血细胞计数板

血细胞计数板 使用16×25规格的计数板时，只计板上四个角上的4个中格（即100个小格），如果使用25×16规格的计数板时，除计四个角上的4个中格外，还需要计中央一个中格 的数目（即80个小格）。每个样品重复观察计数不少于2次，然后取其平均值。 计算 （1）16×25的计数板 孢子数（个/g）=(N/100) ×400×10000×(V/G)=4×104×(NV/G)…………（1） 式中 N——100小格内孢子总数 （个） V——孢子稀释液体积 （ml） G——样品重量 （g） （2） 25×16的计数板 孢子数（个/g）=(N/80) ×400×10000×(V/G)=5×104×(NV/G) …………………………（2） 式中 N——80小格内孢子总数 （个） V——孢子稀释液体积 （ml） G——样品重量 （g） 1．将血细胞计数实验结果填入下。 计 算 4个大方格白细胞数 5个大方格红细胞数 次 数 1 2 3 4 总数 1 2 3 4 5 总数 第1次 第2次 两次平 均总数 血细胞 计 数 4．充液 2类血细胞计数分2次充液，方法如下。 （1）取干净的计数板平放于实验桌上，将盖玻片置入计数板正中央。?计数板和盖玻 片在使用前必须用软绸或擦镜纸擦净，并在低倍镜下检查计数室是否干净，其刻度是否清晰。 用小滴管吸取稀释血液，并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘，让稀释血液缓慢流出，借毛细管 现象而自动流入计数室内。一般应一次充液使计数室内充满稀释血液，若经几次充液，易形 成气泡，应洗净计数板和盖玻片，干燥后重新充液。 （2）稀释的血液充入计数室后，静置2～3min，待细胞不再浮动后，于低倍镜下计数。 5．计数 为防止重复计数和漏数，计数时应遵循一定的顺序进行，即“从左到右，自上而下”； 对正好压在格线上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数（图3-2）。 如计数白细胞时发现各大方格的白细胞数相差8个 以上，计数红细胞时发现各中方格的红细胞数最多与最 少相差20个以上时，则表示血细胞分布不均匀，必须 将稀释的血液摇匀后再重新充入计数室计数。 6．计算 （1）白细胞数 将四角的4个大方格内数得的白细 胞总数乘以50，即得每立方毫米血液内的白细胞总数， 也可将对角两个大方格内数得的白细胞总数乘以100。 因为： 图3-2 血细胞计数方式 稀释液0.38mL加入血液20mm实心圈表示应计数的红细胞 33（1mL＝1000mm， 空心圈表示不应计数的红细胞 3故20mm＝0.02mL,），使血液稀释20倍，换算成未稀释血时应乘以20。 在计数时仅统计四角的4个大方格内的白细胞，其容积为lmm×1mm×0.1mm×4＝ 30.4mm，换算成每立方毫米时应乘以2.5。这样，把四角4个大方格内数得的白细胞总数乘以50（即20×2.5＝50），即得每立方毫米血内的白细胞总数。 （2）红细胞数 将中央大方格中的四角和中央的中方格共5个中方格内数得的红细胞总数乘以10 000，即得每立方毫米血内红细胞的总数。因为： 3稀释液3.98mL，加入血20mm（即0.02mL），使血液稀释200倍，换算成未稀释血时应乘以200。 3在计数时仅统计0.02 mm内的红细胞（1个中方格的容积为0.2mm×0.2mm×0.1mm＝ 3330.004mm，5个中方格的容积为0.004mm×5＝0.02mm），换算成每立方毫米时应乘以50。 这样把5个中方格内数得的红细胞总数乘以10 000（即200×50＝10000），即得每立方毫米血内的红细胞总数。 （3）按目前临床上血细胞计数采用的通用单位，将以上所获每毫升血液中所含各血细 胞数量换算为各血细胞在每升血液中的数量。 7．清洗血细胞计数板 盖玻片及计数板用过之后，必须立即用水冲洗，但不可用硬物刷洗。计数板晾干或吹风 机吹干后，应镜检计数室是否干净，如不干净必须重复洗至干净为止。 图3-2 血细胞计数方式 实心圈表示应计数的红细胞 空心圈表示不应计数的红细胞