直接法测还原性糖

直接法测还原性糖 一: 直接法测雪碧还原性糖的含量 原理:以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(用还 原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液)，根据样品液消耗体积计算还原糖量 试剂:a:碱性酒石酸铜甲液:称取4.2 g硫酸铜(cuSO。?5H。0)249.68g/mol，溶于水中并稀释至500ml b:碱性酒石酸铜乙液:称取12.5 g酒石酸钾钠、18.8 g氢氧化钠，溶于水中，再加入1g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500 mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内 c:葡萄糖标准溶液:准确称取0.2-0.3 g(m表示)经过96?士2?干燥2 h的纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至250 mI. D:雪碧 E:甲基橙指示剂 仪器:10ml的移液管两根，25ml的移液管，玻璃球两个，水浴池和平时实验所需的仪器 步骤:1:试样置于烧杯中且用表面皿盖上，水浴除去二氧化碳后，移取100ml的待测液转入250 ml容量瓶中，并用水洗涤仪器，洗液并人容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用。 2:标定碱性酒石酸铜:A:吸取10(OmI。碱性 酒石酸铜甲液及10(0mI_，乙液，置于150m1(加入甲基蓝几滴，锥形瓶中。加入玻璃珠2粒，控制在2 rain内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加标准溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积V1。B:吸取10(OmI。碱性酒石酸铜甲液及10(0mI_，乙液，置于150m1(加入甲基蓝几滴和(V1-1)ml左右的标准溶液，锥形瓶中。加入玻璃珠2粒，控制在2 rain内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加标准溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积V2.平行实验三次 3:测还原性糖:A:吸取10(OmI。碱性酒石酸铜甲液及10(0mI_，乙液，置于150m1(加入甲基蓝几滴，锥形瓶中。加入玻璃珠2粒，控制在2 rain内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加待测溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积V3。B:吸取10(OmI。碱性酒石酸铜甲液及10(0mI乙液，置于150m1(加入甲基蓝几滴，锥形瓶中和加入(V3-1)ml左右的待测溶液。加入玻璃珠2粒，控制在2 rain内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加待测溶液，并保持溶液沸腾状态， 待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积V4.平行实验三次 计算还原性糖的公式: m/(180*250/1000)*v3/v4=____mol/l 讨论与说明: ? 醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂这两种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来。 ? 此法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量。 ? 本法是根据一定量的碱性酒石酸铜溶液( 量一定)消耗的样液来计算样液中还原糖含量，反应体系中 的含量是定量的基础，所以在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入 ，得到错误的结果。 ? 次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比 弱，故还原糖先与 反应， 完全反应后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。 ? 为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下: Cu2O +K4Fe(CN)+H2O,K2Cu2Fe(CN)6+2KOH ? 碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。 ?滴定必须在沸腾条件下进行:原因:一是可以加快还原糖与的反应速度;二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。 ? 滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防空气进入反应液。 ?样品溶液预测的目的:一是本法对样品溶液中还原糖浓度有一定要求(0.1%左右)，测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在10ml左右;二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1ml左右的样液，只留下1mL左右样液在续滴定时加入，以保证在1分钟内完成续滴定工作，提高测定的准确度。 ?影响测定结果的主要操作因素是反应液碱度、热源强度、煮沸时间和滴定速度。