75乙醇、0.1新洁尔灭消毒效果验证方案

75乙醇、0.1新洁尔灭消毒效果验证 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 75%乙醇、0.1%新洁尔灭 消毒效果验证方案 验证编号:QC-VAL-535-01 苏州万庆药业有限公司 2010年11月 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 验证方案确定 报告确定 部 门 姓 名 签 名 日 期 起 草 QC 复 核 QC QC 审 核 QA Quality Director 批 准 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 目 录 1. 验证方案介绍、目的、范围、相关文件??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1 2. 验证准备. ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1 3. 验证内容???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3 4. 变更与偏差 ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 5. 验证结论 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????8 6. 附件???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????8 7. 参考文献 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????8 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 1. 验证方案简介、目的、范围、相关文件 1.1验证方案简介: 本验证共分三部分: 1.1.1 第一部分是对验证方案的介绍，包括验证目的、范围以及相关验证、文件的介绍。 1.1.2 第二部分是验证的相关内容: 75%乙醇及0.1%新洁尔灭的喷洒消毒效果试验。验证在微生 物实验室阳性菌对照室完成。 1.1.3 第三部分是验证结论及再验证。 1.2 目的 通过喷洒消毒的方法验证75%乙醇及0.1%新洁尔灭在实验室条件下对各种载体上已知菌的消毒效 果，为其正确使用提供保障。 1.3 范围 本验证方案适用于本公司微生物实验室及其他洁净环境需要外面清洁消毒的物料。 1.4 验证相关文件 序 号 文件名称 文件号 执行日期 微生物实验室管理规程 QC546-01 1 2007-11-26 菌种菌液的制备、储存、使用操作规程 QC505-01 2 2007-11-26 洁净区空气洁净度监测操作‎‎规程 QC510-04 3 2010-11-01 培养基缓冲液配及无菌包装棉拭子管理规‎‎程 QC506-02 4 2010-11-06 5 微生物实验室洁净区清洁消毒规程 QC548-01 2007-12-28 2. 验证准备 2.1试验仪器和设备 设备 型号 编号 校验有效期至 生化培养箱(30~35?) 霉菌培养箱(20~25?) 精密移液器 生物安全柜 高压蒸汽灭菌柜 第 1 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 2.2 试验用品 试验用品 批号 来源 有效期至 无菌塑料吸头(1.0 ml) 无菌空平皿(90 mm) 大豆胰蛋白琼脂(TSA) 大豆胰蛋白肉汤(TSB) 萨布罗琼脂(SDA) 萨布罗肉汤(SDB) TSA培养皿 表面接触性培养皿 pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 含0.05%聚山梨酯80的pH7.0 氯化钠蛋白胨缓冲液 2.3 菌种及菌液 菌种名称 菌种代号 菌种批号 菌液批号 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus‎‎) 大肠埃希菌 (Escherichia coli) 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtil‎‎is) 白色念珠菌 (Candida albicans) 黑曲霉 (Aspergillus niger) 人表皮葡萄球 (Staphylococo‎‎ccus hominis) 第 2 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 2.4 消毒剂 名称 来源 原始批号 有效期至 配制浓度 配制批号 自制消毒剂效期 75%乙醇 0.1%新洁尔灭 2.5载体 软塑料(自封袋、取样袋)，硬质塑料(桶、校验仪器外壳、喷壶、计算器、写字板)，不锈钢(桶、 盒、器具)，纸张(标示卡)，玻璃(玻璃瓶)，洁净服面料(布袋)，橡胶(橡胶手套)，铝合金。 3. 验证内容 3.1菌液制备: 3.1.1将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌接种至大豆胰蛋白肉汤培养基(TSB)中，在30, 35?培养18,24小时;枯草芽孢杆菌划线接种至大豆胰蛋白琼脂培养基(TSA)上，在30,35? 培养18,24小时后洗脱琼脂表面菌苔;白色念珠菌接种于萨布罗葡萄糖肉汤培养基(SDB)中， 在20,25?培养48,72小时;黑曲霉菌划线接种至萨布罗葡萄糖琼脂培养基(SDA)上，在20, 25?培养5,7天，洗脱琼脂表面孢子;吸取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯 草芽孢杆菌增菌后的培养物各1ml加入到9ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，充分混匀后作 -1-7稀释级计数-2稀释级作为为10稀释级，依次10倍稀释至10确认菌数，同时预留10菌片制备使用;吸取 白色念珠菌增菌后的培养物及黑曲霉孢子液各1ml加入到9ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中， -1-5稀释级计数充分混匀后作为10稀释级，依次10倍稀释至10确认菌数，同时预留浓菌液作为菌片制 备使用。 3.1.2菌液计数:吸取1ml上述菌液置无菌空平皿中，倾倒温度不超过45?的TSA或SDA培养基，平 行倾到2个平板，细菌用TSA培养基在30-35?培养72h 后观察最终结果，真菌用SDA培养基在 20-25?培养5天后观察最终结果。 第 3 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 3.1.3菌液计数结果: 试验菌 稀释级 计数结果cfu/皿 平均值 浓菌液菌数cfu/ml 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 3.2菌片的制备: 3.2.1试验中使用的菌片是以菌悬液滴加于载体上制成。载体是根据消毒对象选择常用材质如软塑料 (自封袋、取样袋)，硬质塑料(桶、校验仪器外壳、喷壶、计算器、写字板)，不锈钢(桶、 盒、器具)，纸张(标示卡)，玻璃(玻璃瓶)，洁净服面料(布袋)，橡胶(橡胶手套)，铝合金， 规格均为5×5cm; 3.2.2所用载体于染菌前，应进行脱脂处理。脱脂方法如下:?将载体放在含肥皂的水中煮沸30 min; ?而后以自来水洗净;?用纯化水煮沸10 min;?用纯化水漂洗;?晾干备用。 3.2.3载体经压力蒸汽灭菌(耐湿热灭菌载体)或用75%乙醇浸泡消毒后晾干(不耐湿热灭菌载体)， 统一使用滴染法:将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内，逐片滴加菌液。菌液滴加量每片为 -20.1ml，细菌选择10稀释级，真菌选择原菌液。用精密移液器接无菌吸头，滴染菌液，并用接 种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后置室温下自然阴干后再使用。每种菌对应的一种载体制备 4片。 3-4注:菌片含菌量应为5×10cfu/片。 3.3菌片菌数确定: 3.3.1取一片已制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、人表皮葡萄 球菌菌片，完全浸泡于100ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液作 -2-3为10稀释级，然后吸取1ml荡洗液加入到9ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀作为10 -5稀释级，同法再进行10倍至10稀释级，吸取1ml置无菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45? 的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25?培养3 天，再置于30-35?培养2天， 观察最终结果;取一片已制备好的白色念珠菌菌片，完全浸泡于100ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓 -2冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液作为稀释级，然后吸取101ml荡洗液加入到9ml pH7.0 -3-4氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀作为10稀释级，同法再进行10倍至10稀释级，吸取1ml置无 第 4 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45?的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25?培养3 天，再置于30-35?培养2天，观察最终结果;取一片已制备好的黑曲霉菌片，完全浸泡于100ml 含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液 -2作为10稀释级，然后吸取1ml荡洗液加入到9ml 含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠蛋白胨 -3缓冲液中，充分混匀后作为10稀释级，吸取1ml置无菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45?的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25?培养3天，再置于30-35?培养2天，观察最终结果。 3.3.2菌片菌数确定结果: 试验菌 金黄色 大肠埃铜绿假枯草芽白色念表皮葡葡萄球黑曲霉 希菌 单胞菌 孢杆菌 株菌 萄球菌 菌 载体 结果 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 软塑料 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 硬质塑An:10 料 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 不锈钢 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 纸张 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 玻璃 平均 菌片菌数 第 5 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 试验菌 金黄色 大肠埃铜绿假枯草芽白色念表皮葡葡萄球黑曲霉 希菌 单胞菌 孢杆菌 株菌 萄球菌 菌 载体 结果 -5细菌10 -4Ca:10 -3 洁净服An:10 面料 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 橡胶 平均 菌片菌数 -5细菌10 -4Ca:10 -3 An:10 铝合金 平均 菌片菌数 3.3.3合格:回收菌片的含菌量应应不小于105cfu/片。 3.4载体喷洒消毒杀菌效力试验: 3.4.1选择常用于喷洒消毒的物料材质进行试验。 3.4.2每种菌所染菌片应分开进行试验，试验时，每种载体菌片各取 1片，每次喷雾量于实际试验操作 要求一致且距离和压力保持相同，使喷到物料载体上的雾粒大小和数量一致。 3.4.3待喷洒载体表面充分挥发至干。 3.4.4按照QC510-04洁净区表面的微生物监测程序对平整光滑的表面进行接触碟取样。 3.4.5接触碟取样:取样时打开碟盖，使无菌培养基表面与取样表面直接接触，均匀按压接触碟底 板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖，做好标记;接触碟先 在20,25?培养箱培养 3天，然后在 30,35?培养箱培养 2天，观察最终结果。 3.4.6 试验重复3 次 ，计数各组的活菌量(cfu/片)，计算杀灭对数值。(结果保留到小数点后两位) 杀灭对数值,试验前菌片活菌浓度的对数值,试验后菌片活菌浓度的对数值 3.4.7合格标准:要求各次试验的杀灭对数值均?3，可判定消毒合格。 3.4.8载体擦拭消毒杀菌效力试验结果:(载体:软塑料，硬质塑料，不锈钢，纸张，玻璃，洁净服面 料，橡胶，铝合金。) 第 6 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 结果 载体 消毒剂批号 结果 杀灭对阴性 结论 试验菌 cfu/皿 数值 对照 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus‎‎ 大肠埃希菌 Escherichia coli 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtil‎‎is 白色念珠菌 Candida albicans 黑曲霉 Aspergillus niger 表皮葡萄球菌 Staphylocococcus homini s 4.变更与偏差 4.1在执行验证过程中，检测人员需要及时出现的任何偏差，并按照相关操作规程处理。 4.2本验证方案批准实施之后，任何的变更需要按照相关操作规定，由申请人提出书面申请，交由验证 小组审核，批准之后，方能执行变更。 第 7 页 共 8 页 苏州万庆药业有限公司 QC-VAL-535-01 5. 验证结论 5.1验证完成之后，汇总所有检测数据，进行统计分析。由验证部门起‎‎草验证报告，总结验证结论，并 交由相关部门审核，批准。 5.2当检测数据满足下列规定时，方可认为验证合格: 5.3统计数据表明所有的检测数据均在规定的范围内; 5.4如果检测数据不符合规定标准，经偏差调查发现是由与验证人员无关的因素造成的，并经审核批准。 6.附件 6.1原始记录1菌液制备; 6.2原始记录2载体制备; 6.3原始记录3载体菌片制备; 6.4原始记录4载体喷洒消毒杀菌效力试验; 6.5原始记录5消毒剂配制; 7.参考文献: 7.1中华人民共和国国家标准，消毒与灭菌效果的评价方法与标准; Evaluating method and standard for the efficacy of disinfection and sterilization; GB 15981一1995 7.2消毒技术规范;Technical Standard For disinfection;中华人民共和国卫生部(2002 年版); 2002.11. 第 8 页 共 8 页