进出口化妆品中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生的测定液相色谱法.doc

进出口化妆品中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生的测定液相色谱法.doc ICS 点击此处添加中国文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 进出口化妆品中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三 氯生的测定 液相色谱法 Determination of hydroquinone, salicylic acid, phenol, 2-phenoxyethanol, methyl 4-hydroxybenzoic acid easters, dichlorophen and triclosan in cosmetic for import and export-Liquid chromatography method 点击此处添加与国际标准一致性程度的 (送审稿) XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T XXXXX—XXXX 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写》、GB/T 20001.4-2001《标 准编写规则 第4部分:化学分析方法》给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:赵孔祥、陈旭艳、葛宝坤、高健会。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 请注意本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 I SN/T XXXXX—XXXX 进出口化妆品中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、 双氯酚、三氯生的测定 液相色谱法 1 范围 本标准了进出口化妆品中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生的液相色谱测定方法。 本标准适用于染发膏、唇膏、牙膏、洁面乳、眼影、护理油、柔肤水、香皂中氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、双氯酚、三氯生的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 用乙腈提取化妆品中的待测物质，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外吸收光谱图定性，外标法定量。 试剂与材料 4 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇:色谱纯。 4.2 乙腈:色谱纯。 4.3 乙酸:优级纯。 4.4 乙酸铵:色谱纯。 4.5 四氢呋喃:分析纯。 4.6 0.02 moL/L乙酸铵-乙酸-水:准确称取1.54 g乙酸铵，加水溶解，准确加入10 mL乙酸，最后用水定容为1000 mL。 4.7 标准物质:氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、双氯酚、三氯生，纯度均?99%，详细化合物信息见附录A中A.1。 4.8 标准储备溶液:分别称取氢醌、水杨酸、苯酚各200 mg、苯氧乙醇500 mg、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、双氯酚、三氯生各100 mg(均精确到0.1 mg)，置100 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度氢醌、水杨酸、苯酚为2.0 mg/mL、苯氧乙醇为5.0 mg/mL、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生均为1.0 mg/mL的标准溶液。置于4:C冰箱保存。 1 SN/T XXXXX—XXXX 4.9 标准使用液:将标准储备液用乙腈稀释为标准系列溶液(对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 mg/L，氢醌、水杨酸、苯酚分别为2.0、4.0、10.0、20.0、100.0、200.0 mg/L，苯氧乙醇为5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、250.0、500.0 mg/L)，待用。 4.10 微孔滤膜:0.45 µm，有机相。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪:配二极管阵列检测器。 5.2 天平:感量为0.1 mg和0.01 g。 5.3 超声清洗器，输出功率140瓦。 5.4 高速离心机，转速不小于10000 r/min。 6 分析步骤 6.1 试样处理 膏、霜、乳、粉类:称取1.0 g(精确至0.01 g)样品，置10 mL容量瓶中，加6 mL乙腈，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取10 min，放至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以10000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 (精确至0.01 g)样品，置10 mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻 液体类样品(如柔肤水等):称取1.0 g 度，混匀，必要时，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以10000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 含蜡质样品(如唇膏等):称取1.0 g(精确至0.1 mg)样品，置10 mL量瓶中，加2 mL 四氢呋喃，混匀，再加6 mL乙腈，混匀，超声提取10 min，放至室温，加乙腈稀释至刻度，摇匀，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以10000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 6.2 液相色谱参考条件 6.2.1 色谱柱:C柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，5 µm，或相当者; 18 6.2.2 柱温:35 ?; 6.2.3 流动相:A:甲醇，B:0.02 moL/L乙酸氨-乙酸-水，C:乙腈，梯度洗脱，洗脱程序见表1; 6.2.4 流速1.0 mL/min; 6.2.5 检测波长:280 nm; 6.2.6 进样量:5 µL。 表1 梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% C/% 0.0 10 80 10 5.0 10 60 30 12.0 10 25 65 20.0 10 25 65 20.1 10 80 10 22.0 10 80 10 6.3 液相色谱测定 2 SN/T XXXXX—XXXX 按设定的色谱条件(6.2)，取标准使用溶液系列(4.9)进样，进行液相色谱分析，各色谱峰相应的保留时间和紫外吸收光谱图。根据保留时间以各色谱峰面积与其对应的标准溶液浓度作图，绘制标准工作曲线。取待测溶液(6.1)进样分析，若样品色谱图中，在与十种标准品相应保留时间处有相同色谱峰出现，且具有相同的紫外吸收光谱，则可以初步定性鉴别相应成分的存在，如有必要，可采用其他方法进一步确证。用标准工作曲线对待测样品中检出的成分进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，色谱图参见附录B中图B.1，各化合物220,400 nm紫外吸收光谱图见图B.2。 6.4 空白试验 除不称取样品外，均按上述条件和步骤进行。 6.5 结果计算和表述 试样中标准品的含量由色谱数据处理软件或按(1)式计算获得: A，c，VsX, …………………………(1) 410，A，ms 式中: X——试样中标准品的含量，单位为g/100g，单位为克每一百克; A——样液中标准品色谱峰面积; c——标准工作溶液中的标准品的浓度，单位为毫克每升(mg/L); s V——样液定容的体积，单位为毫升(mL); A——标准工作溶液中标准品色谱峰面积; s m——试样质量，单位为克(g)。 注:计算结果应扣除空白值。 6.6 测定低限和回收率 6.6.1 测定低限 本方法对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、双氯酚、三氯生 测定低限均为0.001 g/100g，氢醌、水杨酸、苯酚测定低限均为0.002 g/100g，苯氧乙醇测定低限均 为0.005 g/100g。 6.6.2 回收率 分别在染发膏、唇膏、牙膏、洁面乳、眼影、护理油、柔肤水、香皂中添加10种标准品，添加浓度及回收率数据参见附录C中表C.1。 3 SN/T XXXXX—XXXX 附 录 A (资料性附录) 标准物质信息 表A.1 标准物质信息表 化合物 结构式 分子量 保留时间 (min) 英文 CAS号 氢醌 Hydroquinone 123-31-9 CHO 110.11 4.45 662 水杨酸 CHO 138.12 Salicylic acid 69-72-7 6.95 763 苯酚 CHO Phenol 108-95-2 94.11 9.39 66 苯氧乙醇 CHO 2-Phenoxyethanol 122-96-6 138.16 9.74 8102对羟基苯甲酸甲酯 Methyl 4-hydroxybenzoate 99-76-3 CHO 152.15 10.00 883对羟基苯甲酸乙酯 CHO Ethyl 4-hydroxybenzoate 120-47-8 166.17 11.73 9103对羟基苯甲酸丙酯 CHO 180.20 Propyl 4-hydroxybenzoate 94-13-3 13.20 10123对羟基苯甲酸丁酯 CHO Butyl 4-hydroxybenzoate 94-26-8 194.23 14.69 11143 双氯酚 CHCO Dichlorophen 97-23-4 269.13 15.79 1310l22 三氯生 Triclosan 3380-34-5 CHCO 289.54 20.13 127l32 4 SN/T XXXXX—XXXX 附 录 B (资料性附录) 液相色谱图及紫外吸收光谱图 1-氢醌;2-水杨酸;3-苯酚;4-苯氧乙醇;5-对羟基苯甲酸甲酯;6-对羟基苯甲酸乙酯;7-对羟基苯甲 酸丙酯;8-对羟基苯甲酸丁酯;9-双氯酚;10-三氯生 图A.1 氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生的液相色谱图(280 nm，氢 醌、水杨酸、苯酚浓度为0.2 mg/mL、苯氧乙醇为0.5 mg/mL，其他0.1 mg/mL) 1-氢醌;2-水杨酸;3-苯酚;4-苯氧乙醇;5-对羟基苯甲酸甲酯;6-对羟基苯甲酸乙酯;7-对羟基苯甲 酸丙酯;8-对羟基苯甲酸丁酯;9-双氯酚;10-三氯生 图A.2 氢醌、水杨酸、苯酚、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类、双氯酚、三氯生的紫外吸收光谱图(220, 400 nm) 5 SN/T XXXXX—XXXX 附 录 C (资料性附录) 方法回收率 表C.1 不同添加水平的回收率数据(n=10) 样品添加水平回收率范围样品名添加水平回收率范围化合物 化合物 名称 (g/100g) (%) 称 (g/100g) (%) 0.002 0.002 85.4~98.0 86.8~98.8 氢醌 氢醌 0.004 0.004 94.0~101.3 83.5~95.2 0.3 0.3 88.4~99.6 85.4~95.8 0.002 0.002 81.7~92.3 90.4~107.2 水杨酸 水杨酸 0.004 0.004 85.2~94.0 90.0~106.4 0.5 0.5 87.2~95.7 93.6~109.6 0.002 0.002 94.5~106.7 80.2~96.8 苯酚 苯酚 0.004 0.004 82.2~102.5 82.2~92.8 0.008 0.008 93.7~99.4 82.8~92.6 0.005 0.005 85.3~99.8 88.4~97.2 苯氧乙苯氧乙0.010 0.010 89.3~101.5 80.9~94.0 醇 醇 1.0 1.0 87.1~98.6 87.4~100.4 0.001 0.001 对羟基87.5~99.3 对羟基84.2~93.4 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 90.5~101.7 85.0~93.2 甲酯 甲酯 0.22 0.22 85.4~93.4 86.8~96.5 牙膏 染发膏 0.001 0.001 对羟基87.1~96.7 对羟基80.8~89.0 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 88.0~101.2 86.9~98.4 乙酯 乙酯 0.24 0.24 85.7~93.6 86.4~94.0 0.001 0.001 对羟基88.1~97.8 对羟基85.8~94.4 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 88.5~100.1 81.6~94.5 丙酯 丙酯 0.26 0.26 86.2~98.1 86.6~96.4 0.001 0.001 对羟基96.1~108.0 对羟基82.4~95.4 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 97.5~109.5 82.8~92.3 丁酯 丁酯 0.28 0.28 85.5~94.2 86.8~96.6 0.001 0.001 97.0~110.2 82.8~90.2 双氯酚 双氯酚 0.002 0.002 91.1~109.4 86.4~91.3 0.5 0.5 86.1~93.4 86.6~96.4 0.001 0.001 82.9~94.6 83.2~99.9 三氯生 三氯生 0.002 0.002 92.1~104.5 80.7~99.0 0.3 0.3 85.0~92.9 86.6~96.5 6 SN/T XXXXX—XXXX 表C.1 (续) 样品添加水平回收率范围样品名添加水平回收率范围化合物 化合物 名称 (g/100g) (%) 称 (g/100g) (%) 0.002 0.002 82.0~98.6 85.8~97.4 氢醌 氢醌 0.004 0.004 81.7~101.1 91.0~106.5 0.3 0.3 87.5~97.2 90.2~103.7 0.002 0.002 82.8~92.3 86.1~104.3 水杨酸 水杨酸 0.004 0.004 82.0~99.2 93.4~107.3 0.5 0.5 80.2~97.2 94.3~103.4 0.002 0.002 88.7~99.0 85.6~106.2 苯酚 苯酚 0.004 0.004 85.0~102.3 89.5~107.2 0.008 0.008 86.7~96.4 92.8~99.4 0.005 0.005 86.0~94.0 85.8~97.0 苯氧乙苯氧乙0.010 0.010 84.8~104.5 90.4~102.5 醇 醇 1.0 1.0 82.5~104.1 91.0~102.8 对羟基0.001 对羟基0.001 86.3~96.8 94.0~105.6 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 81.5~97.9 98.6~106.0 甲酯 甲酯 0.22 0.22 87.3~98.2 86.0~97.0 唇膏 洁面乳 对羟基0.001 对羟基0.001 87.0~97.0 85.4~106.2 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 83.7~98.2 86.4~106.6 乙酯 乙酯 0.24 0.24 87.4~105.4 86.1~97.6 对羟基0.001 对羟基0.001 86.9~97.4 92.4~102.8 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 80.7~97.4 92.9~102.6 丙酯 丙酯 0.26 0.26 86.7~97.6 89.3~98.5 对羟基0.001 对羟基0.001 85.7~100.9 86.1~96.2 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 90.2~105.3 91.0~106.3 丁酯 丁酯 0.28 0.28 87.0~97.6 93.2~104.8 0.001 0.001 82.4~93.5 92.8~104.0 双氯酚 双氯酚 0.002 0.002 90.4~98.5 96.9~106.4 0.5 0.5 87.2~98.2 87.2~98.2 0.001 0.001 83.0~95.3 80.2~98.7 三氯生 三氯生 0.002 0.002 81.6~96.8 90.4~106.7 0.3 0.3 87.1~97.0 86.4~97.8 7 SN/T XXXXX—XXXX 表C.1 (续) 样品添加水平回收率范围样品名添加水平回收率范围化合物 化合物 名称 (g/100g) (%) 称 (g/100g) (%) 0.002 0.002 85.4~97.4 87.6~95.8 氢醌 氢醌 0.004 0.004 89.9~98.7 90.3~101.1 0.3 0.3 92.4~98.6 92.2~101.6 0.002 0.002 86.1~98.2 90.8~105.6 水杨酸 水杨酸 0.004 0.004 89.9~93.9 91.3~103.8 0.5 0.5 87.8~98.2 88.1~98.5 0.002 0.002 91.1~105.4 94.8~105.2 苯酚 苯酚 0.004 0.004 90.6~99.8 94.8~108.8 0.008 0.008 94.2~102.8 91.5~103.3 0.005 0.005 86.2~98.2 93.8~104.6 苯氧乙苯氧乙0.010 0.010 90.9~102.2 95.0~108.6 醇 醇 1.0 1.0 95.4~104.8 88.0~93.8 0.001 0.001 对羟基85.8~97.6 对羟基92.8~104.2 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 89.2~102.6 96.9~108.0 甲酯 甲酯 0.22 0.22 94.2~102.7 90.0~99.5 眼影 护理油 0.001 0.001 对羟基85.6~97.4 对羟基92.1~101.6 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 90.4~100.1 96.2~107.4 乙酯 乙酯 0.24 0.24 90.8~99.8 90.8~99.5 0.001 0.001 对羟基94.3~107.1 对羟基87.5~102.0 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 90.2~101.4 96.7~109.7 丙酯 丙酯 0.26 0.26 90.7~99.7 90.9~98.2 0.001 0.001 对羟基85.6~97.0 对羟基86.4~100.5 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 98.5~109.5 84.3~98.9 丁酯 丁酯 0.28 0.28 92.1~100.9 89.4~98.4 0.001 0.001 94.3~105.4 96.4~109.4 双氯酚 双氯酚 0.002 0.002 89.6~101.2 100.6~109.3 0.5 0.5 91.0~99.4 88.2~97.7 0.001 0.001 88.1~108.3 83.6~101.1 三氯生 三氯生 0.002 0.002 87.3~101.1 89.3~102.9 0.3 0.3 90.0~99.8 92.6~102.2 8 SN/T XXXXX—XXXX 表C.1 (续) 样品名添加水平回收率范围样品名添加水平回收率范围化合物 化合物 称 (g/100g) (%) 称 (g/100g) (%) 0.002 0.002 82.7~99.6 83.2~97.4 氢醌 氢醌 0.004 0.004 81.9~92.5 86.2~104.4 0.3 0.3 88.5~96.5 90.5~99.8 0.002 0.002 84.4~98.8 89.5~110.6 水杨酸 水杨酸 0.004 0.004 84.6~97.2 94.1~108.4 0.5 0.5 88.5~98.5 91.0~99.7 0.002 0.002 84.0~99.4 82.5~101.1 苯酚 苯酚 0.004 0.004 84.1~95.3 90.2~102.4 0.008 0.008 86.2~97.7 91.5~101.9 0.005 0.005 81.4~98.0 84.2~104.4 苯氧乙苯氧乙0.010 0.010 80.8~89.1 89.1~105.0 醇 醇 1.0 1.0 88.3~96.6 87.2~98.0 0.001 0.001 对羟基80.6~97.6 对羟基82.9~102.8 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 82.7~92.2 89.9~101.9 甲酯 甲酯 0.22 0.22 88.3~96.5 90.9~99.8 柔肤水 香皂 0.001 0.001 对羟基81.8~97.6 对羟基85.7~101.6 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 83.2~95.5 90.4~102.2 乙酯 乙酯 0.24 0.24 88.3~96.6 90.9~99.9 0.001 0.001 对羟基81.6~93.8 对羟基90.3~102.8 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 81.1~92.6 92.9~107.1 丙酯 丙酯 0.26 0.26 88.5~96.6 90.9~102.6 0.001 0.001 对羟基82.6~99.4 对羟基96.4~109.5 苯甲酸苯甲酸0.002 0.002 85.0~101.6 82.6~101.2 丁酯 丁酯 0.28 0.28 89.2~97.4 90.2~99.2 0.001 0.001 80.0~93.0 87.3~104.8 双氯酚 双氯酚 0.002 0.002 80.5~91.1 95.9~107.7 0.5 0.5 88.5~96.5 89.0~96.8 0.001 0.001 81.2~92.2 80.1~93.2 三氯生 三氯生 0.002 0.002 80.5~95.3 88.7~103.6 0.3 0.3 88.6~96.3 91.4~99.7 ___________________________ 9