猪人工受精技术标准

猪人工受精技术标准 猪人工授精技术--农业行业标准 前 言 种公猪在后裔遗传中占有50%的影响力，优良公猪的充分利用，将带来可观的经济效益，人工授精可大大提高公猪的利用率，减少公猪饲养量。此外，人工授精技术还在减少疾病传播、优良基因的迅速扩散、提高母猪受胎率等方面存在积极意义。 我国早在1950—1960年间就开始使用人工授精技术，但由于当时设备相对落后，未能在养猪业中获得理想的推广。自进入1990年以后，由于技术、设备的更新，该项技术得到迅速的普及，但由于缺乏一定的规范，养猪生产者使用效果不一。为进一步提高我国猪遗传进程，借鉴国外经验，特制订技术规程。 本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由中华人民共和国农业部归口。 本标准起草单位:全国畜牧兽医总站 农业部种猪质量监督检验测试中心(广州) 本标准主要起草人:刘海良、吴秋豪、张守全、张国杭、刘小红、张代坚 中华人民共和国农业行业标准 猪人工授精技术规程 REGULATION FOR SWINE ARTIFICIAL INSEMINATION TECHIQUES ——————————————————————————————————————— 1 1 范围 本标准规定采精、精液品质检查、精液的稀释、分装、贮存与运输、输精等人工授精技术环节，适用于猪的人工授精操作。 2 采精 2.1 公猪调教 2.1.1 调教年龄 后备公猪7-8月龄可开始调教，有配种经验的公猪也可进行采精调教。 2.1.2 调教 将成年公猪的精液、包皮部分泌物或发情母猪尿液涂在假台猪后部，将公猪引至假台猪训练其爬跨，每天可调教1次，但每次调教时间最好不超过15min。 2.2 采精方法 2.2.1 采精前准备 采精公猪的准备:剪去公猪包皮的长毛，将公猪体赃物冲洗干净并擦干体表水渍。 采精器件的准备:集精器置于38?的恒温箱中备用。当公猪引至采精室后，迅速取出集精器，另外应准备好采精时清洁公猪包皮内污物的纸巾或消毒清洁的干纱布等。 配置精液稀释液:配置好所需量的稀释液，置于在水浴锅中预热至35?。 精液质检设备的准备:调节好质检用的显微镜，开启显微镜载物台上恒温板以及预热精子密度测定仪。 精液分装器件的准备:准备好精液分装器、精液瓶或袋等。 2.2.2 采精程序 采精员一手带双层手套，另一手持37?保温杯(内装1次性食品袋)用于收集精液，用0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。 采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮，刺激其爬跨假台猪，待公猪爬跨假台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，用手(大拇指与龟头相反方向)紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转。待公猪射精时用四层纱布过滤收集浓份或全份精液于保温杯内的一次性食品袋内，最初射出的少量(5mL左右)精请不接取，直到公猪射精完毕，一般射精过程历时5—7min。 集精杯位置应高于包皮部，可防止包皮部液体流入集精杯内。 2.3 采精频率 采精频率以单位时间内获得最多的有效精子数来决定，做到定时、定点、定人。成年公猪每周采精不超过2次，青年公猪每周1次。 2 3 精液品质检查 3.1 采精量 采集精液后称重，按每克1mL计，避免以量筒等测量精液体积。 3.2 颜色 正常的精液是乳白色或浅灰色，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色、黄色、浅红色、红褐色等异常颜色的精液应废弃。 3.3 气味 猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃。 3.4 pH值(酸碱度) 以pH计或pH试纸测量，正常范围7.0,7.8。 3.5 精子活力检查 精子活力是指呈直线运动的精子所占百分率，在显微镜下观察，一般按0.1,1.0的十级评分法估计，鲜精活力要求不低于0.7，检查活力时要求载玻片和盖玻片都应37?预热。 3.6 精子密度 指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要标准。要求用血细胞计数板计数或精液密度仪测定。血细胞计数方法:1)以微量加样器取具有代表性原精液 200μL，用3%NaCl稀释10倍;2)在血细胞计数板上放一盖玻片，取1滴稀释液后精液置于计数板的槽中，靠虹吸将精液吸入计数室内;3)在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数，将该数乘以50万，即得原精液每毫升的精子数(即精液密度)。 3.7 精子畸形率 畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过18%，其测定可用普通显微镜，但需伊红或姬姆萨染色，相差显微镜可直接观察活精子的畸形率，公猪使用过频或高温环境会出现精子尾部带有原生质滴的畸形精子。畸形精子种类很多，如:巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或尾部分离、尾部变曲。要求每头公猪每两周检查一次精子畸形率。 3.8 填写公猪精液品质检查(见附录A) ? 考虑因素:哪些猪允许采精，应有哪些规定，精液产品，人工授精操作人员是否采用资格证书? 4 精液稀释、分装、贮存和运输 3 4.1 稀释液 4.1.1 稀释液按稀释液配方(见附录B)，用称量纸、电子天平准确称量药品。 4.1.2 按1 000mL、2 000mL剂量称量稀释粉，置于密封袋中。 4.1.3 使用前1h将称量好的稀释粉溶液于定量的双蒸水中，可用磁力搅拌器助其溶解。 4.1.4 用0.1N稀盐酸或0.1N氢氧化钠调整稀释液的pH值为7.2(6.8- 7.4)左右，稀释液配好应及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人等。 4.1.5 稀释液冰箱4?保存，不超过24h。 4.2 精液稀释 4.2.1 精液采集后应尽快稀释，原精贮存不超过30min。 4.2.2 未经品质检查或检查不合格(活力0.7以下)的精液不能稀释。 4.2.3 稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1?，即稀释液应加热至33?,37?，以精液温度为标准，来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。 4.2.4 稀释时，将稀释液沿盛精液的杯(瓶)壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。 4.2.5 如作高倍稀释时，应先作低倍稀释(1:1-2)，待半分钟后再将余下的稀释液沿壁缓缓加入。 4.2.6 稀释倍数的确定:要求每个输精剂量含有效精子数30亿以上，输精量为80,100mL确定稀释倍数。 4.2.7 稀释后要求静置片刻再作精子活力检查，如果稀释前后活力无太大变化，即可进行分装与保存;如果活力显著下降，不要使用。 4.2.8 混合精液:新鲜精液首先按1:1稀释，根据精子密度和混合精液的量记录需加入稀释液的量，将部分稀释后精液放入水浴锅保温，混合2头以上公猪精液置于容器，加入剩余部分稀释液(要求与精液等温)，混合后再进行分装。 4.3 精液分装 4.3.1 调好精液分装机，以每80,100mL为单位，将精液分装至精液瓶或袋。 4.3.2 在瓶或袋上标明公猪品种、耳号、生产日期、保存有效期、稀释液名称和生产单位等。 4.4 精液贮存 4 4.4.1 精液置于室温(25?)1,2h后，放入17?恒温箱贮存，也可将精液瓶或毛巾包严直接放入17?恒温箱内。 4.4.2 短效稀释液可保存3天、中效稀释液可保存4~6天、常效稀释液可保存7~9天，无论何种稀释液保存精液，应尽快用完。 4.4.3 每隔12 h轻轻翻动一次，防止精子沉淀而引起死亡。 4.5 精液运输 精液运输应置于保温较好的装置内，保持在16?,18?，精子运输过程中避免强烈震动。 5 输精 5.1 输精的时间 发情母猪出现静立反射后8~12h进行第一次输精，之后每间隔8~12h进行第2或第3次输精。 5.2 精液检查 从17?恒温箱中取出精液，轻轻摇匀，用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片，置于37?的恒温箱上片刻，用显微镜检查活力，精液活力?0.7，方可使用。 5.3 输精管 用灭菌后输精管进行输精。 5.4 输精程序 5.4.1 输精人员消毒清洁双手。 5.4.2 清洁母猪外阴、尾根及臀部周围，再用温水浸湿毛巾，擦干外阴部。 5.4.3 从密封袋中取出灭菌后的输精管，手不应接触输精管前2/3部分，在其前端涂上润滑液。 5.4.4 将输精管45度角向上插入母猪生殖道内，当感觉有阻力时，缓慢逆时针旋转同时前后移动，直到感觉输精管前端被锁定(轻轻回拉不动)，并且确认被子宫颈锁定。 5.4.5 从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号。 5.4.6 缓慢颠倒摇匀精液，用剪刀剪去瓶(管)嘴(或撕开袋口)，接到输精管上，轻轻压确保精液能够流出输精瓶(管、袋)。 5 5.4.7 控制输精瓶(管、袋)的高低(或进入空气的量)来调节输精时间，输精时间要求3~10min。 5.4.8 当输精瓶(管、袋)内精液排空后，放低输精瓶(管、袋)约15秒，观察精液是否回流到输精瓶，若有倒流，再将其输入。 5.4.9 在防止空气进入母猪生殖道的情况下，把输精瓶(管、袋)后端一小段折起，放在输精瓶(管、袋)中，使其滞留在生殖道内5min以上，让输精管慢慢滑落。 5.4.10 登记输精记录表(见附录C) 附录A 种公猪精液品质检查登记表 总 firstrow: 精子稀释 公采采精畸形精稀释头检yes"> 色气PH 活密度后总备 猪精量 精子子液量 份验采精日泽 味 值 率 亿 量 注 号 员 mL 率 % 数 mL 数 员 期 /ml mL 亿 lastrow: yes"> 附录 B 常见几种公猪精液稀释液配方 单位:克 6 成份 配方一 配方二 配方三 配方四 保存时间(天) 3 3 3 3 D- 葡萄糖 37.15 60.00 11.50 11.50 柠檬酸三钠 6.00 3.70 11.65 11.65 EDTA 钠盐 1.25 3.70 2.35 2.35 碳酸氢钠 1.25 1.20 1.75 1.75 氯化钾 0.75 / / 0.75 青霉素钠 0.60 50 万单位 0.60 / 硫酸链霉素 1.00 0.50 1.00 0.50 聚乙烯醇 ( PVP ， / / 1.00 1.00 Typell ) 三羧甲基氨基甲 / / 5.50 5.50 烷( Tris ) 柠檬酸 / / 4.10 4.10 半胱胺酸 / / 0.07 0.07 海藻糖 / / / 1.00 林肯霉素 / / / 1.00 附录 C 母猪输精记录表 号 胎次发情 第 1 次输精 第 2 次输精 第 3 次输精 预产输精 7 日期 输期 员 公猪精站立精液公猪输精站立精液公猪输精站立精液 耳号 时 反应 倒流 耳号 时间 反应 倒流 耳号 时间 反应 倒流 间 编 制 说 明 随着养猪业的发展，科技水平的提高，养猪业逐步进入微利时代，如何在养猪生产中降低成本、加快猪遗传改良进展，成为当今养猪生产的前言课题。 猪人工受精技术最早于 1950 — 1960 年代在我国广泛开展，但由于当时设备落后、技术水平较低，导致受胎率、产仔性能、疾病控制等均受到较大影响，未能在规模养猪生产中应用。自进入 1995 年以后，国外猪人工授精技术、设备相继进入我国，各大规模化养猪逐步开展人工授精，取得满意效果，人工授精技术得到迅速普及，大、中、小养殖户都使用该项技术，以减少公猪饲养成本。目前，在规模化养猪较发达地区，各大型种猪场纯种猪群中 90% 采用人工受精，商品猪生产也达到 60%~70% 。 自从 BLUP 理论问世以来，各国均纷纷将该理论用于区域性甚至全国性遗传评估，大大提高了选种的准确性。但由于缺乏场间遗传交流，该理论的使存在很大的局限性。人工授精技术的广泛使用，使场间可通过种猪精液进行遗传交流，为区域性或全国性联合育种奠定坚实基础。 目前在国外发达国家如美国、丹麦、瑞典、法国等地，均在养猪生产大规模使用人工授精技术。 但在我国尚无该项技术的操作规程，在一定程度上限制了该技术的推广与使用效果，阻碍了我国猪品种改良进程，农业部提出制定人工授精技术规程是十分必要和及时的。 8 根据农业部下达的“猪人工授精技术规程”任务书的规定，本规定的制定由全国畜牧兽医总站畜禽管理处作为项目的主要承担单位，组织起草规程及日常工作，农业部种猪质量监 广州)、华南农业大学动物科学院、东莞食品进出口公司塘厦猪场为协作单督检验测试中心( 位，负责标准的技术审查、复核。 在本规程的制定过程中，根据 GB/T1 、 GB/T1.3 的规定，与承担其他养猪技术标准的制定单进行的研讨。在规程详细阐述了猪精液、精液品质检查、精液的稀释、分装、贮存与运输、输精等人工授精技术环节，使用于猪的人工授精操作。 此外，本规程所规定的各项技术参数，参考了美国 GSI 、 IBS 等国际精液供应公司及丹麦猪人工授精技术规程的相关指标，经过在项目试点单位反复试验，证明本规程所阐述的操作过程是切实可行的。 9