HPLC法测定双黄连颗粒中连翘苷的含量

HPLC法测定双黄连颗粒中连翘苷的含量　　双黄连颗粒是由金银花、黄芩、连翘制成的纯中药制剂，具有疏风解、清热解毒的功效。其质量标准收载于《中国药典》2005年版一部，但标准中没有连翘的含量测定，不能有效的控制药品质量。方中连翘含量最大，具有清热解毒、消肿散结的作用，其有效成分为连翘苷。为有效控制药品质量，我们试用HPLC法测定双黄连颗粒中连翘苷的含量，取得良好效果。　　1仪器与试药　　AgilentTechnologies1200Series高效液相色谱仪，AgilentTechnologiesG1314BVWD检测器,色谱工作站：LabAlliancePC　2000分析之星，连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号0821　200104);双黄连颗粒(批号20060612、20060816、20060824，哈药集团制药六厂);甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱KromasilC18(4.6×200mm，5μm)，流动相乙腈　水(25∶75)，流速1　0ml/min,检测波长277nm，柱温30℃，进样量20μl。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的连翘苷对照品5.65mg，置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。　　2.2.2样品溶液的制备：精密称取本品粉末3g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定质量，浸渍过夜，超声处理30min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减少的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g，拌匀，加置中性氧化铝柱(100～120目，2g，内径1cm)上，用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.2.3阴性对照液：取缺连翘的处方药，按样品溶液制备方法制备阴性对照液。　　2.3线性关系考察精密量取对照品储备溶液，1，2，4，6，8，10ml分别置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述方法进样20μl，依法测定，外表法计算，以峰面积Y对浓度X(μg/ml)得线性回归方程：Y=6.145×104X-2.736×102,r=0.9999。结果表明，连翘苷在0.18～1.25μg范围内线性关系良好。　　2.4精密度考察取同一对照品溶液连续进样5次，每次20μl，连翘苷峰面积均值为461740，其RSD=1.12%。　　2.5重复性试验取同批号样品5份，按供试品制备方法制备，依法测定，结果连翘苷平均含量是0　84mg/g，其RSD=1　35%。　　2.6稳定性试验取同一样品溶液在0、2、4、6、8、10、12h分别进样20μl，依法测定，结果7次测定连翘苷峰面积均值为621758，RSD=0.81%。　　2.7加样回收试验取已知含量的样品适量，精密称定，精密加入连翘苷对照品适量，按2.2.2样品溶液制备方法制备回收试验液，按2.8样品测定方法测定含量，结果见表1。表1加样回收率试验结果样品含量　　2.8样品测定取对照品溶液和样品溶液用0　45μm微孔滤膜滤过，各进样20μl，读取峰面积，按外表法计算含量，结果见表2。表2样品中连翘苷的测定结果批号　　3讨论　　用HPLC法测定连翘苷含量，试验比较了多种比例的流动相，以乙腈　水(25∶75)为优，保留时间适中。本试验采用中性氧化铝洗脱，可以除去杂质，70%乙醇可以完全洗脱连翘苷，并可以制成近无色的供试品溶液，这样有利于分离和保护色谱柱。该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于小儿感冒颗粒等的质量控制。