天苍颗粒质量标准研究

天苍颗粒质量标准研究　　摘要】目的建立天苍颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中当归、白芷、天麻、苍术进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对方中的2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷进行含量测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(13﹕87)为流动相，检测波长为320nm。结果通过薄层色谱可鉴别出方中成分。2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定线性范围为0.1132～1.132μg;平均回收率为99.60%;RSD值为1.2%。结论定性鉴别和含量测定方法准确可行，重复性好，可有效地控制天苍颗粒的质量。　　【关键词】天苍颗粒质量标准2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷高效液相色谱法　　天苍颗粒由制何首乌、当归、白芷等药组成，具有温经散寒，除湿止痛，舒筋壮骨的功能。适用于跌打损伤、筋骨酸痛，各类关节炎、滑膜炎等各类骨病。但其质量标准并不完善，故需要深入研究。本文利用TLC法和HPLC法进行相应的标准研究，从而提高完善天苍颗粒的质量标准。　　1仪器和试药　　LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SPD-10AVP紫外检测器(日本岛津公司)，KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂);2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品(0844-200003)，当归对照药材(120927-200411)，白芷对照药材(120945-200707)，天麻对照药材(120944-200006)，天麻素对照品(110807-200205)，苍术对照药材(120970-200403)均购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他所用试剂均为分析纯。天苍颗粒样品(批号：20101101，20101102，20101103)。　　2薄层鉴别　　2.1当归:取本品5g，研细，加乙醚50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺失当归的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法[1](中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。(见图1)　　2.2天麻:取本品5g，研细，加70%甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加70%甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取天麻对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺失天麻的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法[1](中国药典2010年版一部附录VIB)试验，分别吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液10μl，对照药材及对照品溶液各5μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水(9：1：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，有相同颜色斑点，阴性对照无干扰。(见图2)　　3含量测定　　3.1色谱条件：色谱柱AgilentODSCl8(5m，150mm×4.6mm);以乙腈-水(13﹕87)为流动相，检测波长为320nm，柱温35℃，流速1.0ml/min，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。　　3.2样品的制备　　3.2.1对照品溶液的制备：取2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。　　3.2.2供试品溶液的制备：取装量差异下的本品内容物，混匀，取适量，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称重，超声处理(功率250W，频率30KHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜(0.45μm)滤过，虑液置棕色瓶中备用。　　3.2.3阴性对照溶液的制备取处方除何首乌的全部药味，按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。　　3.3系统适用性实验　　3.3.1专属性实验：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件检测，在待测成分保留时间处，阴性对照无其他成分干扰，结果明，测定方法专属性强，无干扰，结果见图4。　　3.3.2线性关系考察：分别精密吸取对照品1、2、4、6、8、10μL溶液，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.1132～1.132μg范围内，呈良好的线性关系。　　3.3.3精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样，连续测定6次，峰面积，RSD值2.13%，表明精密度良好，符合含量测定要求。　　3.3.4稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后0，2，6，12，24h后依法测定连翘苷的峰面积，结果2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积RSD为0.73%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。　　3.3.5重复性试验：取同批样品，依法平行制备6份，分别测定2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值为1.03%，结果表明供试品制备方法重复性良好，符合含量测定要求。　　3.3.6回收率试验：取已知含量的样品6份，每份约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中再分别加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，按供试品溶液的制备项下操作，结果见表1。　　表1回收率试验测定结果　　3.3.7样品测定：分别精密吸取供试品溶液与对照液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。结果见表2　　表2三批样品含量测定结果　　4讨论　　4.12，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷为何首乌的主要有效成分，参考有关文献，经研究对比，建立了2，3，5，4′-四羟基二苯乙-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定法，经方法学验证，本法重现性好、阴性对照无干扰，操作简单，便于满足工业化生产的需要，可有效控制本品的质量，为保证用药的有效性提供技术支持。