高浓度胰岛素_葡萄糖对HepG2细胞蛋白激酶C活性的影响

高浓度胰岛素_葡萄糖对HepG2细胞蛋白激酶C活性的影响 ?论著 ? 高浓度胰岛素 、葡萄糖对 Hep G2 细胞 蛋白激酶 C 活性的影响 叶娟 李果 陈家伦 ( ) 【摘要】 目的 研究高浓度胰岛素 、葡萄糖对 Hep G2 细胞蛋白激酶 C P KC活性的影响 。方法 - 7 () 建立具胰岛素抵抗特性受体下调的 Hep G2 DR2Hep G2细胞模型 ,测定 10 mol/ L 胰岛素 、25 mmol/ ( ) L 葡萄糖对未处理 Hep G2 NDR2Hep G2细胞和 DR2Hep G2 细胞膜 P KC 、胞浆 P KC 活性的影响 。结果 ( DR2Hep G2 细胞未受高浓度胰岛素 、葡萄糖刺激时膜和胞浆 P KC 活性均高于 NDR2Hep G2 细胞 P < - 7 ) 0 . 05。10 mol/ L 胰岛素刺激 NDR2Hep G2 细胞或 DR2Hep G2 细胞 ,30 秒和 5,10 分时膜 P KC 活 ( ) 性增高 ,胞浆 P KC 活 性 降 低 P < 0 . 01 。25 mmol/ L 葡 萄 糖 引 起 二 种 不 同 状 态 下 Hep G2 细 胞 膜 ( ) ( ) ( ) NDRDRP KC 活性二相增高 , 胞浆 P KC 活性增高 2Hep G2 细胞或降 低 2Hep G2 细 胞P < 0 . 01。 - 7 10 mol/ L 胰岛素和 25 mmol/ L 葡萄糖同时刺激细胞 ,膜和胞浆 P KC 活性的变化与 25 mmol/ L 葡 - 7 萄糖单独刺激时基本一致 。结论 P KC 上调与 DR2Hep G2 细胞的胰岛素抵抗状态有关 。10 mol/ L 胰岛素或 25 mmol/ L 葡萄糖刺激二种不同状态下的 Hep G2 细胞 ,引起膜 P KC 活性二相增高 ,但对胞 浆 P KC 活性的影响不完全相同 ;二者同时刺激主要通过葡萄糖介导的机制激活 P KC 。 胰岛素 葡萄糖 【关键词】 蛋白激酶 C Hep G2 细胞 Eff ects of high concentrations of insul in and glucose on the protein kinase C activities of HepG2 cells Y E J uan , L I Guo , C H EN J i al u n . S hanghai I nstit ute of En docri nology , S hanghai , 200025 【Abstract】 Objective To st udy t he effect s of high concent rations of insulin and glucose on t he p rotein ( ) ( kinase C P KCactivities of Hep G2 cells. Methods A model of receptor down2regulated Hep G2 DR2 ) Hep G2cells wit h characteristics of insulin resistance was developed. The membrane and cytosolic P KC activi2 - 7 ties of NDR2Hep G2 cells and DR2Hep G2 cells stimulated by 10 mol/ L insulin and 25 mmol/ L glucose were - 7 measured. Results Wit hout stimulation by 10 mol/ L insulin or 25 mmol/ L glucose , t he P KC activities of ( membrane and cytosol of t he DR2Hep G2 cells were higher t han t hose observed in NDR2Hep G2 cells P < - 7 ) 0 . 05. 10 mol/ L insulin induced bip hasic increases of membrane P KC activities by NDR2Hep G2 cells ( ) and DR2Hep G2 cells P < 0 . 01 , t he initial increase being at 30 sec and t he seco ndary at 5 , 10min. Meanwhile , t he activities of cytosolic P KC reduced mar kedly. 25 mmol/ L glucose induced bip hasic increas2 ( ) es of t he membrane P KC activities by NDR2Hep G2 cells and DR2Hep G2 cells P < 0 . 01. At t he same time t he activities of cytosolic P KC increased slightly by NDR2Hep G2 cells or decreased by DR2Hep G2 - 7 cells. The effect s of 25 mmol/ L glucose were parallel to t hose when 10 mol/ L insulin and 25 mmol/ L glucose were t reated simultaneously. Conclusion The up2regulation of P KC may be related to t he insulin re2 - 7 sistance of DR2Hep G2 cells. 10 mol/ L insulin or 25 mmol/ L glucose induced bip hasic increases of mem2 brane P KC activities of NDR2Hep G2 cells and DR2Hep G2 cells. But t he effect s on cytosolic P KC were differ2 ent . P KC may be activated t hrough t he glucose2induced mechanisms mainly when insulin and glucose were t reated simultaneously. Insulin Glucose Hep G2 cells 【 Key words】 Protein kinase C ( )Chi n J En docri nol Met ab , 1999 ,15 :2942297 〔1〕( ) 蛋白激酶 C P KC是一族普遍存在于细胞内的 泌 、跨膜信号传递 、受体失敏和介导免疫反应等。 ( 专一性蛋白质丝氨酸/ 苏氨酸磷酸化激酶 ,广泛参与 胰岛素 、葡萄糖或其它激动剂通过二酰甘油 diacyl2 ) 细胞生长分化 、基因表达调控 、激素和神经递质的分 glycerol , D G途径激活 P KC ,后者通过其蛋白质磷 酸化作用产生一系列生物效应 。但是 ,一种或多种 本课题为教育部留学回国人员科研启动基金资助项目 P KC 亚型的过度激活可导致胰岛素受体信号传递 作者单位 :200025 上海市第二医科大学附属瑞金医院 , 上海市 β的减弱 ,如磷酸化胰岛素受体亚单位丝氨酸/ 苏氨 3 小时 。弃培养液用 0 . 01 mol/ L PB S 冲洗 5 孵育 次 ,每孔中加入 0 . 25 %胰酶 1 ml , 室温消化 25 分酸残基使其酪氨酸激酶活性降低 、抑制糖原合成酶 〔2 ,3〕钟 ,用含 15 %小牛血清的 DM EM 培养液终止反应 。 活性 等 , 与 胰 岛 素 抵 抗 密 切 相 关; 过 度 激 活 的 P KC 还可能通过增加肾小球内皮细胞通透性 、刺激 吹打细胞并移入测试管中 ,用 1 ml PB S 洗 5 次 ,洗 肾系膜细胞合成基质蛋白等机制参与糖尿病肾病的 液一并加入测试管中 ,2 000 rp m 离心 10 分钟 。弃 〔4〕- 7 病理改变;高糖介导的 P KC 激活可改变一些与血 上清 ,测 沉 淀 物 放 射 计 数 。用 10 mol/ L 胰 岛 素 125 125 与I2胰岛素竞争结合后的残余I2胰岛素结合量管功能有关的酶或蛋白质的活性和基因表达 ,导致 作为非特异性结合 。未用胰岛素刺激的 Hep G2 细 大小血管功能紊乱 ,是糖尿病慢性并发症的发病因 〔5 ,6〕125 素之一。胞残余I2胰岛素结合量作为对照 。 14 () 受体下调 Hep G2 D R2Hep G2细胞既具有肝细 3 . C2葡 萄 糖 掺 入 试 验 : ND R2Hep G2 细 胞 或 胞的代 谢 特 点 , 又 有 胰 岛 素 受 体 和 受 体 后 功 能 缺 D R2Hep G2 细胞 置 于 含 3 %小 牛 血 清 的 DM EM 培 〔7 ,8〕陷,是研究糖尿病及胰岛素抵抗的理想细胞模 养液中孵育 24 小时或 48 小时 。弃培养液后每孔中 ( ) 型 。本研究以未处理 Hep G2 ND R2Hep G2细胞和 14 - 9 - 7 μ 加入 3 CiC2葡 萄 糖 及 2 ml 含 10 mol/ L 或) (D R2Hep G2细胞为研究对象 ,观察 10 mol/ L 胰 - 7 10 mol/ L 胰岛素的 DM EM 培养液 ,孵育 24 小时 岛素或 25 mmol/ L 葡萄糖及二者同时刺激对二种 不同状 态 下 Hep G2 细 胞 膜 和 胞 浆 P KC 活 性 的 影 后弃培养液 , 用 0 . 01 mol/ L PB S 洗 5 次 。每孔中 响 ,探讨 P KC 在糖尿病和胰岛素抵抗中的作用 。 加入 1 ml NaO H ,37 ?裂解细胞 2 小时 。取裂解液 μ200 l 加入 10 ml 闪烁液中 , 混匀过夜 , 测放射性 计数 。 材料和方法 4 . P KC 活性测定 :按照 Gibco 公司的 P KC 测试 〔9〕系统及 Yasuda 等报道的 P KC 活性测定原理与方 一 、材料 - 7 法 。含 10 mol/ L 胰岛素或 25 mmol/ L 葡萄糖或 Hep G2 细胞株购于日本筑波细胞库 。Ac2MB P - 7 (10 mol/ L 胰岛素 + 25 mmol/ L 葡萄糖的 DM EM) () 4214、P KC 19236、PMA 、磷酸纤维素薄膜等购于 32 14 培养液刺激 ND R2Hep G2 细胞或 D R2Hep G2 细胞 ,Gibco 公 司 。P2A TP 、C2葡 萄 糖 购 于 Dupo nt 公 125 0 , 30 秒 , 1 分 , 3 分 , 5 分 , 10 分 , 15 分 。 时间分别为 司 。I2胰 岛 素 购 于 Amersham 公 司 。其 余 试 剂 购 () 1超 速 离 心 法 分 离 胞 浆 及 膜 部 分 P KC 粗 提 物 。 于 Sigma 公司 。 () ( ) 2P KC 活性测定 : Ac2MB P 4214是髓鞘磷脂基质 ( ) 主要仪器 :超净工作台 苏州净化设备厂; CO2 蛋白的一个合成片段 ,其中 8 号氨基酸为丝氨酸残 ( ) (温箱 Napco ,5410 型; 超速离心机 Beckman ,Op ti2 基 ,是 P KC 的特异性磷 酸 化 底 物 。测 定 反 应 产 物 ) ma等 。 32 ( ) 的P 掺 入 量 来 反 映 P KC 活 性 。P KC 19236 是 二 、方法 P KC 磷酸化反应的特异性抑制剂 ,其存在时测得的 1 . 细胞培养 : Hep G2 细胞培养于细胞培养板 , 10 %小牛血 清 的 DM EM 培 养 液 、37 ?、5 % CO温 2 ( ) 结果作为非特异性反应 。3计算结果并以粗提物 ( ) 箱中孵育 。D R2Hep G2细胞模型的 建 立 : 单 层 贴 的 A 值校正 。 280 - 7 壁 Hep G2 细胞置于含 10 mol/ L 胰岛素的 DM EM 5 . 统计学方法 : 数据以 x ?s 表示 ; 两两比较用 培养液中孵育 24 小时 。弃培养液 ,于 4 ?条件下用 t 检验 。预冷的 p H 4 . 0 的 DM EM 培养液和 0 . 01 mol/ L 磷 ( ) 酸盐缓冲液 PB S分别洗涤细胞 5 次 , 即成为 D R2 结果 Hep G2 细胞 。 125 125 一 、残余I2胰岛素结合率2 . 残余I2胰岛素结合率测定 : ND R2Hep G2 细 - 7 - 9- 9 - 7 ( ( ) 超生 理 浓 度 10 mol/ L 和 生 理 浓 度 10 胞或 D R2Hep G2 细 胞 置 于 含 10 mol/ L 或 10 ) mol/ L 胰 岛 素 刺 激 24 小 时 后 , D R2Hep G2 细 胞 残 mol/ L 胰岛素的 DM EM 培养液中孵育 24 小时 。弃 125 余I2胰岛 素 结 合 率 明 显 低 于 ND R2Hep G2 细 胞 , 培养液 ,于 4 ?条件下 ,用预冷的 p H 4 . 0 的 DM EM ( ) ( ) 前者 为 434 ?233 cp m , 835 ?230 cp m , 后 者 为 培养液及 0 . 01 mol/ L PB S 分别冲洗 5 次 。每孔中 () ( ) ( ) 818 ?153cp m , 1 018 ?201cp m P < 0 . 01。随 着125 μ加 2 ml 含 3 CiI2胰岛素的 DM EM 培养液 , 4 ? 胰 岛 素 浓 度 的 增 高 , ND R2Hep G2 细 胞 和 D R2 125 胰岛素刺激时不同的是胞浆 P KC 活性同时增高 。 Hep G2 细胞残余I2胰岛素结合率降低 。 14 - 7 二 、C2葡萄糖掺入试验10 mol/ L 胰岛素和 25 mmol/ L 葡萄糖同时 - 9 - 7 10 mol/ L 和 10 mol/ L 胰岛素刺激 24 小时 刺激 ND R2Hep G2 细胞 ,膜 P KC 活性在 30 秒和 5, 14 后 ,D R2Hep G 2 细 胞C2葡 萄 糖 掺 入 量 明 显 低 于 10 分钟时增高 ,胞浆 P KC 活性同时增高 。 ( ) ( ND R2Hep G2 细胞 。前者为 1 477 ?360cp m , 700 四 、高浓 度 胰 岛 素 、葡 萄 糖 对 D R2Hep G2 细 胞 ( ) ) ( ?314 cp m , 后 者 为 3 128 ?233 cp m , 1 396 ?()P KC 活性的影响 表 2 ) ( ) 201cp m P < 0 . 01 。48 小 时 后 的 D R2Hep G2 细 表 2 高浓度胰岛素 、葡萄糖对 DR2Hep G2 细胞 P KC 活性的 14影响 胞C2葡萄 糖 掺 入 量 轻 度 增 加 , 仍 明 显 低 于 ND R2 Ta b 2 The effect s of high co ncent ratio ns of insulin and glucose ( ) ( ) Hep G2 细胞 ,前者为 1 610 ?187cp m , 891 ?154o n P KC activities of DR2Hep G2 cells ( ) ( ) cp m ,后 者 为 3 128 ?233 cp m , 1 396 ?201 cp m膜 P KC 胞浆 P KC 浓度 时间 ( ) Membrane P KC Cyto solic P KC P < 0 . 01。Time Co ncent ratio n - 1- 1- 1- 1()()p mol?min A? p mol?min A? 280 280 三 、高浓度胰岛素 、葡萄糖对 ND R2Hep G2 细胞基础状态 ()?4 . 17 35 . 38 ?9 . 18 0 12 . 89 P KC 活性的影响 表 1Basic stat us ( )n = 18 - 7 3表 1 高浓度胰岛素 、葡萄糖对 NDR2Hep G2 细胞 P KC 活性 ″ 34 . 16 ?11 . 78 30 10 mol/ L Insulin 29 . 84 ?5 . 73 的影响 ( ) n = 6 10 . 32 ?3 . 141′40 . 19 ?8 . 42Ta b 1 The effect s of high co ncent ratio ns of insulin and glucose 3′14 . 88 ?4 . 8728 . 35 ?9 . 43o n P KC activities of NDR2Hep G2 cells 3 5′32 . 79 ?7 . 7817 . 43 ?5 . 92 33 10′24 . 92 ?4 . 85 24 . 61 ?8 . 67 膜 P KC 胞浆 P KC 浓度 时间 Membrane P KC Cyto solic P KC 11 . 57 ?2 . 8232 . 89 ?4 . 6515′Time Co ncent ratio n - 1- 1- 1 - 1 )( ) (p mol?min A? p mol?min A? 280 280 3 25 mmol/ L Gluco se 30″35 . 20 ?6 . 4331 . 05 ?6 . 69 ( ) n = 6 13 . 75 ?7 . 16基础状态 1′38 . 25 ?8 . 57?6 . 57 31 . 53 ?8 . 69 10 . 12 Basic stat us 0 3′12 . 09 ?2 . 6633 . 31 ?4 . 41( )n = 18 3 5′39 . 01 ?6 . 0812 . 55 ?3 . 10 - 7 3″ 29 . 09 ?8 . 69 30 10 mol/ L Insulin ?8 . 44 26 . 59 3 3 10′24 . 99 ?6 . 55 28 . 01 ?7 . 54( ) n = 6 10 . 81 ?4 . 071′32 . 51 ?4 . 56 12 . 83 ?3 . 4925 . 13 ?7 . 4915′ 3′13 . 38 ?4 . 9729 . 50 ?5 . 64- 7 3 3 30″10 mol/ L Insulin + 31 . 62 ?9 . 5541 . 18 ?5 . 643 5′38 . 58 ?8 . 7728 . 71 ?5 . 47 25 mmol/ L Gluco se 14 . 39 ?3 . 1435 . 91 ?4 . 041′33 10′17 . 67 ?4 . 29 13 . 30 ?5 . 14 ( )n = 6 3′15 . 35 ?4 . 8135 . 36 ?5 . 473 10 . 53 ?6 . 19 15′21 . 72 ?5 . 89 5′17 . 77 ?7 . 7837 . 79 ?5 . 6233 25mmol/ L Gluco se 30″31 . 71 ?5 . 21 36 . 77 ?3 . 93 31 . 45 30 . 85 ?8 . 18 3 ?5 . 01 3 10′ ( )10 . 63 ?5 . 6332 . 04 ?6 . 91n = 6 1′33 15′18 . 53 ?7 . 34 29 . 54 ?7 . 80 3′13 . 39 ?5 . 3235 . 01 ?4 . 4433 5′27 . 23 ?12 . 53 49 . 06 ?10 . 98 ( ) 注 :与基础状态 即未受高浓度 胰 岛 素 葡 萄 糖 刺 激时 相 比 ( 12 . 50 ?4 . 1630 . 04 ?3 . 88Co mpared wit h basic stat us wit ho ut stimulating by high co ncent ratio n 10′3 ) of insulin and gluco se, P < 0 . 01 15′12 . 25 ?4 . 1826 . 32 ?5 . 29- 7 33 30″30 . 29 36 . 05 10 mol/ L Insulin + ?7 . 55 ?7 . 41 D R2Hep G2 细胞未受高浓度胰岛素或葡萄糖刺 25mmol/ L Gluco se 17 . 16 ?5 . 8029 . 77 ?7 . 081′激时 , 膜 P KC 活性和胞浆 P KC 活性均高于 ND R2 ( )n = 6 3′13 . 27 ?5 . 0833 . 66 ?5 . 25- 7 3 5′33 . 96 ?11 . 5323 . 03 ?5 . 75 Hep G2 细胞 。提示 10 mol/ L 胰岛素刺激 24 小时3342 . 92 ?6 . 42 10′28 . 96 ?7 . 63 后 ,D R2Hep G2 细胞发生 P KC 上调 。 35 . 90 ?5 . 56 17 . 25 ?5 . 4515′ - 7 10 mol/ L 胰 岛 素 刺 激 D R2Hep G2 细 胞 , 膜( ) 注 :与基础状态 即未受高浓度 胰 岛 素 葡 萄 糖 刺 激时 相 比 P KC 活性在 30 秒和 10 分钟时增高 ,同时胞浆 P KC( Co mpared wit h basic stat us wit ho ut stimulating by high co ncent ratio n 3 - 7 ) of insulin and gluco se, P < 0 . 01 活性降低 , 与 10 mol/ L 胰岛素刺激 ND R2Hep G2 - 7 细胞时的变化基本一致 。10 mol/ L 胰岛素刺激 ND R2Hep G2 细胞 , 膜 25 mmol/ L 葡 萄 糖 刺 激 D R2Hep G2 细 胞 , 膜 P KC 活性表现为二相增高 。第一相为 30 秒时 , 第 P KC 活性在 30 秒和 10 分钟明显增 高 , 胞 浆 P KC 二相 为 5 , 10 分 钟 时 , 明 显 高 于 基 础 状 态 。胞 浆 活性在 10 分钟和 15 分钟显著降低 。 P KC 活性在 30 秒时略有降低 ,10 分钟时明显降低 。 - 7 25 mmol/ L 葡萄糖刺激 ND R2Hep G2 细胞 , 膜10 mol/ L 胰岛素和 25 mmol/ L 葡萄糖同时 - 7 P KC 活性在 30 秒和 5 分钟时增高 , 与 10 mol/ L刺激 D R2Hep G2 细胞 ,膜 P KC 活性在 30 秒和 10 分 钟时增高 ,胞浆 P KC 活性在 30 秒时增高 , 10 分钟 著下降与 P KC 活性增高有关 。过度激活的 P KC 在 时略有降低 。胰岛素受体和受体后水平损害胰岛素信号传递 ,是 导致胰岛素抵抗的重要因素之一 。 讨论 D G2P KC 的过度激活亦被认为是糖尿病慢性并 Hep G2 细胞来源于人肝胚胎瘤细胞 ,保留了肝 发症的发病因素之一 。高糖通过激活 P KC 而激活 125 + + 细胞的许多特性 。D R2Hep G2 细胞残余I2胰岛素 ( ) 磷脂酶 Ac PL A,降低 Na 2K 2A TP 酶活性 , 并 2 2 结合率降低 ,提示细胞表面胰岛素受体数目减少 ,同 调节与血管功能有关的蛋白质的基因表达 ,导致大 14 时C2葡萄糖掺入量明显下降 , 48 小时后仍未恢复 〔5 ,6〕小血管功能紊乱。因此 , 合理地控制血糖水平 细胞对胰岛素刺激的正常糖代谢反应 。J eff rey 等人 是减少慢性并发症的重要措施 。另外 ,胰岛素增敏 认为 D R2Hep G2 细胞的胰岛素受体和 受 体 后 功 能 剂曲格列酮能通过阻断高葡萄糖介导的 P KC 激活 , 有一定缺陷 ,受体自身磷酸化功能和胰岛素刺激的 〔5〕糖 、脂 、蛋 白 质 代 谢 功 能 降 低 , 表 现 为 胰 岛 素 抵 从而改善胰岛素抵抗。 高浓度胰岛素和葡萄糖〔7 ,8〕 抗。引起 Hep G2 细胞膜和 - 7 实验结果表明 ,10 mol/ L 胰岛素或 25 mmol/ L 胞浆 P KC 活性改变 ,是胰岛素抵抗和糖尿病慢性并 葡萄糖引起 ND R2Hep G2 细胞和 D R2Hep G2 细胞膜 发症的致病因素之一 。进一步深入研究将有助于阐 P KC 活性二相增高 ,第一相在 30 秒 ,第二相在 5, 明糖尿病发病机制及各种病理改变 ,对治疗亦有积 10 分钟 。研究表明第一相 P KC 增高与磷脂酰肌醇 ( ) 由磷脂酰肌醇特异的磷脂酶 P I2PL C水解生成 D G 极意义 。 有关 ;第二相增高与磷脂酰胆碱由磷脂酰胆碱特异 参 考 文 献 ( ) 的磷脂酶 PC2PL C水解生成 D G、磷脂酸2D G 全程 〔10〕合成 、糖原磷脂酰肌醇水解生成 D G 等有关。 1 Alexandra N . Protein kinase C : st ruct ure , f unctio n and regulatio n . - 7 J Biol Chem , 1995 ,270 :28495228498 . 10 mol/ L 胰岛素或 25 mmol/ L 葡萄糖对二种 2 Shmueli E , Alberti KGMM , Reco rd CO . Diacylglycerol/ p rotein kinase C signalling : a mechanism fo r insulin resistance ? J Inter 不同状态 Hep G2 细胞胞浆 P KC 活性的影响不完全 Med , 1993 ,234 :3972400 . 相同 ,可能二者通过不同的途径和机制调节膜和胞 Schmitz2p riffer C , Browne CL , Biden TJ , et al . Alteratio ns in t he 3 ε exp ressio n and cellular localizatio n of p rotein kinase C isozymes θandare associated wit h insulin resistance in skeletal muscle of t he high2fat2fed rat . Diabetes , 1997 ,46 :1692178 . Derubertis FR , Craven PA. Activatio n of p rotein kinase C in 4 〔10 ,11〕- 7 glo merular cells in diabetes. Mechanisms and potential links to t he 活 性。而10 mol/ L 胰 岛 素 和浆 P KC pat hogenesis of diabetic glo merulopat hy. Diabetes , 1994 ,43 :128 . 25 mmol/ L 葡 萄 糖 同 时 刺 激 ND R2Hep G2 细 胞 或 King GL , Brownlee M . The cellular and molecular mechanisms of 5 diabetic co mplicatio ns. Endocrin Metab Clin N Am , 1996 ,25 :2552 D R2Hep G2 细胞 , P KC 活性的变化与 25 mmol/ L 葡 270 . Williams B. Gluco se2induced vascular smoot h muscle dysf unctio n : 萄糖单独刺激时基本一致 。二者对 P KC 活性的影 6 t he role of p rotein kinase C. Hypertentio n , 1995 ,13 :4772486 . 响没有累加或消减作用 。二者同时刺激时葡萄糖介 Amat ruda J M , Chang CI. Insulin induced alteratio ns in insulin 7 binding and insulin actio n in p rimary cult ures of rat hepatocytes. 导的 P KC 激活机制占优势 。 Diabetes , 1982 ,31 :1452148 . D R2Hep G2 细胞基础状态下膜和胞浆 P KC 活 Williams J F , Olef sky J M . Defective insulin recepto r f unctio n in 8 down2regulated Hep G2 cell . Endocrinology , 1990 , 127 : 17062 性均高于 ND R2Hep G2 细胞 ,提示 P KC 上调可能与 1717 . 其胰岛素抵抗状态有关 。从胰岛素受体到糖原合成 Yasuda I , Kishimoto A , Nishizuka Y , et al . A synt hetic peptide 9 subst rate fo r selective assay of p rotein kinase C. Biochem Biop hy 酶和葡萄糖转运系统的信号传递的损害是胰岛素抵 Res Co mmun , 1990 ,166 :122021227 . Hoff man J M , Ishizuka T , Farese RB. Interrelated effect s of in2 β抗的重要因素 。P KC 可 直 接 磷 酸 化 胰 岛 素 受 体 10 sulin and gluco se o n diacylglycerol 2p rotein kinase C signalling in rat 亚单位的丝氨酸/ 苏氨酸残基 ,导致受体酪氨酸激酶 adipocytes and solei muscle in vit ro and in vivo in diabetic rat s. En2 〔12〕docrinology , 1991 ,128 :293722948 . 活性降低 , 使受体失敏。P KC 过度激活 可 能 通 Cooper DR , Hernandez H , Farese RV , et al . Insulin increases t he 11 过激活酪氨酸磷酸酶影响胰岛素刺激的磷脂酰肌醇 synt hesis of p ho sp holipid and diacylglycerol and p rotein kinase C ac2 tivit y in rat hepatocytes. Arch Biochem Biop hy , 1990 , 276 : 4862 ( ) ( 3 P I3 2激 酶 活 性 和 降 低 胰 岛 素 受 体 底 物21 IRS2494 . ) 1、Shc 等 蛋 白 质 磷 酸 化 , 减 弱 胰 岛 素 受 体 信 号 传 Schubert C , Carel K , Drazuin B , et al . Interactio n of p rotein ki2 12 nase C wit h insulin signalling. J Biol Chem , 1996 , 271 : 153112 〔5〕递。P KC 还可通过磷酸化作用抑制糖原合成酶 15314 . ( ) 收稿 :1998209222 修回 :1999207216 活性 、降 低 GL U T4 转 运 , 从 而 损 害 葡 萄 糖 转 运 代 〔2〕14 谢。因此 D R2Hep G2 细胞C2葡萄糖掺入量的显