反相HPLC法测定七厘散中血竭素的含量

反相HPLC法测定七厘散中血竭素的含量 5f;1 ? 药剂? 反相HPLC法测定七厘散中血竭素的含量 垒缸宇王京辉奎伟周富荣 (北京市药品捡验所北京100035)/ 摘要目的:建立反相HPLC法测定七厘散及血竭中血竭索含量的方法.方法:采用3%礴酸甲醇 溶液为提取及成盐试剂,选用Ct8色谱柱,以己睛一005mol/L礴酸二氢钠溶液(50:50)为流动相,柱温 40?,检测波长440nrn.结果:平均回收率100.95%,RSD1.40%.结论:此法简便,快速,准确. 词献雠法主i-~t:L_ c1睫色七厘散收载于1995年版《中国药典》,由血(250toni×4.6mm).流动相乙腈一0.05mol/L 竭,乳香(制),红花,麝香等8味中药组成,原质 量标准中无含量测定项.由于血竭为君药,其 用量又占处方总量的一半,而且进口血竭质量 故应对其有效成分进行含量控制,以 差异极大, 保证临床疗效.血竭中主要含血竭素(dra— corhodin),血竭红素(dracombin),黄烷醇(5一 methoxy-6.methyl—favan一7-o1),苯甲酸【J等成 分.目前.血竭素的含量测定方法有薄层扫描 法【,高效液相色谱法_3_,二阶导数光谱法L 等.我们以血竭素高氯酸盐为对照品,采用柱 前衍生化反相HPLC法测定七厘散及血竭药 材中血竭素的含量.该法简便易行,灵敏度高, 为血竭及其制剂中血竭素含量测定提供了较为 满意的方法. 1仪器,样品与试药 LC-6A型高效液相色谱仪(岛津).SPD- 6AV检测器. 对照品血竭素高氯酸盐(中国药品生物制 品检定所,纯度98.97%).样品七厘散(市 售);血竭(本室). 乙腈为色谱纯(天津四友生物医学技术开 发公司),其他试剂均为纯 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱Econcsil8,10p.m (250minx4.6ram);SpherectdneODS5mn(250 rilrn×4.6mm);TSK—GELODS-120A10p.m ? 342? 磷酸二氢钠溶液(50:50),柱温40%3,检测波长 440nln,3根色谱柱上血竭素峰与相邻杂质峰 分离度(R)均大于1.5,按血竭素峰计算,理论 塔板数均大于4000,见图l. "L:10:1nD ^Bc 0?I 图1七厘散HPLC色谱图 A.对照品B.七厘散样品C空白对照 a血竭素高氯酸盐衍生物 2.2供试品溶液的制备l3取七厘散样品研 细,精密称取约0.10,0.15g(血竭药材测定. 称取血竭细粉60mg),置具塞试管中,精密加入 3%磷酸甲醇溶液10ml,密塞,振摇3mlo,滤过, 弃去初滤液,精密量取续滤液lml置5ml棕色 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品 溶液,精密吸取l0"I进样分析. 2.3成盐反应采用3%磷酸甲醇溶液为提 取及成盐试剂,将样品中的血竭素及对照品血 竭素高氯酸盐均转化为血竭素的磷酸盐,进行 含量测定.其原理是溶剂的酸碱性引起了共轭 体系的改变,使血竭素稳定性及最大吸收波 长均有所改变.见图2. 中国中药杂志1999年第24卷第6期 国2血竭素的成盐反应 2.4测定波长的选择及确证血竭素高氯酸 盐对照品的磷酸甲醇溶液以流动相稀释后,在 200--600nnl进行扫描测定,显示269,440rml 两个主要吸收峰,当选择269nm作为测定波长 时,杂质峰多,血竭素峰与杂质峰的分离度难以 满足要求;采用440rml作为测定波长时,杂质 峰少,血竭素峰可获得满意分离,结果灵敏,准 确.故选择440rml作为检测波长.由于血竭 素极不稳定,其纯品难以保存,故我们采用以血 竭药材为原料,以甲醇提取,薄层分离后刮板洗 脱的方法,制成血竭素的甲醇溶液,以流动相稀 释后经光谱测定,在473nm附近有一吸收,但 峰形不好,与对照品血竭素高氯酸盐的甲醇溶 液相同,而二者经磷酸甲醇处理并以流动相稀 释后.在440rma处均有一明显的最大吸收,说 明440rma确为血竭素磷酸盐的吸收波长,选择 此波长作为测定波长是合理,准确的.见图3. ^, 图3血竭素光谱国 1血竭素的磷酸甲醇溶披 2血竭素高氯酸盐的磷酸甲醇溶液 3血竭素高氯酸盐的甲醇溶液4血竭素的甲醇榕液 2.5线性关系的考察精密称取血竭素高氯 酸盐对照品7.16rag置100ml棕色容量瓶中, 加3%磷酸甲醇溶液使溶解,并稀释至刻度,精 密吸取1,2,3,4,5ml,分别置5ml棕色量瓶中, 加甲醇释至刻度,分别精密吸取1Ol注入高效 液相色谱仪,测定峰面积,以进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标,绘制标准曲线.其回归方程 Y=9.37×105X一5.39x103,r=0.9999,血 中国中药杂志1999年第24卷第6期 竭素进样量在0.104--0.520.ug呈线性关系(血 竭素重量:血竭素高氯酸盐重量/1.377). 2.6稳定性试验取同一供试品溶I|,在O, 12h内依法测定,结果明其在12h内基本稳 定,RSD225%. 2.7精密度试验取同一供试品溶液,连续进 样重复测定5次,求得峰面积RSD106%,表 明精密度符合要求 2.8空白溶液的制备与测定按处方比例自 配不含血竭的群药,按样品制备方法制成空白 溶液,并依法测定,结果表明空白无干扰,见图 l. 2.9重现性试验取同一批号的七厘散样品 依法测定6次,结果RSD2.48%. 2.10回收率试验精密称取已知含量的同一 批号样品0.05g,分别精密加入血竭素高氯酸 盐对照品0956mg(相当于血竭素0.6943mg), 依法测定,回收率分别为100.99%,100.50%, 103.40%,99.52%,10150%,99.77%; 100.95%;RSD1.40%. 2.11七厘散样品及血竭药材的测定结果按 前述条件进行测定,以外标一点法计算含量,七 厘散及血竭的测定结果分别见表1,表2. 表1七厘散中血竭素含量测定结果% 生产单位古量 1.54 1.87 093 075 o22 1.16 I.23 0.43 北京同仁堂制药厂 北京同仁堂制药厂 北京同仁堂制药厂 北京宝树堂制药厂 内蒙古蒙药制药厂 内蒙古蒙药制药厂 内蒙古蒙药制药厂 内蒙古通辽库抡制药厂 表2血竭药材中血竭素含量测定结果% 样品来楫含量 206 250 2l3 055 l_73 2.22 进口样品 同仁堂药店 华颐制药厂 进口样品 进口样品 进口样品 3讨论 血竭素为色原酮类化合物,性质很不稳定, ? 343- G 0 遇光易分解,故采用3%磷酸甲醇溶液作为提 取溶剂,既保证了较高的提取效率,同时又使对 照品血竭素高氯酸盐及样品中的血竭素都转变 为血竭素的磷酸盐衍生物,使其稳定性增强,可 以进行含量测定. 我们曾试用以下流动相:A.甲醇一水(70: 30),B.甲醇一0.05tool/L磷酸二氢钠溶液(50: 50),c.乙腈甲醇一0.05mol/L磷酸二氢钠溶液 (30:5:65),D.乙腈一005mol/L磷酸二氢钠溶 液进行比较试验,结果表明,血竭素在3根不同 品牌的色谱柱上以采用流动相D时分离效果 最好 从含量测定结果可以看出,血竭药材中血 竭素含量差异很大,其原因可能主要是由于加 工方法不同造成的,贮藏条件对其可能也有较 大的影响.七厘散样品中血竭素含量差异也很 大,由于血竭为进口贵重药材,故极有必要对其 含量进行控制以杜绝劣药的产生,保证产品质 量此外由于国产广西血竭中不含血竭素,本 方法也可以作为鉴别广西血竭的有效方法 4参考文献 1卫生部药品生物制品检定所中药室植化组进口印尼血竭 的研究二血竭鉴别方法的研究与应用药检工作通讯, 1978,8(5):217 2卫生部药典委员会+关于修订中药标准血竭的意见征询 药典通讯.1995,5((4):188 3鲁静,刘燕,王宝琴.反相高教液相色谱法测定血竭中血竭 素含量中国中药杂志,1991,i6(to):615 4刘玉琴,白五尤,姜振国,等二阶导敷光谱法测定七厘散 中血蝎的含量中成药,1993,15(2):14 5刘立群有机理论与药物分析北京:^民卫生出版社, 19846l 1998-11一l8收稿 .一,一}舒肝胶囊的质量控制 付墼美尹蓉莉(成都中医药大学成都610075)尺j彳/ 冉晓辉(四川省泰华制药厂广汉618300) 摘要目的:制定舒肝胶囊的质量控制标准.方法:采用TLC对舒肝肢囊中当归,栀子 和甘草进行 鉴别,用高效液相色谱法测定芍药甙的含量.结果:当归,栀子和甘草的定性鉴别灵 敏,专属,芍药甙在 008--04vg呈良好线性关系,回收率为9912%.结论:建立的定性,定量方法,可作为本 品的质量控 制标准. 关键词舒肝胶囊芍药甙 ''-,_-.一?._, 薄层色谱鉴别法高效液相色谱法 舒肝胶囊系由白芍,柴胡,当归,栀子,茯 苓,白术,薄荷,牡丹皮,甘草组成的中成药,具 有舒肝清热,健脾养血的功效,用于肝郁血虚, 肝脾不和引起的两胁胀痛,头晕目眩,倦怠食 少,月经不调,脐腹胀痛.方中当归,柴胡,白 术,薄荷提取挥发油,用B—CD包结,得包结物, 蒸馏后的水溶液和药渣另器收集.其余白芍等 5味,加水煎煮两次,第2次与蒸馏后的药渣合 并煎煮15h,滤液浓缩成稠膏,加辅料制粒.干 燥,与包结物混合,制成胶囊剂方中白芍为君 药,当归,栀子为臣药.白芍中主要有效成分为 ? 344? /Z 芍药甙,具有与本品功效相关的镇静,镇痛,解 痉,解热,抗炎,免疫调节及对肝脏的保护作 用lll2.为了控制本品的内在质量,应用高效 液相色谱法测定白芍中主要有效成分芍药甙的 含量l3J用薄层色谱法对当归,栀子,甘草进 行了鉴别.结果表明,本法具有灵敏,准确,重 现性好等优点,可用于控制本品的内在质量. 1仪器,试剂与药材 LCd0A高效液相色谱仪(岛津);定量毛 细管(Drummond);SPD-10A紫外检测器(岛 津);GR7A数据处理机(岛津).经四川省药 中国中药杂志1999年第24卷第6期