急性脑梗死血清与脑脊液血管内皮细胞生长因子含量的变化

急性脑梗死血清与脑脊液血管内皮细胞生长因子含量的变化 急性脑梗死血清与脑脊液血管内皮细胞生 长因子含量的变化 ' 7 第l0卷第9期 2000年9月慧韦 _@ W10No.9 Sep20[H] 急性脑梗死血清与脑脊液血管内皮 细胞生长因子含量的变化.弓 四川省人民医院神经内科(成都61oo'72)罗永杰董刘静刘洁杨'左松—一,——一 日的:探讨息性脑梗死血清厦脑脊液(cS.F)血管内皮细胞生长日子(VEGF)酌动态变化厦临床意叉. :采用ELISA双抗夹心法.测定32倒患性脑梗死患者48h内,7d,14d血清VEGF厦48h内,7dCSF VEGF的含量.结果:息性脑梗死后各个时期,血清v】均高于健康对照纽(P<001),且以7d时更明显, 与48h比较P<0.05,与14d比较P<0.0l;48h内和7d两纽闻C.SFVEGF无明显变化(P>005).脑梗 死面积>20mI纽在各个时期的血清VEGF水平均高于10,20纽和<10ml纽(P<005).而10,20mI纽 与<l0纽问血清VEGF无差异(P>0.05).结论:VEGF参与了惠性脑梗死酌血管重建,有利于脑梗死缺 血半暗区血供酌早期恢复,VEGF酌升高与梗死面积的太小呈正相关.<20nlI酌脑梗死患者VEGF升高愈 明显预后愈好.为夸后?F的基因治疗提供了理论依据. 关键词惠性脑梗死血管内皮细胞生长因子 血管内皮细胞生长因子(VascuI'arendothelial growthfactor,VEGF)又叫血管通透因子(Vascular permeabilityfactor,VPF)或血管调理素(Vascul— tropin)是一种特异性作用于血管内皮细胞,具有分 裂原作用,促进血管生成和增强血管通透性作用的 细胞因子.对血管闭塞性疾病.具有促进侧支循环 建立的作用.目前VEGF与脑梗死方面的研究国 内外鲜有报道.本文观察脑梗死病人血清与脑脊液 (C.S.F)中vEGF的变化,探讨vEGF在脑梗死中 的关系. 2次30例,第3次2l例,分离血清并一20?低温保 存,待测VEGF.于发病48h内,7d各做1次腰脊 髓池穿刺(均无穿伤),并取CS.F2ml,第1次16 一20?低温保存.使用美国R&D 例,第2次10例, System~.1nc生产的Quantikine原装试剂盒,采用 EL1SA双抗夹心法:用单克隆抗体包被.以生物素 一 链霉亲和素系统放大,HRP标记多克隆抗体测 定.用试剂配品对所测o.D值直线回归分析.r =0.9984.并做双份重复试验.数据以? 示,组间比较用f检验. 1资料与方法2结果 1.1临床资料 实验组全部为本院神经内科住院病人,均符合 第四届全国脑血管病会议修订的诊断标准,全部经 头部CT或MRI证实.并排除了肿瘤,肾脏疾病, 冠状动脉粥样硬化性心脏病,牛皮癣等疾病,女性均 为绝经后妇女,病前1月以上均无外伤及手术史. 实验组32例,男l9例,女l3例,合并高血压29例, 糖尿病L4例,平均年龄61.1?11.5岁(42,79 岁).根据头部CT或MRI脑梗死面积>20ml4 例,10,20ml12例,<10ml16例.对照组21倒, 男13例,女8例,为同期健康体检者,平均年龄59.4 ?7.3岁(47--73岁).两组年龄均无统计学差异. l2方法 本组病人人院后,于发病48h内和病后7d, 14d,各抽肘静脉血1次,每次2ml,第1次32例,第 实验组血清,C.S.F及对照组血清VEGF含量 的变化以及VEGF与实验组病人梗死面积大小的 关系见表l,3. 衰1实验组与对照组血清VEGF含量(pg/m1) 洼:t与对照组比较P<001 衰2实验组脑脊液VEGF含量(pg/m1) 5? 洼:两组间比较P>I105 中国现代医学杂志第10卷 表3梗死面积的大小与血清VEGF台量的变化(pg/m[) 3讨论 血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种特异性 作用于血管内皮细胞(Vasctxlarendothe?cetts, VEC)的多功能细胞因子,与仅存在血管内皮细胞上 具有与VEGF高度亲和力的两种?型酪氨酸特异 性受体fltI(fms—liketyrosinkinase)和f(fetalliv— erkinase亦称KDR)结合.具有强烈的促血管内皮 细胞有丝分裂.增殖的作用;细胞质钙聚集作用;增 强血管通透性的作用;促进微血管的生长和侧支循 环的建立.是血小板源生长因子(platelet—derived growthfactor.PDGF)家族的一个成员,是一类与细 胞表而含肝素的蛋白聚糖结台的糖蛋白[13.人 ?GF基因位于6q3l3.全长14Kb,由8个外显子, 7个内含子组成.各种VEGF的活化形式均通过二 硫键连接的同源二聚体.细胞分泌到细胞外的 VEGF以?,GR65为主llJ,它们以可溶性蛋白质形 成存在.且是VEGF以游离形式发挥作用的基础. 其余的VEGF不属于溶性蛋白.与细胞膜上肝索的 结合能力强于VEGFm.结台于细胞膜和基底膜.这 是由外显子6所决定的.当机体需要时,可通过蛋 白水解酶的调节作用.使其释放出来发挥作用.故认 为细胞外基质是VEGF的储存库L2j. VEGF可在很多正常成年人组织中表达.但一 般水平很低,难以检出;在缺血,缺氧组织中可诱导 vEGF或VEGFmRNA的过量表达.在脑缺血时. 内皮细胞,神经元及神经胶质细胞,巨噬细胞等均有 过量表达IlJ.Goldbreg认为是VEGF序列上具有 氧敏感基因存在的缘故J.仅存在于血管内皮细 胞上的特异性f【Il和f[k1,正常情况下表达甚微.不 易检出;在缺血区周围电有过量表达….目前认为 血管内皮细胞并非单纯的管腔内衬,具有抗凝,抗血 栓形成,纤溶等广泛的生理过程,并可分泌多种细胞 因子(cytokines)如IL,【L口,TNFIL一4等,这 些细胞因子反过来又促血管内皮细胞参与免疫应答 和炎性趋化反应,还可促进粘附分子(如ICAM一., ICAM—VCAM,整合素族粘附分子或选择索族粘 附分子)在活化的血管内皮细胞上表达l6一,尤其在 6 血管缺氧,阻塞情况下更易发生,这说明血管内皮细 胞不单纯是一种屏障,而是一个内分泌器官.与脑血 管病发生,发展密切相关.VEGF与血管内皮细胞 上的特异性受体flI】和f【k_结台,对血管内皮细胞 有类似于凝血酶,组织胺等激动剂的作用,可强烈增 加血管的通透性,诱导血管内皮细胞表达多种活性 物质及细胞因子,组织因子.激发?因子,vw等释 放.改变细胞外基质【1,7,8J,对血内皮细胞生长刺激 和趋化作用有利,促进内皮细胞的分裂,增殖,迁移 和细胞间的相互牯着,有利于新血管特别是微血管 的生成和侧支循环的建立L4-.使血流迅速恢复,阻 止组织的缺血和坏死,并缩小缺血区域ll0J. 本研究所测vEGF为游离形式存在的,即以 VEGF165为主和少量的VEGF,急性脑梗死发病 48h内VEGF已明显升高,梗死面积愈大愈明显,与 对照组比较差异均显着(P<0.01),提示脑组织缺 血缺氧时刺激氧敏感基因,诱导VEGF的高表达 有学者认为,以神经胶质细胞,巨噬细胞,神经元和 内皮细胞更明显…,同时血管内皮细胞上亦有相应 的tll和flkI的过量表达.7d时VEGF表达最明 显,与48h内及对照组比较.均有显着差异(P< 0O1),14d时VEGF的表达明显下降.低于48h内. 高于对照组(P<0.05).而梗死面积愈大.其相应 的VEGF升高愈明显,尤以梗死面积>20ml组更显 着,与l0,2Om【组,<10ml组比较均有统计学差异 (P<005),而lO,20m[组与<10m[组问无统计 学差异(P>0.05).提示一但有脑梗死的发生. VEGF升高.血管通透性增加,细胞外基质改变,血 管内皮细胞经分裂,增殖,迁移.细胞间牯附.排成直 线以及形成开放的腔样结构等.使血管重建和新生 血管形成开始.这垒由游离VEGF来完成调节,至 7d时达高峰.以后逐渐减缓,至14d时已明显下降. 有利于梗死区域及半暗带血供的早期恢复,使缺血 缺氧得到改善.可缩小梗死面积"J,减少脑组织的 损伤,利于炎性介质尽快恢复平衡.梗死面积愈大, VEGF愈高.上述过程更活跃【",说明血清VEGF 的改变与脑梗死的面积太小呈密切相关,且血管重 建的高峰在7d左右.与Kovacs报道相一致J.在 梗死面积<20ml的两组病例中,VEGF愈高其预后 愈好,更说明其VEGF的升高与侧支循环的形成呈 正相关.与血供恢复快有密切关系,为今后脑梗死的 治疗提供了新的治疗途径.但~20m[组?F的 改变与预后相关性不如<20ml的两组病例,但仍存 等:急性脑梗死血清与脑脊液血管内蛊细胞生长因子含量的变化 第9捌罗永杰. 在相关性.可能是血管重建的速度达不到改善血供 的需要的缘故. 在脑脊液的VEGF检测中未见报道,两组(48h 和7d)间均无统计学的差异.均低于血清水平,由于 无CSF方面的正常对照.脑梗死时VEGF是否升 高不清楚,还有待进一步探讨.就两组的改变与血 清vEGF的变化看,理论上应有正相关关系.但本 研究两组C.S.F间无差异(P>0.05).可能为 VEGF不易透过血脑屏障.在细胞间质中以结合形 式存在有关. 由于脑梗死的发生,发展是一个复杂的过程,受 多种因素的影响.但血供的尽?h臭恢复是一个重要的 因素,因VEGF升高,微血管生成活跃l1,与脑梗死 的预后呈正相关.这为我们进行VEGF的基因治 疗,提供了理论依据,即脑梗死的早期.使用基因重 组的VEGF,可促进缺血半暗区域血管增生,重建. 改善微循环的血供,减少脑梗死的面积,起到分子搭 桥术的目的,为临床提供了新的治疗方法5. 参考文献 1DrU坤kHF.Bro~aLFDetmeJM.etalVascularpenueabiLityfac— LOt"/vascularendothe[ialgrowthfact[?Microvascularhy~rperme— abilityandml~ogeamslaAmJPat]l1995;t46(5):1029--1039 2HouckKA.LemlgDWRowlamtAMetalDuaLregulationofvasoa— lar即d.thelialg-mw~hfactorbicevailabilhybygeneticandproteel;c mechanism+JBidchenl1992;267(5):758,763 3ParkJ.Kd【G—A.FerrataNThevascularendothelialgrowthfac— tOT(VEGF)isofom~:differentialdilxlsitkmintothesubepithellal ~,:tmceflularnmtrlxandKlatbltyofextraeeLlularnmtfix—bound VEGFMo【BidCel【.】993:4:】3】7,】326 4KovaesZ.LkezakiK.&删oK,etaLVBGFandfitexpresalc~ltime kineticsinralbraininfarctStroke.L99627:L865,】873 5Gold~egM.SchneM~TNimilaritiesbetweentheoxygensemln~ mechanismsregulatingthe0:DreI[珈ofvascularendothelialgm~mh factoranderythropoietinJBiol(;hem.1994;268:4355,4359 6N0gyZV~tagMKdevK.etalHmnmlbrainmlerove~e!endothe— liareellpe~amodeLsystemtostudyv~mlarfatorso1i~emiebrain KeioJMed.t996;45:3200--3206 7ClaussMOerlaehM.GerlaehH.eIalVascularpermeabilityfactor: atumor—derivedpo[ypeplidethatinducesendotheLiaLcelLandn×H1D' cyteproa~agulantactivityandpre~notesmonocytenfigratic~1.JExp Med.1990:172:1535,】545 8Unemo6EN.Ferm~N.BauerEA,eta__VEGFindu0intemtitia【 colCag~expressionu1humanendothelialcellsJ【1Physlal 】992:】53:557,563 9FoLkmanJ,ShingY.AngenesisJBiolChen~.1992;267:10931, 】0934 】0B0nalS.JakLitschMT.ShouM.etAngicgenie—InducedEn— dancen~entofcollatoJ-a【bloodfbwt.ischenlicnrdiualbya5 cularendothe0a[growthfactc~ndogsCirculatic~~.1994;89:2183 , 2189 (1999一i2一L】收稿扬期东审稿曾文军编辑) 欢迎订阅2001年《中国普通外科杂志》 《中国普通外科杂志)是全国公开发行的国家级期刊(ISSN1005—6947/CN43—1213R),是集述评,专 题研究,基础研究,临床论着,简要论着,综述,临床经验.病例报告,技术与创新.经验与教训为一体的普通外 办刊宗旨是:传递学术信息,加强相互交流;提高学术水平.促进学科专业学术刊物. 科发展.以实用性为 主,兼及理论,注重临床研究,服务临床实践,以面向全国广大从事临床,教学,科研的普外工作者为目的.及 时报道普外领域的新进展,新观点,新成果,新经验,新技术,新方法以及新药物,新器械的研制与应用. (中国普通外科杂志)创刊于1992年,由湖南医科大学主办,湖南医科大学附属湘雅隹院承办.主编吕 新生教授,编委会由覆盖全国23个省市区的73名普外着名专家,教授,学者组成.多年来随着杂志的 不断丰富.学术水平和技术含量的提高.以及信息量的增大,已越来越受到各级普外工作者的喜爱,深得广大 读者,作者以及期刊各界人士的好评.目前本刊已进人多个检索系统和大型数据库.特别是继1998年本刊 成为"中国科技论文统计源期刊"之后,又被列入"中国科学引文数据库来源期刊"并被<中国学术期刊(光盘 版)),中国期刊网和万方数据资源系统全文收录.近日美国<化学文摘)(ChemicalAbstracts,CA)致函我刊, 已将《中国普通外科杂志)收录. 《中国普通外科杂志>为双月刊,逢单月30日出版,大I6开本,96页,每期定价9.50元,全年57O0元. 各地邮局均可订购,邮发代号42一l2l.欢迎各级普外同仁订购,编辑部也可办理邮购.编辑部地址:湖南 省长沙市潮雅路14l号中国普通外科杂志编辑部邮政编码:410008电话(FAx);0731—4327400 (中国普通外科杂志>编辑部 7