载脂蛋白B基因的多态性及其意义

载脂蛋白B基因的多态性及其意义 度脂蛋 白,中间密度脂蛋自,低密度脂蛋白和脂蛋白(a)的构成成分. 在脂类的转运和代谢过程中起着极其重要的作用.ApoB基固 长达43kb,音有多个内音子和外显子.研宽表明,ApoB基固具 有丰富的多态性,它们的频率分布具种族特异性,与脂粪的代 谢及血脂水平关系密切,广泛地应用于疾病和家庭的研究,在 法医学上用干个体识别和亲子鉴定等. 1ApoB基因的结构 ApoB基因位于人类弟2号染色体短臂的23,24区,空长 43kb,合有28个由台子与29叶,外显子,与其它栽脂蛋白基因 的结构相比较,具有显着性差异,其基目结构具有极其丰富的 多态性. 2 .B基因的功能 Apol3基固表选的产物为ApoB100和APoB48,它们1分别在 肝脏和小肠粘膜上皮细胞中台成,Apo8100由4530个氧基酸 残基组成,而后者包合2152个氯基酸残基.ApoB100为极低 密度魔蛋白,低密度庸蛋白曲蛋白成分,二者的功能分剐为转 运内性甘油三脂和胆固醇及转运内薄性胆固醇;ApoB48为 乳糜擞粒的构成成舟,后者的功能为转运外源性甘油三脂和胆 固醇,目此ApoB基田表达产物在体内脂粪运输和代谢中起着 极其重要的作用,当其基目结构异常或表达各环节出现障碍 时,可致体内庸粪运输和代谢障碍,引起相应的脂粪代谢紊乱 的发生. 3AlB基因的多态性及其意义 如前所述,ApoB基固结构复杂,其多态性类型有限制性片 段长度多态性(resmcd~:[:ragment】orpotyn’,orphia’n,RFLP),信 号志编码lr~IDet多态性,数目可变的串联重复序列(vailabte nrumd~nrepels,啪),单链构象多态性(single.strand ?咖(舭dp.】m岬hi,s9cP)和擞卫星(mi~tellite)多态 性等. 3.1限制性片段长度多态性(RFLP)用适当的引物扩增 ApoP,基园片段,作相应酶切可得到相应的限制性酶切片段,这 类多态性包括xbaI酶切多态性,EcoRI酶切多志性和MspI 酶切多志性等,它们正广泛用于脂类代谢及相关疾病的研究. 311XbaI酶切位点多态性XbaI酶切位点位于ApoB基 因的第26外显于上,用聚台酶链反应/限制性酶切浩(py. rrrasechainreaction/restrictiveelazyme,PcR/RE)结合电永技术进 行.扩增产物经限制性内切酶XbaI酶切后.在电泳图谱 上出现(433bp及277bp)两个片段则为XbaI酶切位点(X)的 等位基因,如电竦后仅产生1条(710bp)区带者为XbaI酶切 位点(X)的等位基因;这种多态性的相应频率分布因种族差 异或疾忠而不同.谜位点RFLP系d)NA序列上第7673位的 c—T,使第2488位密码子由ACC~ACr所袭.Ap.B基目Xba I位点的限制性片段长度多态性分布具有种族差异….与某些 疾患的易蹲性相关,影响着血脂的水平;在人群中x等位基 因占绝对优势.等12]研究表明,X/X基因型血清吼 c水明显低于x/x基固型者,x等位基目与I-~L-C呈负 相关.吴淑群等研究表明,X等位基固与小儿单纯性肥胖 症的发生有一定的关联.有关XbaI位点多态性分布与冠心 病,心肌梗死的关联目前许多研究结果不尽相同;Bohn等Hl报 道,X一/X基因型和x一等位基因不通过影响血庸水平而增加 冠心病,心肌梗死的舅感性.Regis-Bail]y荨【及文献…报道, XbaI位点多态性与冠心病的易感性并无关联. 3.1.2EcoRI和Ml印I酶切位点的多态性EcoRI酶切位点 位于ApoB基固的第29外显子,由于4154位密码子的第1个碱 基G—A突变,使GAA~AAA,原有的EcoRI酶切位点消失,产 生E一等位基固,如不发生突变则为E’等位基目,在人群中以 E等位基因占绝大多数J;等”l研究表明.E等位基固与 血浆qU-,LDLC水平升高相关,设个体冠心病的危险性增高, 与文献…报道不一致.ApoB基固MspI酶切位点多态性,国内 外也作了一些报道,以M等位基固占绝对优势,它与血脂水 平和脂粪代谢疾患的关联不明显…. 3.2信号态编码区(I璐/j)多态性ApDB的信号态序列由两 种等位基因编码,编码27个氟基酸残基的等位基目为hu等位 基固,另一种为编码24个氡基酸残基的等位基固称为De]等 位基园,从而构成了Ap出基固k~/Dd多态性.在群体中,载 脂蛋白B信号肽序列以hu等位基目为优势,而De]等位基目 相对少见.0帕gML等-日报道Del等位基目与血浆高亿,高 LDLC浓度和Ap.B水平相关联.Wu等【】研究显示De]位基 固与心血管疾患的病理学相关,而Y等?研究表明Del等位 基固的相对频率与心脏病的发生无关联.另外,B.hn等【1.报 道的Ba基固信号态L.~/Del多态性与心肌梗死的发生无关. 3.3Ap0B基目VNI’R多态性VNTR位于Ap0B基目3末端下 游约500bp内,也称为高变区【hypemabIeregl?,HV’R)或小卫 星(minisatellite),由l4,16bp长.富含AT二棱苷酸的重复序列 串联而成,这些串联重复序列祷贝数目的不同构成VNTR等位 基目的高度多态性,目前发现VNIR的等位基因有18种,以包 含的枝心部分串联重复序列的拷贝鼓命名为25,26.29,3l,33, 35,37,39,4l,43,45,47,49,51,53,55,58,60,相对颊率分布存在 着种旅差异,是艰有用的遗传标志位点.习惯上把串联重复序 列的祷贝数>39者简称为3VNIR.B,而<39者简称为3VN. TR.S.VNTR是很有用的研究工具,不论是构建高分辨率的遗 传图谱,还是对于犯罪的鉴定,亲子的验证,人群遗传学研究或 某些疾患发病等方面的研究都得到了广泛的应用. 1989年,Boer~-inkle等…对AVoB基固3高变区多态性进 行快速分型.并认为它是第2号染色体上很有用的遗传学标 记,用于AVoB基目相关的临床和病理学研究.Schneider等 研究表明它在法医学上可作为亲子鉴定和个体识别的有用工 显.Ye等lI】研究表明3VNFR.B与血浆高水平的TC,LDL-C 和低水平的F/3L-C相关联.在双旅人群中3VNIR.B的个体冠 心病的发病率明显高于对照组.DeBenedicfis等【j研宽表明, ApoB基固的VNTR与长寿有关;a州等陋】报道,Ap.B基固的 3VNFR与其E等位基因存在着连销不平衡. 3.4Apol3基固擞卫星(cr.u.ce)多态性舢B基目的擞 卫星位于第20内含子内的一个中度重复序列的3端,为四枝 苷酸(11TA)串联重复序列.Hm喑等(Is]报道了这一位点的多 态性,其遗传特台孟德尔遗传规律和卜w卣nb平衡.具 旦堑匡堂l喳垂垒鲎芏生缝塑堂壁塑鲤l主差篁鲞蔓塑 有薷旅特异睦,斟二究发现在兰,询,兔等动物中不存在这一位点 多冬性可能在法医学上具有一定曲价值,与脂娄代谢疫病的 差系需一担索 另外.报道了”f基第20内舍子和第26外显子 寰变致单链构泉多瑟性(&’SCP)的发生 参考文献 1WickU.WittE.EngelWResxnc~ion6m1entlengthpo’vn~r— phbra.~aItheapelipoproreingenesAIClI1andB一1)andinthe 5fl~&ingregionoltheir~lingenes~ih{er0gtrkeofcoro narybeandise,~e[JainOenet.1995.47:184,190. 2SaD/tN.TayJ.-3q./-/~nphties:Mwolipapror~inBgene !m1.,,mceplu~ns(XMIandEc.RI).8elxi~lipids,and apeli~eiminbealtkvCl-.inese[J]GenetEpMoniol,1992,9 (1):1,5 3吴淑群陈能.曾华社,等载脂蛋白B基固aI多志性 与单纯肥胖症关系的斫究[J].中儿科杂志,1998,26(9): 558,559. 4B.hnM.BergKTheXbaIpelyn’,orpbimamtheapofi~ein B?driskdathem~cleroticd*a[J]ClinGene[,1994,46:77 , 79. 5RngisB&【【yA.V~svikisSstdnmetzJ,etalFrequenciesoffive geneticandeliec似olllipidl~’elsinasuppcosed[yheatlbYpopula 6on[J]C[in(~net1996.50:339,347. 6CJhceng?SethiKoay磷EbofinlrngenJcvariability’ at3pol~rnorghcsite~.ftheapolipopmteinBgeneon8erllnllipi出 andlipoprcteiminamul6edmicAsianpopadon[J].I{InBiel, 1999,71(3):381,397. 7YeP,ChenB.WangSA~)clafionofpelymo~phismsofthe apolip~roreilIl{generh?aheartdiseaseinHanChinese [j]【eH1995,117(1):43--50. 8(哪呲嘲.晒ES.Kin州MC.eta【ApeliIx~OmteinB5-I DelAn3,M’NYRVofyrcom~inC~rtinese,MalayandIndian Singar~areaam[J]H?Hered,1999.49(1):31,4O. 9wuJH.ChumMS,Lo.eta1Apelipopmtein83’h14~er,’ari— ablereapeatgenol~npe:a~sociatimwithp[a_wna【ipidconcentratic~ cIyarterydisease.andc~herrestrictic*q卿p.l州 ps他【J]ClinChern,1996.42(1):927--932. 10BohnM.I~dt.keFIAEftkddenJeta【eapelipopm~einBt naIpeptideinn.n/Dde6oftEl”T1?孤isnota蟠ocia口0nwIth m~bcardia【infarctioninNoo~y[J]CIinG~tet.19445:,』5, 259. 11Boe~qnldeE1Xic~gW,Fc~restEa】RapidtypingDj tmdernlyrepeated16’~ervadablelocibyp嗍chainmfeac— nl?1applicafim幻theapolitxg~:XeinB3.b.wervadableregion [J]PineNAcadSciUsA1989.86:212—216. 12SchneiderFIR.RandSresolutimvemcal娅:analter— nativeelecm~phoretic廿nwithmultipleforensicapplications[JJ IraJL印IMed,1996,108(5):276,279. 13KP(3~enBWangS,Theas?aan?dp0lmiata VNTRlo=us3?theapofipopmteinBgenethc~*otmrybean dise&seinChme~popelatic~[J]ainMedScjJ,1995,10(2) 63,69 14DeBenedictisG.FaiconeE,RoseG.el-aIDmuhiatlelicspa- “r唧Igene/】c~gevi上挂第5酉)硷删单细胞DNA损伤有独特优势.但仍有特 完善之赴如完善和标准化?3E曲实验操作,述一步鳗出丰 系统砖各孝毒物产生可检测反应的极限量如能发展出适干 光学显衢镜分析曲SCGE特使请法推广更为有利. 参考文献 lnghNP.IvlcCoyMr,ceRR.e【alAp【e”teebniquefor qmeeci~giond[e~elsd【)?damagenindividua/cell?[J] ExpCel【Res.1988,175:184,191 2Slng~NP,”13ceRR.p}1el0Nl也.eca1Amicrobe]dec nD时?.&st~quuqueforthedirectquantit~ttlonoffMdarrm~e andrepa1rinindiduaIbr0blL心eulnLT.edonrnicm6c0peslid鹤 【j]MLnmRes1991.252:2田,296 3HartnorvcherMpKane咖,MdesKW,dalLevelsof penpheralblmdcelIr&roag~inir~ulindepet~-ntdjabetes mellimshmaansubject[J]MuratRes.圳,460(1):53-60. 4圈dma~erN}l_WlnerBC,Kaster~batler隙.dComparing thegenotoracsensicivife~ofhtroanperipheralb]mdlpaaphocpaes andnc0阳cellsoftheupperaerodigestive?accusingtheCxl-net asy[J]Mtn?atRes2?467(I,:21--30 5Everett,ireSchorahq,eta】Invim?d ingastricepithelia】cells[J].Vh~atRes.20o0468(1):73,85 6Easth~nKvl,N~trplesB.Kihie肛.et.Fibrobla~tm&osensi fivityrure【】t~;ngthe~’ort~lD&roageassaycorrelatesth ck~vngenicispnd?虹with K~;alcellcmcinomahavemorerepair.mediatedDNAmz.ad-tmeaks afterUvcd种卿inIympl-~-yrespscmasisp~tierms栅 baeeUcarc]ncrrm[J]CancerLett,2?0,151(2):187,l92 91’J,lx~ftSand~xKsen}珏二.Eruncedber1?e—induced darn啦inRm.st~nu]atedin廿DandinLPStroutedans[JJ FreeRadieBidMeal,1999,26(78):801,8(I8 10K~penGToneelliTfiL,etai1kcornetassay;atool tostudyalterationDNAinte~indevelopingplantleaves[.1] MechAgeingD.1999110(12):13,24 11K~’,,arnatsuKohdaK.KnwameYC_x,mpa~oncfchemicallyin- ducedDNAbreakageincdulandsu~ellularusing cometassay[J].mtRes,1996,369:1,6. 12V~hePnHNygrenP,&Uj喀C,etalAlkalinee—cellgel eleetmpho~sandhtre.anbjomc~imringfor~ity:apilc~ saudyon~east锄c盯patiemaunder~ngdm吐Tinduding cyelop~phamide[J].[v[tl~tRes,1995.396:127,138. 13PitargueM,V~enovAM,alEvaluntion0fDNA d【H髀bytheccn1etassayinshoe耻efs曲?.dtoto/脚 odaerO~licsdvents[J]?IRes.1999,441:115--128. 14ceME,MckeIvey-MardnVJ,Rol:e~T.alI/idlI~olrland oining0fIdouble.breaksmbladdercells[J] Radi[标签:快照]