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名称 - 中国蜂产品协会-国内最权威的蜂产品网站 ICS B 备案号: GH 中华人民共和国供销合作行业标准 GH/T XXXXX—XXXX 蜂蜜中丙酮醛含量的测定 高效液相色谱法 Determination of methylglyoxal in honey by high performance liquid chromatography method (征求意见稿) XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 发布中华全国供销合作总社 GH/T 前 言 本标准遵循GB/T 1.1-2000 《标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则 第4部分:化学分析》的编写规则。 本标准的附录A、B为资料性附录。 本标准由由中华全国供销合作总社提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国江苏出入境检验检疫局. 本标准主要起草人: I GH/T XXXXX—XXXX 蜂蜜中丙酮醛含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了蜂蜜中丙酮醛的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中丙酮醛含量的测定。 本标准丙酮醛的检测低限为20 mg/kg。 2 性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 3.1 蜂蜜 honey 蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。 3.2 丙酮醛 methylglyoxal 也可被翻译为甲基乙二醛，是新西兰麦卢卡蜂蜜特有的抗菌活性物质。 4 原理 蜂蜜样品用水溶解后，与邻苯二胺进行衍生化反应，高效液相色谱进行测定，外标法定量。 5 试剂和 除另有规定，所用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T 6682-2008中一级水的规定要求。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲酸:色谱纯。 5.3 丙酮醛标准品:40%水溶液。 5.4 邻苯二胺:分析纯。 5.5 衍生化试剂:称取邻苯二胺(5.4)0.6 g于100 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成6 g/L的邻苯二胺水溶液，用于衍生化反应。 5.6 标准贮备液:精密称取丙酮醛标准品(5.3)100 mg于10 mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，配制成4 g/L的标准储备液。再准确吸取4 g/L的标准储备液100 μL于10 mL容量瓶中，用水稀释并定 1 GH/T XXXXX—XXXX 容至刻度，得40 mg/L的标准储备液。两种浓度的标准储备液均于4?冰箱保存。 5.7 标准工作溶液:临用前吸取适量40 mg/L和4 g/L标准贮备液(5.6)，用水稀释成含丙酮醛2.0 mg/L、4.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、100.0 mg/L六个浓度，现配现用。 5.8 滤膜:有机相0.22 μm。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。 6.2 分析天平:感量分别为0.1 mg和0.01g。 6.3 涡旋仪。 7 样品的取样及预处理 取蜂蜜代表样品200 g，未结晶样品搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖好后，置于不超过60?的水浴中温热，待样品全部溶化后搅匀，迅速冷却至室温，在溶化时需注意防止水分挥发。制备好的试样装入洁净容器内，密封，标明标记。在制样过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化，于0 ? ~ 4 ?保存。 8 试验方法 8.1 供试样品溶液的制备 称取1 g蜂蜜溶于10 mL水中，取1 mL该蜂蜜水溶液与1 mL衍生化试剂(5.5)混匀，在室温、避光条件下进行衍生化反应8 h以上，过0.22 μm滤膜后进样分析。 8.2 色谱条件 色谱柱:Kromasil C, 柱长150mm, 内径4.6mm, 填料粒径5μm; 或性能相当的色谱柱。 18 流动相:乙腈—0.1%甲酸水溶液(3:7, v/v)，等度洗脱; 流速:1.0 mL/min; 柱温:30 ?; 检测波长:318 nm; 进样量:10 µL 8.3 高效液相色谱测定 丙酮醛标准工作溶液(5.7)在高效液相色谱设定条件下分别进样，以丙酮醛衍生化产物的色谱峰面积为纵坐标、工作溶液浓度(µg/mL)为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中丙酮醛衍生化产物的响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，溶剂空白、丙酮醛标准工作溶液、麦卢卡蜂蜜以及基质加标样品的色谱图见附录A图A.1。 8.4 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤(8.1-8.3)进行。 8.5 结果计算 结果按式(1)进行计算: 2 GH/T XXXXX—XXXX CCVf(,)，，ioiX,i………………………………….(1) m 式中: X——试样中丙酮醛的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); i C——由标准曲线计算所得样液中丙酮醛的浓度，单位为微克每毫升(µg/mL); i C——由标准曲线计算所得空白试验中丙酮醛的浓度，单位为微克每毫升(µg/mL); oi V——试样最终定容体积，单位为毫升(mL); f—稀释倍数，本实验方法为20; — m—样品质量，单位为克(g)。 — 9 检测低限、回收率和精密度 9.1 检测低限 本标准检测低限:20 mg/kg 9.2 回收率和相对标准偏差 丙酮醛回收率和相对标准偏差数据见附录B表B.1。 3 GH/T XXXXX—XXXX 附录 A (资料性附录) DAD1 A, Sig=318,4 Ref=off (D:\DATA\MGO\05-16\BLANK1.D)mAU125100溶剂空白 7550250min01234567 DAD1 A, Sig=318,4 Ref=off (D:\DATA\MGO\05-16\STD4.D)mAU丙酮醛 125标准工作溶液 10075 4.90050(10 μg/mL) 250min01234567 DAD1 A, Sig=318,4 Ref=off (D:\DATA\MGO\05-16\HONEY_1.D)mAU丙酮醛 125100麦卢卡蜂蜜 755025 2.2560 2.425min01234567 DAD1 A, Sig=318,4 Ref=off (D:\DATA\MGO\05-16\SP_100_1.D)mAU 2.655丙酮醛 125基质加标 10075(100 mg/kg) 5025 2.2670 2.423min01234567 2.636 图A.1 溶剂空白、丙酮醛标准工作溶液(10 μg/mL)、麦卢卡蜂蜜和基质加标样品(100 mg/kg)的高效 液相色谱图 4.901 4.900 4 GH/T XXXXX—XXXX 附录 B (资料性附录) 表B.1 丙酮醛回收率和相对标准偏差数据(n=5) 加标量 (mg/kg) 本底值 (mg/kg) 50 100 200 1 170.0 209.1 251.4 339.0 2 170.7 210.1 249.1 339.5 3 170.6 211.1 249.7 339.6 4 170.1 211.3 251.1 340.3 5 170.6 211.9 249.9 339.5 170.4 210.7 250.2 339.6 平均值 RSD(%) 0.19 0.52 0.39 0.14 80.6 79.8 84.6 回收率(%) 5