miR_137对U87胶质瘤细胞中EZH2表达和细胞增殖的影响

书操作’,&%&’ 2X!0P2 检测 hAQ% (2M5 及 (<2!,#3 表 达! U$3 胶质瘤细胞转染 GII#&3!,#3 或 GII#&3 空 载体 "对照组& 3% B 后$以 ’1或 ,$1 K2M5为内参$2X!0P2 法检测 !"%$ 基因的表达水平’!"%$ 基 因的引物序列!上游!’m!b5PXP5b55bbP5bXbb5bP!#m$下游 !’m!b5PXP5b55bbP5bXbb5bP!#m’采用 1B9KY9L a‘;&,!> M‘&$> 5?)?NL %-> %-,, #!#) ) 毛 毛 GII#&3! ,#3 图 ! (<2!,%!!(<2!,#3!(<2!,#$与靶基因 !"#$ #m!UX2 的结合位点 (<2M5 芯片数据"从而筛选在胶质瘤中低表达的(<2M5"包括 (<2!%!9"(<2!%!Y"(<2!,-!Y"(<2!,%!"(<2!,#3"(<2!,#$"(<2!,$’"(<2!,449!#G 和(<2!%--Y"并预测其靶向于 !"%$ 基因#双荧光素 酶报告基因检测表明$相比对照组"(<2!,%!%(<2!,#3和 (<2!,#$都靶向 !"%$ 基因的 #m!UX2"使荧 光素酶表达水平降低"其中 (<2!,#3 抑制作用最 强"抑制效率为 &"’&!4 ! ’&$"’."显著低于对照组&& !-&-,’#因此"本组选取 (<2!,#3"进一步研究 其在胶质瘤中所起的作用#%&% (<2!,#3 对 ’"%$ 基因表达的调控 为进一 步确认 (<2!,#3 对 !"%$ 基因表达的调控"在胶质 瘤细胞 U$3 中转染含 (<2!,#3 前体的载体"2X!0P2 检测表明$(<2!,#3 表达水平上升 &图#5’# 然后"检测 (<2!,#3 过表达对 hAQ% (2M5和蛋 白水平的影响#2X!0P2 实验及 8ENLEK: YICL 结果 表明$过表达 (<2!,#3 能够抑制 hAQ% (2M5 &图#e’ 和蛋白 &图 #P’ 的表达水平#以上结果表明"!"%$ 是 (<2!,#3 作用的靶基因"(<2!,#3 可抑制 !"%$基因表达#%&# (<2!,#3 对胶质瘤增殖的影响 &图 "’ 为了 研究 (<2!,#3 对胶质瘤的影响"在胶质瘤细胞 U$3 中过表达 (<2!,#3"通过 TXX 法检测发现$(<2!,#3 能够抑制胶质瘤细胞系 U$3 的增殖"抑制率达&,3&%3 ! %&4-’. &&"-&--,’#同时过表达 (<2!,#3 和 hAQ%"实验结果表明$通过下调 !"%$ 基因表达 而抑制胶质瘤细胞增殖 "hAQ% 过表达可以拮抗(<2!,#3对胶质瘤细胞增殖的抑制作用# # 讨 论 近年来发现$(<2!,#3 在多种肿瘤中低表达" 并且能够抑制细胞增殖"影响细胞周期进程"揭示(<2!,#3 是一个抑癌基因#本组研究结果表明$胶 质瘤细胞中 (<2!,#3 能够抑制细胞增殖"并且可抑 制 !"%$ 基因表达#!"%$ 是果蝇 ()*+) 基因增强子 的同源基因"是 &,- 基因家族的重要成员之一"其 与细胞生长调节有关"对细胞增殖是必需的"也能 增强原代细胞的生长能力c%d#在包括前列腺癌c#!"d%乳 腺癌c’!!d%膀胱癌c3d等多种肿瘤组织中"hAQ% 表达升 高"其表达量与肿瘤形成和生长及临床预后密切相 关#eE( a‘;&,!> M‘&$> 5?)?NL %-> %-,,#!") ) 毛 毛 毛 毛 胞癌中有些 (<2M5 表达下降!其中 (<2!,#3 表达 与其启动子甲基化状态呈负相关!而甲基化抑制剂’!5[9!PS2 可诱导其表达上调"周期素依赖激酶 !#!"#$$ 为 (<2!,#3 的靶基因!肿瘤细胞可通过JM5甲基化抑制 (<2!,#3 表达!上调 PJ/! 表达! 从而促进肿瘤自身进展 c4d%从软件预测的结合位点 碱基配对情况 &图 %$ 可以看出!(<2!,#3’种子区 域(,"3 位与 %&’( #m!UX2 完全互补配对!剩下区 域中配对碱基较多!且配对后形成环区只有 % 个! 较 (<2!,%! 和 (<2!,#$ 少!有利于稳定作用形成% 因此!作者推测 (<2!,#3 可能通过作用于 %&’( 基 因 #m!UX2 而抑制该基因表达!而过表达 %&’( 能 够抵消 (<2!,#3 对胶质瘤细胞增殖的抑制作用!也 支持以上推测%最新研究报道也发现)在成年鼠神 经干细胞中 (<2!,#3 直接作用于 hAQ%!调节神经 生成c,-d% 总之!本实验结果表明)(<2!,#3作为一个抑癌 基因!能够抑制 hAQ% 表达!从而抑制肿瘤增殖!因 此!(<2!,#3可作为胶质瘤未来治疗的候选靶标% *参 考 文 献!c,d 1B9KY9L<7XEBK9:< 1> /?L [7;CBKCHH e> eEK)Y9?EK 2> )* +,&(<27lg 9 :CVEI j?9:L %--$> 4g #"&c%d X9:) 6> T 1B9LN _> )* +,& 5RL %--"> %#\#"]g ’3’47’3!4& c#d a9K9(Y9IIO 1> P9C l> T9:< 21> )* +,& bE:C( %--$> #%% \’4-$]g,!4’7,!44&c"d a9K9(Y9IIO 1> JB9:9NE+9K9: 1T> ABC? T> )* +,& XBEGCIORC(Y )KC?G GKCLE<: hAQ% %--%> ",4\!4-3]g !%"7!%4&c’d 1B< e> ;<9:) @> D9:) 6> )* +,& _:LE)K9L %--3> %3\,"]g ’,-’7’,,4&c!d 0 QCKI<:)N QT> Q9?GL(9:: T> )* +,& hAQ%9:S eT_, <:VEKNEIO RCKKEI9LE Z %--$> ,-\!]g 2,-4&c3d 29(9: @J> TC:)9: M0> X )* +,& _:RKE9NES E=7GKENN hAQ%> <: LK9:N %--’>,,\%" 0L ,]g $’3-7$’3!&c$d eE( PBE: 2> 5(9LC PT> )* +,& T %--$> !$\’]g ,#!%7,#!$&c4d /C[9+< /> _(CLC _> TCj< 1> )* +,& h=GICK9L %--$> !$\3]g %-4"7%,-’&c,-d 1[?IZ9RB /h> ;< 6> 1(KL 2J> )* +,& PKCNN L9I+ YELZEE:( %-,-> ,$4\,]g ,%37,",& &收稿日期)%-,-!-4!-,! 修回日期"%-,,!-#!,3# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 中国微侵袭神经外科杂志 %-,,年 -$月 %-日 第 ,!卷 第 $期 PB<: @ T<:<( _:V9N a‘;&,!> M‘&$> 5?)?NL %-> %-,, 美国 "化学文摘#$"乌利希国际期刊指南% 及波兰 "哥白尼索引%正式收录本刊 美国 !化学文摘" #!-)./0+, 123*4+0*3$!1% 是世界最大的化学文摘库$也是目前世界上应用最广泛$最 为重要的化学&化工及相关学科的检索工具’!1创刊于 ,4-3年$由美国化学协会化学文摘社 #P51% 编辑出 版$为国际六大著名检索期刊之一(本刊收录号),-’$$P‘JhM)A81854 美国 !乌利希国际期刊指南" #5,4/0-63 78*)48+*/98+, :)4/9;/0+,3 "/4)0*94<$5,4/0- 7:"% 由美国著名的书目 文献出版公司 2& 2& eCZ+EK于 ,4#%年首版$是目前世界上规模最大&搜罗最全的国际期刊检索工具之一$以 收集定期期刊为主$旁及不定期期刊(!乌利希国际期刊指南"国内镜像站点)BLLGg**ZZZ&?IK !9?@48/0@3$7!% 是由 TES