蛋清溶菌酶提取工艺研究
动物科学 《现代农业科技)2008年第 6期
蛋清溶茵酶提取工艺研究
史小利 李宗谦 徐淑霞 张世敏
(河南农业大学生命科学学院,河南郑州450002)
摘要 从新鲜鸡蛋的蛋清中提取溶茵酶 ,通过控制温度、调酸和加 盐,使溶 茵酶得到分 离和纯化 ,最后采用 自然干燥的方法制成产品。
关键词 溶茵酶 :蛋清;提取
中图分类号 06—332 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2008)06-0166-01
溶菌酶是一种专门作 用于微生物细胞壁 的水解酶 ,又
称细胞壁溶解酶【i1.它作用于 N...
动物科学 《现代农业科技)2008年第 6期
蛋清溶茵酶提取工艺研究
史小利 李宗谦 徐淑霞 张世敏
(河南农业大学生命科学学院,河南郑州450002)
摘要 从新鲜鸡蛋的蛋清中提取溶茵酶 ,通过控制温度、调酸和加 盐,使溶 茵酶得到分 离和纯化 ,最后采用 自然干燥的方法制成产品。
关键词 溶茵酶 :蛋清;提取
中图分类号 06—332 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2008)06-0166-01
溶菌酶是一种专门作 用于微生物细胞壁 的水解酶 ,又
称细胞壁溶解酶【i1.它作用于 N一乙酰氨基葡萄糖胺和 N一
乙酰胞壁酸之间的 13-1,4糖苷键吲,能使某些细菌细胞壁中
粘多糖成分分解 ,因而具有溶菌能力 。溶菌酶具有破坏细菌
细胞壁结构的功能.处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体。
因此 ,溶菌酶是基 因工程 、细胞工程中细胞融合操作必不可
少的工具酶 .同时也是食品工业的防腐剂。因此 ,开发溶菌
酶具有 良好的经济价值 。本文就蛋清溶菌酶 的生产工艺进
行了研究,现将有关结果
如下。
1 材料与方法
1.1 原料与试剂
鲜鸡蛋(市售)、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸铵、氢氧
化钠、盐酸 、氯化钠 、丙酮 、724型阳离子交换树脂等 ,以上药
品均为分析纯 。
1.2 主要仪 器
分光光度计(7230G型 )、搅拌器 (200~300rpm)、离心机
(4 O00rpm)。
1.3 菌种
藤黄微球菌(Micrococcus luteus),由本室保存。
1.4 培养基
1.4.1 液体培养基。牛肉膏 0.5g,葡萄糖 0.1g,氯化钠0.5g,
蛋 白胨 1g,溶 于 1L水 中 ,分 装 于 三 角瓶 中 ,121℃灭菌
15min。
1.4.2 固体培养基。牛肉膏 5g,葡萄糖 1g,蛋 白胨 10g,琼脂
20g,置于 1L水 中 ,加热溶解 ,分装于三角瓶 中,121℃灭菌
15min。
1.5 酶活力测定方法圈
1.5.1 底物的制备。将微球 菌接种于液体培养基 扩大培养
(28~(2,24h),再接种于固体培养基培养(28~(2,48h),用无菌
水将菌体洗涤 ,4 O00rpm 离心 10min,弃上清 ,再洗菌体数
次 ,最后用少量无菌水 制成悬液 ,冷冻干燥即得干菌粉。取
干菌粉 5g,加入少量 0.1mol/L的 pH6.2磷酸缓冲液置于匀
浆器或研钵中研磨 2min,倾出并稀释至 20~25mL,悬液的光
密度 OD4so在 0.5~0.7范围为宜。
1.5.2 酶液的制备。准确称取干溶菌酶粉 5rag.用 0.1mol/L
的 pH6.2磷酸缓冲液溶解成 0.05mol/L酶液。
1.5.3 酶活力测定。将酶液与底物悬液分别置于 25~(2水浴
中保温 10~15min,测底物悬液的 OD 值 ,作为对照。然后
加入酶液 0.2mL(约 10 g酶蛋白)迅速摇匀。从加酶时开始
记时,每 30s测 1次 OD4so值,共测3次。
1.5.4 酶活力的计算。以每毫克溶菌酶每分钟使吸光度降
低 0.001个单位为 1个酶活力单位。
溶菌酶活力=AOD (0.001 xW)(U/mg)
式中.AOD~o为 450nm处每分钟吸光度的变化 ;w 为
加入的酶量(mg)。
2 提取工艺
2.1 提取工艺步骤
提取工艺步骤见图 1 。
厂+l竺查} 厂叫鲨 墨圭 l 厂_'1 1塑堕 墨兰竺 2 l
上 耍互卜 匝 互巫圆 圆 —回 L 一圜
一 圭 圭 } 厂叫圭 圭 I
上 一圈 一 圆 上 一圈 一
图 1 蛋清溶茵酶提取工艺步骤
2.2 操作要点
2.2.1 蛋黄与蛋清的分离 。取新鲜的鸡 蛋 ,去壳 ,经分离器
后.使蛋清与蛋黄分离。打破蛋壳时应避免蛋黄破散,使两
基金项目 河南省自然基金项 目(0411033900)。
作者简介 史小利(1981一),在读研究生,从事生物技术研究。
通讯作 者
收稿日期 2008-01—28
】66
者完全分离。
2.2.2 蛋清的预处理。将分离后的蛋清加入到搅拌器 中,
200~300rpm下搅拌 10min,再将蛋清搅拌稠度均匀即可 ,以
不弓I起发泡为宜。最后用 2~3层纱布过滤 ,以除去残余蛋壳
和少量蛋黄。
2.2.3 吸附。将过滤后的蛋清冷至5℃后移入搪瓷捅中,然
(下转第 168页)
维普资讯 http://www.cqvip.com
动物科学 《现代农业科技)2008年第 6期
107~10。个/g,臭味强度 4~5级(较强一强)。经过无害化菌剂
生物发酵处理 ,所得到的生物有机肥 ,经测定 ,蛔虫卵 为 0。
死亡率 100%,大肠杆菌值分别为 1O 个/g和 1O 个/g,臭气
强度 为 0,均达到国家标 准规定的指标 ,形成无害无臭 的优
质生物有机肥。
4 生物有机肥和有机无机复混肥在小麦上应用效果
将生产的生物有机肥和有机无机复混肥在河南西平县
郊区的两处进行 应用试验 ,对照用三元复合肥(25%)。肥料
均作为基肥施用。两处分别在 2002年 9月 22日和 1O月 18
1 畜禽粪便发酵前后组成成分
日播种,小麦品种分别用太空 4号和 9023。播种量 150kg/b.m2;
2003年初调查、收获 。结果如表 2。
表 2 生物有机肥在小麦上应用效果
由表 2可知 ,小麦施 用生物有机肥和有机 无机 复混肥
分别与对照(三元复合肥)比较,小麦的每穗粒数、干粒重和
产量均有显著 的效果 ,小麦分别增产 1 755kg/hm2和 870
kg/'hm2,增产率分别为27.8%和 18.7%,而且使土壤变得明显
松软。
5 小结
应用无害化活菌制剂处理畜禽粪便 ,在 多种 有益微生
物作用下进行生物发酵,能充分分解其中的有机质。释放出
养分 ,所形成 的生物热和高温发酵过程 ,能杀死病菌 、虫卯 ,
除毒去臭 ,净化环境 ,生产形成高效优质生物有机肥和有机
(上接第 166页)
后在搅拌下加入已处理好的树脂(14%加入),使其悬浮在蛋
清中 ,在 0~5~C下 ,搅拌吸附 5h,然后在 0~5~C静置 20h以
上,等分层后 ,弃去上清液后的树脂用清水反复冲洗 2~3次 ,
以除去杂蛋白,最后晾干树脂 ,移入一个搪瓷缸中。
2.2.4 酶的洗脱 。在上述树脂中加入同体积 的 0.15mol/L的
pH6.5磷酸盐缓冲液 ,搅拌洗脱 20rain,过滤洗脱液 .除去一
部分杂质。再重复洗脱2次。将除去杂质的树脂加入等量浓
度为 10%的硫酸铵溶液,搅拌洗脱30rain,滤出洗脱液,重复
洗脱 3次 ,滤出的洗脱液一起倒入沉淀缸中沉淀 。
2.2.5 沉淀 。在沉淀缸 中按洗 脱液的体积加入 32%固体 硫
酸铵 ,搅拌使其溶解 ,在 4~C放置过夜 。第 2天 ,用虹吸法取
出上清,4 000rpm离心 10rain分离沉淀物。
2.2.6 透析。将沉淀物用蒸馏水全部溶解 ,然后放入透析袋
中,在 10~C水中透析过夜 ,以除去沉淀中的硫酸铵 。收集透
析液。
2.2.7 盐析。将透析液移入一容器内,用0.1mol/L的NaOH
调溶液 pH 至 8.5~9.0,有 白色沉淀时 ,应立即离心除去沉
淀。用 2mol/LHC1调 pH至 3.5,搅拌 ,并在 0~C放置 48h,同
上离心收集沉淀物。
2.2.8 成品的干燥。将上述沉淀物加入到丙酮,搅拌。放置
2h,收集沉淀 ,用冷冻干燥法干燥沉淀即得产 品。干燥 的溶
菌酶可在室温下长期保存。其纯品为白色或微黄色的结晶
168
无机复混肥 ,形成产业化。
发酵后 的生物有机肥具有改土作 用,有利于提高作物
产量和品质 ,适用于无公害农产品和绿色食品生产。在小麦
应用试验中 ,施用生物有机肥和有机无机复混肥比施 用纯
无机态三元复合肥 ,小麦穗粒 、干粒重和产量增加 ,效果显
著。
6 参考
⋯1李远.我国规模养殖业存在的环境问
与防治对策U].上海环境科
学 .2002(10):597-999.
[2j2张克强.畜禽养殖业污染物处理与处置[M】.北京:化学出版社,2003.
[3j3刘更另.中国肥科学[M】.北京:农业出版社 ,1991.
体或粉末 ,无臭 ,味甜 ,易溶于水 ,不溶于丙酮 、乙醚 等有机
溶剂。
3 小结与讨论
关于酶 的纯化上 ,蛋清中溶菌酶的等 电点在 pill0.8左
右 ,在偏酸性和偏碱性溶液 中,其稳定性都比较好 ,蛋清中
其他 蛋白杂质的等电点约在 pH4.6~5.0左右 ,适量酸的添加
既不会破坏溶菌酶 ,又便于蛋 白杂质的沉淀 ,使溶菌酶得到
分离纯化同。
对于酶活力的高低,温度对其影响比较大 ,温度低时产
品纯度低,导致酶活力降低;而温度过高时,可导致酶蛋白
发生不可逆变性 ,同样造成酶活力下降。所以温度控制要适
当。除此之外,酶活力还与酶的纯度相关。因此 ,可在透折后
用超滤工艺使酶液得到浓缩 ,从而提高酶 的比活力,同时又
可除去大部分蛋 白杂质胸。
4 参考文献
⋯ 戴清源.溶菌酶的研究进展U].山东食品发酵,2oo5(3):23—25.
[2j2林翠花.溶菌酶结构特点及其应用U】.潍坊学院学报 ,2005,2(5):
108-110.
[3j3刘源岗,邓倩莹,廖问陶.溶菌酶的活性测定UJ.食品科技,2005(1o):
71-73.
林 亲录 ,马美湖.鸡蛋卵清中溶菌酶 的提取与纯化U】.食品科学 ,
2002,2(23):43—46
[5】张金城,高以炬,叶凌碧.超过滤技术在酶制剂工业中的应用U].食品
与发酵工业 。~989(5):62-69.
[6j6张灏,赵玉萍 ,杨严俊.超滤法提取蛋清溶菌酶卟 无锡轻工大学学
报 ,2002,6(21):607—612.
维普资讯 http://www.cqvip.com
本文档为【蛋清溶菌酶提取工艺研究】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑,
图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。