螺旋藻中藻胆蛋白和多糖的分离纯化及产品特性
10 精 细 化 工 啪 CHEMICALS 1999年 总第 16卷
Effect of Inorganic Electrolyte on Interaction between
Dye and Nonionic Surfactant
HUANG Hui,GAO Yu~ying 肿 Yah
( College,Pdmng ,& 100871.CA/~ )
Abstract:The effect ofinorganic electrolytes with sa ng—in and 8al “g—out no...
10 精 细 化 工 啪 CHEMICALS 1999年 总第 16卷
Effect of Inorganic Electrolyte on Interaction between
Dye and Nonionic Surfactant
HUANG Hui,GAO Yu~ying 肿 Yah
( College,Pdmng ,& 100871.CA/~ )
Abstract:The effect ofinorganic electrolytes with sa ng—in and 8al “g—out noniomc surfactam TX一100(N~SO4 and
KSCN)on the interaction between negative ion dye(ECAB)and TX一100 waB investigated. e binding coristant K of
dyewi thTX一 100micellesan d CMC ofthree systems籼 obtained.ForECAB +TX一 100.ECAB +TX一 100+N~SO4
and ECAB+TX —IOO+KSCN systems,K and CMC were 2550,7532.2400din~-mol— and 2. 5× 10~ .1.87× 10一 ,
1.83×10一mol·drn~ respectivdy.The results qualimfivdy interpreted
Key words:dye;elec~olyte;nonionic 8u出 ctarIt
Pap盯 No:1003—5214(1999)02一OOO7 10
f口/
螺旋藻中藻胆蛋白和多糖的分离纯化
及
/
产品特性’ &7 叫
’
北 l ooo~
删
)
鼢 R b —一 ——磊 曩学化学工程系.北京 f f,
摘要:提出一种从螺旋藻中提取纯化藻蓝蛋白和糖蛋白的新型分离工艺。等电聚焦分析结果表
明所得到的藻蓝蛋白为电泳纯 .等电点为 4.3,测定 了藻蓝蛋 白的氨基 酸组成及其红外 吸收光
谱。SDS—PAGE分析结果表明所得到的糖蛋白组成均一,其分子量为 130kd。测定了螺旋藻糖蛋
白的氨基酸组成,红外光谱分析表明螺旋藻糖蛋白舍有 型糖苷连接键。
关键词:璺 媾;兰 堕 ;螺旋莽撞嚣旦;特性
中围分类号:R977.6;0658.9 文献标识码 :A
螺旋藻是一种丝状多细胞螺旋形藻类生物,它
含有丰富的蛋白质 、脂肪 、维生素、矿物质、叶绿素、
口瑚 萝 素及多糖类物厉 。藻蓝蛋白和螺旋藻多
糖是螺旋藻中的重要活性物质,临床研究结果表明
螺旋藻中的藻蓝蛋白具有提高人体免疫力,促进动
物血细胞再生.抑制癌细胞的作用 ;螺旋藻多糖则
具有抗氧化、抗疲劳,防护植物细胞的辐射遗传损伤
的作用 。作为一种新的药物资源,螺旋藻中生物
活性组分的分离纯化及其特性研究受到各国政府和
科学界的重视,其中藻蓝蛋白和多糖是 目前开发螺
基金项 日:国家 九五”攻关资助项 目(96c一03—04—05)
南,
文章编号 :1003—5214(17~9)o2一EOIO一13
旋藻药物的重点研究课题。
现有的关于从螺旋藻中分离纯化藻蓝蛋白或多
糖的工艺通常是针对单一产品的.无法同时获取多
糖和蛋白,造成了原材料的浪费。此外,在制备螺旋
藻多糖时所采用的水溶液加热抽提、Sevag溶剂萃取
去除蛋白等方法 .操作繁琐.易导致生物多糖结
构的缺损。为此,作者发展了一种新的分离工艺。从
螺旋藻中同时分离纯化得到藻胆蛋白及螺旋藻糖蛋
白,并对藻蓝蛋白和螺旋藻糖蛋白的理化特性进行
了研究。
维普资讯 http://www.cqvip.com
第 2期 殷钢,等:螺旋藻中藻胆蛋白和多糖的分离纯化及产品特性
1 活性物质的提取
1.1 材料
选取产于我国海南三亚的人工养殖钝顶螺旋藻
进行藻蓝蛋白和螺旋藻多糖的分离纯化,Sephaeryl S
一 1001200、sephad&G一20O等凝胶介质为 Phatrmeia
Biotech产品,标准分子量和等电点蛋白质购自Sigma
公司,其余试剂均为国产分析纯。
1.2 分离工艺
为了保持蛋白的活性,实验中先在常温下提取
蛋白质,然后再提高温度提取多糖,并采用泡沫分离
技术来取代 Sevag溶剂萃取以去除多糖溶液中的蛋
白质。螺旋藻中藻胆蛋白和多糖分离工艺如图 1所
示。
图 l 螺旋藻活性组分分离纯化工艺
螺旋藻粗粉先经细胞破碎.用水溶液多级抽提
蛋白质,上清液经冻干后即为藻胆蛋白粗品。在蛋
白的精制过程中,通过调节硫酸铵的饱和度来沉淀
藻胆蛋白,可去除大量核酸组分及其他杂质 ;然后经
pllacryl S一20O凝胶过滤,使蛋白混合物得到进一
步分离。收集富含藻胆蛋白的组分.采用羟基磷灰
石柱层析,通过磷酸盐溶液梯度洗脱可获得藻蓝蛋
白与别藻蓝蛋白。
经蛋白抽提后,在残渣中加人蒸馏水,8O℃水浴
下加热3—4h。弃去不溶物,采用清华大学化工系
发展的环流泡沫分离技术可从上清液中分离去除大
部分蛋白质。与 Sevag溶剂萃取过程相比较,这是
一 种处理量大、效率高、简单易行且条件温和的分离
方法 j。经过以上步骤,多糖已提取到水溶液中,且
多糖溶液中的蛋白质得到有效分离。多糖溶液经真
空浓缩、冰冻干燥后即可得到螺旋藻粗多糖。采用
SephacrylS一100和 Se G一200凝胶层析来进
一 步纯化螺旋藻粗多糖,收集主要多糖组分,冰冻干
燥后得到一种尚未见报道的螺旋藻糖蛋白。
2 特性研究
2.1 藻蓝蟹白
藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白具有各自特殊的光谱性
质,一般用此特征来进行鉴别 分别测量分离纯化
得到的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的紫外可见吸收光
谱,藻蓝蛋白在 278、360和 620rim处有特征吸收蜂,
别藻蓝蛋白在 278、350、650 nfn处有最大吸收峰,均
与文献报道一致 。
白产品
采用瑞典 Pharmaeia Bioteeh AB制造 的 PhasI
System"电泳设备对藻蓝蛋白进行等电聚焦实验,所
选择的 梯度为3-9。结果(图2)表明本实验获得的
藻蓝蛋白为单一纯,藻蓝蛋白的等电点为4.3。
藻蓝蛋白_+
f p q )
图 2 等电聚焦图谱
盛撬
bI=3 50
1JI=4.55
pJ=5 20
=5.85
pi=6.55
pI=7 35
1JI#8.15
pJ=8.45
pJ=8 65
分析由上述纯化过程所获得的藻蓝蛋白的氨基
酸组成和含量,样品按常规处理,用 日立 853—50型
氨基酸自动分析仪测定。结果如表 1所示。
表 1 藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量,%
氨基酸 Taa 甲^ s叮 Gla Cdy 』^a 印
古量 12.8 5.9 6.1 13.5 5.9 9.9
壁 竺 ! :
音量 5.4 ” 6.5 9.0 4.1 4 0 5.4
氨基酸 ro Pro
音量
维普资讯 http://www.cqvip.com
12 精 细 化 工 FINECt~ CALS 1999年 总第 16卷
红外吸收光谱采用 KBr压片,用 SHIMADZU
FTIR一8201PC红外光谱仪测定。藻蓝蛋白的红外
光谱如图 3所示 。
图3 藻蓝蛋白的红外光谱
藻蓝蛋白分别在 3200、1650、1550、1100、1050和
650em 处有特征吸收峰。红外光谱为藻蓝蛋白的
鉴定提供更丰富的依据。
2.2 螺旋藻糖蛋白
螺旋藻糖蛋白SDS—PAGE电泳图谱如图4所
示。显示为一条带,表明所得的螺旋藻糖蛋白为单
一 纯度,根据蛋白质分子量标准曲线可知该糖蛋白
的分子量为 130kd。
标准分子量蛋白质
~ n(67 000)
o.山邮血(43 000)
a1 - ‘" 咽m( 30D)
所示。红外光谱显示出典型的多糖特征吸收谱图.
螺旋藻糖蛋白分别在 3411、2941、1650、1540、1255、
1028、871和846cm 有特征吸收峰。其中3411cm
为伊一H伸缩振动区.2941cmI1为 c—H伸缩振动
区.1650cm 为酰胺羰基。红外光谱在 M6cm 有吸
收峰,在 890em 附近投有吸收峰,这表明多糖是以
n.型糖苷键相连 。
渡数,c血。‘
图5 螺旋藻糖蛋白红外光谱图
3 绪论
采用凝胶过滤和羟基磷灰石柱层析.从国内人
工养殖的钝顶螺旋藻中分离得到藻蓝蛋白和别藻蓝
蛋白.其吸收光谱与文献报道一致。本方法获得的
藻蓝蛋白为电泳纯.其等电点为 4.3。得到一种螺
旋藻糖蛋白不同于现有文献报道的多糖。采用抽
提、环流泡沫分离去除蛋白质和凝胶层析技术获得
的糖蛋 白分子量为 130kd,糖部分的质量分数为
69%,红外吸收谱 图表明这种多糖含有 n.型糖苷
键。
图4 螺旋藻糖蛋白SDS—PAGE图谱 参 考 文 献
分析螺旋藻糖蛋白中糖链占糖蛋白的质量分
数,凋量结果表明含糖 69%.糖蛋白肽链部分的氨
基酸检测分析结果如表 2所示。
表2 氨基酸组成及占残基中的质量分数,%
氨 酸 aIl Gly Ⅱe h^
吉量 13.96 I2.79 10.46 9.8B B.I4 5.肛 5.81 5.81 5.札
劓 馘 雎 鼬 Trp
吉量 5.23 5.23 4 3.帮 2 9I ⋯ ⋯
对螺旋藻糖蛋白的红外光谱进行检测,如图5
[1] 嘶o C.[J]_№ 曲“- :lRvviv~.1983,47:551.
[2] sd 】L,Sb]d~G.[】].Proc^ m AadOral Pathd.1986.40
∞ . 。
[3] 左绍远.[J].中国生化药物杂志.1995.16(6):255.
[4] 韩宝江.庞启探.阮缝红.【】].植物学报,1992.34(10):蝴 .
[5] 庞启耀.韩宝江,阮继红.[】].生物化学与生曲暂理学报.1989
20(5):445.
[6] G gW.嘶 Y z.[J].0lh坤晴 皿 0f0Hni曲 ,N96,4(3)
279.
[7] LiuzH,vt .[J]. ∞ m6∞.1997.6(6):353.
[8】 &:gI Hw,K,血 J H.H哪丑础 0f P.yol l Method[M]
c b -(hive~ P .1978.72.
[9] 林红卫,等.[J].精细化工.1998,15(1):18.
∞ ∞ O
, 葶
维普资讯 http://www.cqvip.com
第2期 赵景联,等:固体超强酸 zr02一SO, 一催化合成核黄素四己酸酯 13
[10] 舡 dd H [n Adv Cm4xlaydr Chem.1964,19:31
啦稿日期:1998—07—12
作者简介 :殷钢(1975 ).男,1996年毕业于清华大学化
学工程系,现为清华大学化工系博士研究生。
Isolation and Characterization of Biliproteins and Polysaccharides
from 砌
YIN Gang,LI Chen,HE QiI1g—hua,LIU Zheng.YUAN Nai-ju,DING Fu—xin
(n ,拥 ofChem/cdD 肭 ,乃 Un/vers/ty,岛 100084,China)
Alaaa'aet:A new separation scheme was developed for recover'and isolation of billprotems and polysaccharides from
mdina culturedin southern China.Isolation of bilipro~insw衄aecoraplished with gdfiltration on Sephac~'l 200and
chmmatography∞ hydroxylapafite.The isoelectric point,amino acid composition and pec of c—ohycocyanin were
detem,2ned respectively.A 130kd glycoprotein from sp purified by foam separation in a loop bubble c0lumn
and chromatography∞ Sephad~ G 200.The h~ eneity ofthis glycoproteinWaS proven by SDS—PAGE.m mqalysis
of this glyeoprotein showed the typical~soipfion of polysaccharide and indicated the existence of口一glycoside linkage
KeywDr‘k: ru//na; phycocyanlrt;glyeopmtein;charaeterlzation
PaperNo:1003—5214(1999)02—0010—13
Foundati~ ilena:Grantedby themajor reseach projeet of StateNmth Five-year Plan(96C一03—04—05)
I /
固体超强酸 ZrO2一SO42一催化合成
核黄素 四乙酸酯’
.越 堑盘吐
(西安交通大学化学工程学院精细化工系,陕西 西安 71OO49)
6 、2,
摘要:对固体超强酸 z 一SO4 一催化台成核黄素四己酸酯进行了研究。核黄素与己酸酐摩尔
比1:40,催化荆用量为反应物总质量的 8.0%,反应温度 舯℃,反应时间 2.5h,核黄素四zl酸酯
产率可达 76.9%。z 一SO, 一催化活性高于 n02一SO4 和 F 一 卜 ,zr02在 1mol/L
S04中浸渍 24h,∞D 焙烧 3h催化活性最高。 {
关键词:整重塞四互醴髓i星堡桓翌墼;毽± 何 2 。
中圈分类号:T 66.2 文献标识码:A 文章编号:1003—52l4(1999)02—0013—16
核黄素四乙酸酯是一种油溶性维生素 岛 衍生
物,其药效迅速、持久,在相同服用量下,体内有效浓
度可从维生素 B2的4—6h延长至60~90d,被称之
为长效维生索 Ⅲ。它的合成方法是采用硫酸作
催化剂.在毗啶介质中由乙酰氯和核黄素反应制
· 基金项 目:西安交通大学理科基础研究基金资助项 目(9707)
备 。其缺点是产品质量差,设备腐蚀严重,后处理
复杂,污染环境等。本文报道的是利用 z 一so, 一
固体超强酸催化核黄素和乙酸酐合成核黄素四乙酸
酯的研究。作者在考察M 0 型固体超强酸的催化
活性及制备条件基础上,重点研究了z 一SO, 一催
维普资讯 http://www.cqvip.com
本文档为【螺旋藻中藻胆蛋白和多糖的分离纯化及产品特性】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑,
图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。