利用SRY基因鉴别梅花鹿茸、新西兰鹿茸和俄罗斯驯鹿鹿茸

利用SRY基因鉴别梅花鹿茸、新西兰鹿茸和俄罗斯驯鹿鹿茸 利用SRY基因鉴别梅花鹿茸、新西兰鹿茸 和俄罗斯驯鹿鹿茸 14specialwildeconomicanimalandplantresearch特产研究 文章编号:100卜4721(2007)01-0014-02 利用SRY基因鉴别梅花鹿茸,新西兰鹿茸 和俄罗斯驯鹿鹿茸 白秀娟,张敏 (1.东北农业大学动物科技学院,黑龙江哈尔滨150030;2.辽宁锦州医学院畜牧兽医 学院,辽宁锦州121001) 摘要:采用分子生物学的鉴定方法,对梅花鹿,新西兰鹿,俄罗斯驯鹿的SRY基因进 行扩增,在相同条件下用特异引物扩增,这 3种鹿都可以扩增出明显的条带且条带数目存在差异,并阴性对照没有出现任何 条带,证明结果真实可靠.采用这种方法可 以有效扼制同源性假冒药材的泛滥,维护消费者的权益. 关键词:SRY基因;鉴别;鹿茸 中图分类号:Q78;$825文献标识码:A UtilizeSRYGenetoDistinguishPiloseAntlerofPlumBlossom, NewZealandPiloseAntlerandRussianReindeer'SPiloseAntler BAIXiu-juan,ZHANGMin2 (1.DepartmentofAnimalScienceNortheastAgriculturalUniversity.HarbinHeilongjiang1 50030,China; 2,InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineofLiaoningMedicalCollege.Jinz hou Liaoning121001,China) Abstract:Adoptingthemolecularbiologicalqualificationmethodinthisresearch,tothesika, Russianreindeer,NewZealandSRYgene ofdeergoonamplifyingwithpeculiartoguidethingsamplifyacationthesethreedeerCanamp lify,itappearsobviousstripandstrip figurestoredifferenceunderthesamecondition.Andthecontrasthasnotpresentedanystripn egatively,itprovesthattheresultistrue andreliable!AdoptingthiskindofmethodCanpreventthehomologyfromimitatingtheoverf lowingofcrudedrugseffectively,safe- guardpeopleSeconomicbenefits. Keywords:SRYGene;Differentiation;Piloseantler 我国是世界上养鹿最早的国家,也是驯养茸鹿 历史最悠久的国家,其中,我国驯养梅花鹿已有300 多年的历史.我国在2000年版《中华人民共和国药 典》规定了梅花鹿茸鹿,马鹿茸为正品药材.可是,近 年来价格低,质量次的新西兰鹿茸(欧洲马鹿)和俄 罗斯驯鹿茸,冒充我国的梅花鹿鹿茸和马鹿茸充斥 市场,尤其是其切片茸等初加工品冒充现象更为严 重,即使在吉林省双阳,辽宁省西丰等梅花鹿主产区 及各大城市的一些名牌参茸经销店也毫不例外,严 重冲击着国内鹿茸市场,阻碍我国养鹿业健康发 展. 这些混淆品和代用品的出现,制约了中医药的 安全有效及其向现代化,化和国际化的发展,其 品种鉴定与质量评价工作越来越棘手.本研究采用 DNA分子遗传标记技术鉴定,通过1对引物可以把 这几种同源性的鹿茸鉴别开,而且不用测序达到既 收搞日期:2006-09一Ol 作者简介:白秀娟(1963一),女,吉林长春人,教授,博士,从事特种经济动物研究. 第l期白秀娟,等:利用SRY基因鉴别梅花鹿茸,新西兰鹿茸和俄罗斯驯鹿鹿茸15 准确,快捷又节省成本,利于推广. 1材料和方法 1.1材料 梅花鹿茸,驯鹿茸,新西兰鹿茸各40个样品,均 由吉林农业大学参茸检测中心提供. 1.2主要试剂和仪器设备 Maker是DNA片段2000bp,1000bp,750bp, 500bp,250bp以及100bp而构成,PCR扩增所用的 Taq酶和dNTP(宝泰克生物技术有限公司).梯度 PCR仪(德国Biometro公司),凝胶成像系统UVP (美国UVP公司);紫外分光光度计ULTROSPEC lOOO(美国PHAMACIA公司);DYY—m33A型水平 电泳槽. 1.3方法 1.3.1鹿茸片总DNA的提取提取前用70%酒 精清洗鹿茸3min,放在37?烘箱中使酒精挥发,称 取300mg鹿茸片样品,加455L1×SET液,加 l0L蛋白酶K(10mg/n)加25LSDS空气浴 (摇床)55?过夜,第2d提取DNA,在4?保存. 1.3.2PCR扩增反应所用上游引物5一TG- GAAGCAAGAACCCC(T一3和下游引物: 5'一GAACTTTCAAG—CAGCTGGC~一3.反应物组 成:扩增总体积25L,含100ng;10×Buffer 25L;dNTP200mol/L;上下游引物各 500mol/I;Taq聚合酶1U.反应循环参数是:94? 10min,94?lmin,53?lmin30s,72?lmin,35个循 环,72?10min.采用0.2mL的微量离心管25L 的总反应体积于PCR仪中进行扩增. 1.3.3电泳及观察分析取10L扩增产物经1% 琼脂糖凝胶电泳,经溴化乙锭染色后在UVP凝胶图 像分析系统上观察和并记录结果. 2结果 鹿茸的分子鉴定结果 从图1可看出引物对这3种鹿茸具有明显的 区分性 图1驯鹿茸(1—3),新西兰鹿茸(4—6). 梅花鹿茸(8-9),7是阴性对照 2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp 3结论与讨论 3.1在相同条件下,对3种鹿茸样品DNA进行扩 增,它们条带之间存在明显差异,而阴性对照没有出 现任何条带,证明结果真实可靠.驯鹿茸(1—3)与梅 花鹿茸(8—9)在250—2000bp,驯鹿茸没有梅花鹿 茸扩增具有的多个条带;梅花鹿茸与新西兰鹿茸最 明显的区别是在100—250bp,梅花鹿茸具有1条明 显的条带,而新西兰鹿茸则没有;3种样品各具有自 己特异的条带数目. 3.2新西兰鹿茸有效成分的含量较中国鹿茸低,其 氨基酸质量分数比梅花鹿茸片中的氨基酸质量分数 要低.打不进韩国市场而又比我国梅花鹿茸和马鹿 茸质次,价低的新西兰赤鹿茸和俄罗斯驯鹿茸,每年 进入我国市场几十吨至上百吨,冒充我国的梅花鹿 茸和马鹿茸,阻碍我国养鹿业的发展.这些冒牌产 品在我国药典中是绝对不允许的,也是我国养鹿界 和医疗保健界所坚决反对的. 3.3鹿产品采用DNA分子遗传标记技术鉴定,取 样量少,避免了样品的损耗,从动物样品上可以直接 取样,不会造成标本整体的破坏,具有独到的优势. 不仅可以准确地鉴别中成药中的微量生药成分,还 可以从种或种以下水平进行近缘种的准确鉴定,不 受组织或药材部位对鉴定的影响,因而对于准确,合 理,安全用药,保护消费者的权益具有重要意义. 3.4本研究采用SRY的特异性引物扩增性别基因, 鉴定近缘鹿品种,只需通过PCR分析条带的差别就 能特异性地鉴别出梅花鹿,驯鹿,新西兰鹿.在高度 严谨的PCR扩增条件下,3种鹿具有明显的条带的 区别,且结果稳定而不须要序列的测定,避免鉴定的 时间长及成本偏高,简便快捷. 参考文献, 【l】白秀娟.肉鸡肥度性状DNA标记研究[D】.东北农业 大学,2000,90—95. 【2】韩盛兰.鹿养殖与鹿产品加工[J】.北京:科学技术文献 出版社,1999,l6_25. 【3】郭金虎,单祥年,常青,余多慰,武景阳.赤麂SRY基因 的测序及其与部分偶蹄目动物SRY基因序列的比较 【J】.动物,2001,(2):145—149.