两种腮腺肿瘤及瘤旁腺泡细胞增殖与细胞凋亡的比较研究

两种腮腺肿瘤及瘤旁腺泡细胞增殖与细胞凋亡的比较研究 两种腮腺肿瘤及瘤旁腺泡细胞增殖与细胞 凋亡的比较研究 口腔医学研究2007年8月第23卷第4期395 两种腮腺肿瘤及瘤旁腺泡细胞增殖与细胞凋亡的比较研究 朱声荣h王秀丽汤国雄陶学金冀予心丁蕾 (1.华中科技大学同济医学院同济医院1:2腔医学中心湖北武汉430030; 2.武汉大学1:2腔医学院1:2腔颌面外科) [摘要】目的:探讨细胞增殖与细胞凋亡在腮腺多形性腺瘤warthin瘤及其瘤旁腺泡中的变化与作用.方法:取3O 例腮腺多形性腺瘤,26例腮腺Warthin瘤及其瘤旁腺泡作流式细胞术(flowcytometry,FCM)研究.以ModFitLT软 件进行细胞增殖分析,以Sub—G1法检测凋亡率.结果:腮腺多形性腺瘤的增殖指数(PI)与凋亡率分别为14.3O 和13.41,属最高值,其次是Warthin瘤,PI为9.95,凋亡率为8.24,而多变形性腺瘤瘤旁腺泡PI为9.53,凋亡率为 9.56,Warthin瘤瘤旁腺泡PI和凋亡率分别为8.66和6.67,接近正常腺泡的PI和凋亡率(8.O1和6.63).总体上 具有统计学意义(P<0.05).结论:腮腺多形性腺瘤及瘤旁腺泡PI和凋亡率处于高值,提示其瘤旁腺泡可能处于 "准新生物"状态,可能成为肿瘤复发的发源地,而腮腺Warthin瘤及瘤旁腺泡PI和凋亡率接近正常预示着该肿瘤 切除后极少复发. [关键词]腮腺多形性腺瘤Warthin瘤瘤旁腺泡细胞增殖细胞凋亡 [中图分类号]R739.8[文献标识码]A[文章编号]1671—7651(2007)o4—o395—o3 ComparativeStudyonCellProliferationandApoptosisinTwoKindofParofidTumorsandth eirContiguousAci- ni.ZHUSheng—rong,WANGXiu—li,TANGGuo— xiong,eta1.CenterofStomatology,ron~iHospitalofTongfiMedical College,HuazhongUnivesityofScienceandTechnology,Wuhan430030 [Abstract]Objective:Todeterminetheeffectionofproliferationandapoptosisinparotidpleomorphicadenoma(PA)and Warthintumorandtheircontiguousacini.Methods:30casesofparotidPAandtheircontiguousacini,26casesofparotid Warthintumorsandtheircontiguousacini.werestudiedwithflowcytometryanalysisofcellproliferationbyModfitsoftware, andcellapoptosisbysub— G1way.Results:ThePIandapoptosisrateofparotidPAwere14.30and13.41,respectively, whichisthehighestvalue.ThenextwasWarthintumors,andtheywere9.95and8.24separately.ThefollowingwasPA contiguousacini.theywere9.53and9.56,8.66and6.67belongtocontiguousaciniofWarthintumor.Thenormalaci. niwere8.01and6.63,respectively,(P<O.05).Conclusion:Cellproliferationandapoptosisareinhishvaluesnoton. 1yinPAbutalsoinitscontiguousacini.Thisindicatedthecontiguousacinimaybeintheconditionof"paraneoplasm", whichplaysanimportantroleinrecurrency.ButthevalueofcellproliferationandapoptosisagelesshigherinWarthin tumoranditscontiguousthanthatinnormalacini,whichindicatedthepossibiliteofrecurrencyisrageafterthetumorre. moved. [Keywords]ParotidPleomorphicadenomaWarthintumorCellproliferationApoptosis 腮腺多形性腺瘤和腮腺Warthin瘤是最常见的 涎腺肿瘤,手术前后均会影响患者的面部功能与美 观….但两种肿瘤的组织学来源和发病机理截然 不同,多形性腺瘤术后容易复发,甚至恶变[2],而 Warthin瘤却很少复发.为了探索这种差别的机 理,我们对腮腺多形性腺瘤,Warthin瘤及其瘤旁腺 泡进行了细胞增殖与细胞凋亡的定量比较研究. 作者简介朱声荣(1952一),男,武汉市人,教授,主任医师,主要从 事口腔颌面外科临床及研究. }通讯作者朱声荣,电话:(027)83663225 1材料与方法 1.1病例选择多形性腺瘤30例,男18例,女12 例,年龄12,73岁,平均38岁.Warthin瘤26例, 男20例,女8例,年龄19,76岁,平均54岁. 1.2FCM样本的制备将两种腮腺肿瘤及瘤旁腺 泡切取后立即置人80%乙醇中,然后将组织块剪 碎,加人3mL0.5%胃蛋白酶(PH=1.5).37?水 浴消化30min,每隔5min摇动1次.加5mL生理 盐水终止反应,用100目尼龙筛网过滤.PBS洗涤 2次,离心5min,去上清液,10爪/L细胞加0.1% RNase.PI5×10g/L,室温避光30min后作FCM 396JournalofOralScienceResearch,Aug.2007,Vo1.23,No.4 分析. 1.3FCM分析采用FACsert一400型荧光激活 细胞仪(美国)进行测定.每次检测前均用溴化乙 啶(EB)染色的鸡血红细胞校正仪器使CV稳定在 5%内,CELLQust软件获取数据.以ModFitLT软件 进行细胞增殖周期分析.以Sub—G1法检测细胞 凋亡率(M1),打印数据并绘制直方图,根据数据进 行统计分析,比较. 2结果 正常腮腺腺泡,多形性腺瘤及瘤旁腺泡,War- thin瘤及瘤旁腺泡细胞增殖指数(proliferationin— dex,PI)比较见表1. 表1正常腺泡,肿瘤腺泡,瘤旁腺泡PI比较 Table1ComparisonofPIvaluesbetweennormalacini,tumorsand theircontiguousacini 表2正常腺泡,肿瘤腺泡,瘤旁腺泡细胞凋亡比较 Table2Comparisonofapoptosisratesbetweennormalacini,tumors andtheircontiguousacini 表1所示,多形性腺瘤PI最高,与其他4项相 比,具有统计学意义(P<0.05),Warthin瘤PI位居 第二,除与多形性腺瘤PI比较有统计学意义异外, 与正常腺泡和瘤旁腺泡相比,无统计学意义(P> 籁 锲 罂l籁锲罂ILI__.d DNA含量DNA含量 图1正常腮腺细胞增殖图2腮腺多形性腺瘤细胞增殖 (FCM)(FCM) Fig.1CellproliferationofnormalF.2Cellproliferationof aciniPleomorphicadenoma 0.05).多形性腺瘤瘤旁腺泡PI仅次于Warthin 瘤,高于其他瘤旁腺泡或正常腺泡(P>0.05). 正常腮腺腺泡,多形性腺瘤及瘤旁腺泡,War- thin瘤及瘤旁腺泡细胞凋亡见表2. 表2所示,多形性腺瘤细胞凋亡率最高,与其他 4项相比,具有统计学意义(P<0.05),多形性腺瘤 瘤旁腺泡次之,Warthin瘤居第三,这4项相比均无 显着性差异(P>0.05).两种肿瘤及瘤旁腺泡的PI 与凋亡率见图1一图6. 240 妊180 霎m 60 O DNA含量 图3腮腺Warthin瘤细胞增殖 (FCM) Fig.3CellproliferationofWarthin tumot 02伽40 细.胞凋6o亡o80o000 图4正常腮腺细胞凋亡 (FCM) Fig.4Cellapoptosisof normalacini . 胞.胞细胞凋亡细胞 凋亡 图5腮腺多形性腺瘤细胞凋亡图6腮腺Warthin瘤细胞凋亡 (FCM)(FCM) Fig.5CellapoptosisofPleomorphicFig.6Cellapoptosisof adenomaWarthintumor 3讨论 细胞增殖和细胞凋亡的平衡关系在维持正常组 织器官的细胞数目恒定或生长平衡方面起着重要作 用,它们是组织正常生长,发挥功能的两个基本要 素,二者互相制约,处于动态平衡之中.当组织细胞 受损或过度增殖时,通过凋亡来消除受损或异常的 细胞,防止组织进一步损伤和形成肿瘤,而当凋亡或 其他原因丢失死亡的细胞则由增殖来补充,以保持 正常细胞的数目与体积.因此,目前认为它们在肿 瘤的发病机制中有重要意义l4]. 同样,细胞增殖与细胞凋亡与腮腺肿瘤关系密 切,因为只有具有增殖能力的细胞才有可能发生肿 瘤,因此当一个包膜完整的肿瘤完整摘除后复发,其 ???柏?O 壤锲磐 如柏?m0 壤锲磐 口腔医学研究2007年8月第23卷第4期397 瘤旁"正常".腺泡就可能为复发的发源地.用 FCM定量分析肿瘤及瘤旁细胞增殖和细胞凋亡,具 有重要意义,因为,肿瘤细胞和瘤旁细胞在数量上或 结构上都有异常,这些异常可在一定程度上被DNA 反映出来,可以认为DNA是反映肿瘤及瘤旁腺泡的 分子基础. 增殖指数(PI)是代表细胞周期的增殖,分裂(S +G2+M)细胞所占的百分比,亦能反映肿瘤细胞 的增殖能力.J. 本研究显示,多形性腺瘤PI为l4.30,Warthin 瘤为9.95,两者之间有显着性差异(P<0.05),而多 形性腺瘤瘤旁肿泡PI(9.53)非常接近Warthin瘤, 高于Warthin瘤瘤帝腺泡(8.66)及正常腺泡(8.01) 表明多形性腺瘤瘤旁腺泡可能处于"准新生物"状 态,而Warthin瘤瘤旁腺泡则不然. 研究表明,许多细胞凋亡的诱导因素常经过细 胞增殖某些相同的路径转导死亡的信号.最常见的 是肿瘤坏死因子(TNF),其他还有多种细胞因子,无 机小分子,自由基等. 本结果显示,细胞凋亡率以多形性腺瘤最高 (13.41),多形性腺瘤瘤旁腺泡次之(9.56),Warthin 瘤居第三(9.24),正常腺泡最低(6.63).这一结果 表明细胞增殖越快的组织其凋亡亦越快,与细胞增 殖的频率基本吻合.有研究表明,细胞增殖和细胞 凋亡有共同的促进基因和抑制基因,如C—Myc是 一 种细胞早期反应基因,具有促进增殖与诱导凋亡 的双重作用.其他还有bcl一2,C—met,Bcr—Abl,C — Kit,C—rcl等基因共同组成一个基因调控网络, 从基因水平调节组织的增殖与凋亡. 参考文献 [1]朱声荣,王秀丽,吴慧华,等.大涎腺肿瘤,囊肿,炎症手术前后 唾液流量及slsA,IsG,Lys变化的测定[J].临床121腔医学杂 志,1996,12:80—82 [2]朱声荣,王秀丽,邵乐南,等.腮腺肿瘤及瘤旁腺泡P,P2和 DNA定量研究[J].中华口腔学杂志,2001,36:361—363 [3]俞光岩,柳晓冰,彭欣,等.腮腺沃辛瘤发病情况分析[J].口腔 额面外科杂志,1997,7:88—9o [4]CardoneMH,RoyN,StemmickeHR,eta1.Regulationofcell deathproteasecaspase一9byphosphory—lation[J].Science, 1998.282:l3l8一l325 [5]KahnMA,DocdterME,Hermann—DetrinJM.Flowcytomefora— nalysisoforalpremalignantLesionalotandreview[J].JOral PatholMed,1992,21:l一6 [6]DanieleE,TralonguV,MorelloV,eta1.Pleomorphicadenma andadenoidoysticcarcinomaofsalivaryglandimmuno—-histochem?- icalassessmentofproliferativeactivityincomparisonwithflowcy— tometricstudy[J].CellProlif,1996,29:153—162 [7]WolfBB,GreenDR.Suicidaltendenciesapoptosiscelldeathby Casoasefamilyproteinase[J].JBiolchemistry,1999,274:20 049—20084 [8]BommiA,BrundtA,WestnAE,eta1.Cellsurvivalpromotedby theRas—-MAPKsigmalingpathwaytranseription—-dependentand independentmechanism[J].Science,1999,286:l358一l362 [收稿日期:2007—03一l9](本文编辑汪喻忠) 第六次全国口腔颌面头颈肿瘤外科学术研讨会征文 经中华口腔医学会常务理事会审议批准,第六次全国口腔颌面头颈肿瘤学术会议将于2007年l2月28,30日在哈尔滨 市举行.会议由哈尔滨医科大学口腔医学院承办,将邀请国内外着名专家学者作专题,并授予国家级继续教育I类学 分,征文内容和要求如下: 1征文内容 口腔颌面头颈肿瘤的基础研究;涎腺肿瘤及类肿瘤疾病;颈部淋巴结的处理;口腔颌面头颈肿瘤根治后修复重建;颌骨及 牙源性肿瘤的治疗交流;颅颌联合根治的应用;口腔颌面头颈肿瘤的循证研究;口腔颌面头颈肿瘤预后随访及康复治疗; 口腔颌面头颈部血管性病变的临床分型与治疗. 2征文要求 中英文标题,中文单位和作者姓名,论文全文3500字以内,结构摘要500字以内(目 ,结果和讨论).请交打印稿 的,方法 和电子版各一份(软盘或电子邮件,文档为MSWORD格式).有基金资助的课题,请提供基金项目编号.论文撰写格式请参 照《中华口腔医学杂志》的投稿要求. 3投稿方法 电子邮箱:hydkqkjk@yahoo.com.cn.投稿地址:哈尔滨市南岗区邮政街23号(邮编150001),第六次全国口腔颌面头颈 肿瘤学术会议筹备组收,请在信封或电子邮件标题上标明"会议征文"字样.截稿日期:2007年9月30日(以当地邮戳为准), 联系人:吕彦超,联系电话:0451—53625108,传真:0451—53625108.