确认该检测方法适用于检测的要求。 2. Scope范围 本方案适用于腺苷钴胺残留溶剂(乙醇、丙酮)含量的分析方法验证。 3. Responsibility职责 3.1 质量管理部QC负责方案起草、审核、执行、最终报告的编写 质量管理部QA负责确保使用的、质量、标准操作规程经过批准，提供验证技术支持， 方案审核。 质量负责人负责方案批准。 3.2 验证实施小组成员 4. Regulation and Guidance 法规和指南 , 中国药典2010年版 , 药品生产质量管理规范实施指南(2010版) 5. Method Description 方法描述 测定腺苷钴胺中残留溶剂(乙醇、丙酮)含量 所用检测方法如下: 试剂:乙醇(分析纯)、丙酮(色谱纯) 色谱条件: 色谱柱:100%甲基聚硅氧烷 检测器:氢火焰离子化检测器(FID) 温度:250? 进样口温度:200? 分流比:5:1 衰减:-3 柱温:40?保持5min，以10?/min升温至180?，保持10min。 进样方式:顶空进样，平衡时间:30分钟， 顶空瓶平衡温度:80?; 载气:氮气，4ml/min 燃气:氢气，40ml/min 助燃气:空气，400ml/min 溶液配制: 对照品溶液的制备:取乙醇、丙酮各50mg，置于100ml容量瓶中，精密称定，加N,N-二甲基甲酰 胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 供试品溶液的制备:称取本品0.1g于顶空瓶中，精密称定，精密加入1mlN,N-二甲基甲酰胺溶解， 摇匀。 分析过程: (1)分离度:对照品溶液进样1次，记录色谱图，按《气相色谱检验标准操作规程》中的公式计算乙醇与丙酮峰之间的分离度。乙醇与丙酮峰之间的分离度应大于1.5; (2)理论板数:对照品溶液进样1次，记录色谱图，按《气相色谱检验标准操作规程》中的公式计算各组分的理论板数。各组分峰的最小理论板数应不低于5000; (3)重复性:对照品溶液连续进样5次，记录色谱图，按《气相色谱检验标准操作规程》中的公式计算乙醇、丙酮峰面积的相对标准偏差(RSD,%)。乙醇、丙酮峰面积的相对标准偏差应不大于10%。 相对标准偏差(RSD，%)计算公式: 2(x,x)i,i,1n,1 RSD,，100%X (3)校正因子:计算对照品溶液5次进样所得色谱图中主峰面积的平均值，并计算校正因子。 校正因子计算公式: AS校正因子f, CS :A为对照品的峰面积;C为对照品的浓度 式中SS (4)供试品溶液进样1次，记录色谱图，按外标法以峰面积计算残留溶剂含量。含量按下式计算: A，NX 含量(%),，100%f，W，1000X 式中:f为校正因子;A为供试品峰面积;W为供试品称样量，g;N为供试品稀释倍数，ml。XX 6. Test List测试列表 在下面的表格列出了本方案将要执行的测试。 Test .No. Test Name 编号 名称 9.1 Prerequisite先决条件 9.2 Calibration of Instruments仪器仪表校验 9.3 Accuracy准确度 9.4 Precision精密度 9.5 Specificity专属性 9.6 Linearity range线性 9.7 Limit of detection检测限 9.8 Limit of quantitation定量限 9.9 Durability耐用性 7. Personnel Identification人员验证 在方法验证开始前，本方案涉及的所有人员必须在下表签字。 8. Procedure过程 8.1 Prerequisites先决条件 Purpose 目的 验证参与此方案的人员都已经过培训，熟悉此方案的内容。 Acceptance Criteria可接受标准 开始执行本测试之前，所有的先决条件必须得到满足。 Procedure程序 1. Personnel Training人员培训 在方法验证开始前，对所有参与测试的人员进行方案的培训。培训应该有记录。 培训要确保测试人员熟悉本方案，能够准确地执行本方案而不会产生错误。 2. Approvol for execution执行批准 开始执行本测试之前，所有的人员条件已满足，因此可以开始方法验证。 8.2 Calibration of Instruments仪器仪表校验 Purpose 目的 验证所有关键仪器的有效性。 Acceptance Criteria可接受标准. 所有的关键仪器均已校验，且在有效期内。 Procedure 程序 在下表中列出所有系统和验证时使用的仪器，并附上校验证书。如果需要，可以加页。 Page _____ of _____ 8.3 Accuracy准确度 Purpose 目的 确认此检验方法的准确度 Acceptance Criteria可接受标准. 回收率在90%,110%之间;回收率RSD?5.0% Procedure程序 采用对照品加入法测定对照品回收率确定准确度。 对照品贮备液的制备:精密称取乙醇、丙酮各100mg，置于100ml容量瓶中，精密称定，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀。 精密量取对照品贮备液10、12.5、15ml，分别置于25ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，制成约相当于对照品溶液浓度的80%、100%、120%的溶液。 称取腺苷钴胺约0.1g，9份，精密称定，置顶空瓶中，分三组; 第一组:腺苷钴胺样品中精密加入80%的对照品溶液1ml使溶解，摇匀。 第二组:腺苷钴胺样品中精密加入100%的对照品溶液1ml使溶解，摇匀。 第三组:腺苷钴胺样品中精密加入120%的对照品溶液1ml使溶解，摇匀。 取以上三组供试品溶液顶空进样，每份供试品溶液分别测定1次，共9次，计算回收率，并对测定结果进行。 回收率(R)计算公式: 供试品峰面积，稀释倍数/校正因子-样品中残留溶剂的量回收率(%),，100% 对照品加入量 8.4 Precision精密度 重复性 Purpose 目的 验证采用此方法所得测定结果的重复性符合要求。 Acceptance Criteria可接受标准. 检验结果乙醇、丙酮含量,0.1%,RSD?30%;0.1?含量,0.2%，RSD?20%;0.2?含量,0.5%，RSD?10%。 Procedure程序 供试品溶液:称取供试品约0.1g，精密称定，6份，各精密加入N,N-二甲基甲酰胺1ml溶解，摇匀。 测定:每份供试品溶液各进样1次，记录色谱图，按外标法以峰面积计算乙醇、丙酮含量，并计算结果的(RSD，%)。 中间精密度 Purpose 目的 验证采用此方法所得测定结果的中间精密度符合要求。 Acceptance Criteria可接受标准. 不同分析人员在不同日期按此方法测定的检验结果乙醇、丙酮含量,0.1%,RSD?40%;0.1?含量,0.2%，RSD?30%;0.2?含量,0.5%，RSD?15%。 Procedure程序 (1)供试品溶液:称取供试品约0.1g，精密称定，3份，各精密加入N,N-二甲基甲酰胺1ml溶解，摇匀。测定:每份供试品溶液各进样1次，记录色谱图，按外标法以峰面积计算乙醇、丙酮含量。 (2)由不同分析人员在不同日期按确定的检测条件根据(1)进行分析。 )计算不同分析人员在不同日期按确定的检测条件进行分析测定的乙醇、丙酮含量的(3 相对标准偏差(RSD，%)，并对测定的结果进行评价。 相对标准偏差(RSD，%)计算公式 2(x,x)i,i,1n,1RSD,，100%X 8.5 Specificity专属性 Purpose 目的 验证杂质对检测无干扰。 Acceptance Criteria. 可接受标准 空白溶剂对检测结果无干扰;各组分峰的分离度不小于1.5。 Procedure程序 (1)空白溶剂:取溶样用的N,N-二甲基甲酰胺作为空白溶剂进样1次，记录色谱图。 (2)对照品溶液:取乙醇、丙酮各50mg，置于100ml容量瓶中，精密称定，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。将对照品溶液进样一次，记录色谱图，按《气相色谱检验标准操作规程》中的公式计算各组分峰之间的分离度，并对谱图进行评价。 8.6 Linearity range线性 Purpose 目的 确认待测物峰面积与其相应浓度成线性关系。 Acceptance Criteria可接受标准. 相关系数r,0.999(10%,100%) Procedure 程序 在测试浓度(0.5mg/ml)的10%,100%的范围，即在对照品浓度分别为测试浓度的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的10个浓度值，在测定条件下进行线性测定，根据测得待测物峰面积与对应的浓度分别进行线性回归，列出回归方程、求出相关系数r。 样品贮备液的制备:取乙醇、丙酮各约100mg，精密称定，置100ml 量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，作为储备溶液(1mg/ml) (1) 精密量取样品贮备液0.5ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear1溶液(10%); (2) 精密量取样品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear2溶液(20%); (3) 精密量取样品贮备液1.5ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear3溶液(30%); (4) 精密量取样品贮备液2.0ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear4溶液(40%); (5) 精密量取样品贮备液2.5ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear5溶液(50%)。 (6) 精密量取样品贮备液3.0ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear6溶液(60%); (7) 精密量取样品贮备液3.5ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear7溶液(70%); (8) 精密量取样品贮备液4.0ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear8溶液(80%); (9) 精密量取样品贮备液4.5ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear9溶液(90%); (10) 精密量取样品贮备液5.0ml，置10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为linear10溶液(100%)。 8.7 Limit of detection检测限 Purpose 目的 验证此检验方法的检测限 Acceptance Criteria可接受标准. 信噪比(S/N)为3:1时的相应浓度作为检测限;连续进样5次，所得信噪比的相对标准偏差不得大于20%。 Procedure程序 配制一定浓度的对照品溶液，依法进样，记录色谱图，并对已知低浓度试样测出的信号进行信噪比分析，通过调整对照溶液浓度使信噪比约为3:1，此时这个浓度即为检测限;连续进样5次，记录色谱图，计算5次所得信噪比的相对标准偏差(RSD,%)。 8.8 Limit of quantitation定量限 Purpose 目的 验证此检验方法的定量限 Acceptance Criteria可接受标准. 信噪比(S/N)为10:1时的相应浓度作为定量限;连续进样5次，所得信噪比的相对标准偏差不得大于10%。 Procedure程序 配制一定浓度的对照品溶液，依法进样，记录色谱图，并对已知低浓度试样测出的信号进行信噪比分析，通过调整对照溶液浓度使信噪比约为10:1，此时这个浓度即为定量限;连续进样5次，记录色谱图，计算5次所得信噪比的相对标准偏差(RSD,%)。 8.9 Durability耐用性 Purpose 目的 验证此检验方法的耐用性 Acceptance Criteria可接受标准. 进样口温度耐用性项下，检验结果乙醇、丙酮含量,0.1%,RSD?40%;0.1?含量,0.2%，RSD?30%;0.2?含量,0.5%，RSD?15%。 Procedure程序 进样口温度耐用性:称取供试品约0.1g，9份，精密称定，分为3组，各精密加入N,N-二甲基甲酰胺1ml溶解，摇匀。在确定的进样口温度(200?)的?5?的范围内，选择195?、200?、205?，各测定乙醇、丙酮含量3次，汇总3组共9个数据进行分析，计算结果的相对标准偏差，并对测定结果进行评价。 相对标准偏差(RSD，%)计算公式: 2(x,x)i,i,1n,1RSD,，100%X 9. Deviation Report偏差报告 测试过程中发生的任何偏差都将依据偏差调查管理办法(Q/HYZ G QS.14-2011)处理。每个偏差都 要给予一个唯一的编号并记录在偏差报告里。在偏差清单中，汇总所有的偏差。如有需要可复印偏 差报告。