牛冻精一次稀释与二次稀释的实验研究

牛冻精一次稀释与二次稀释的实验研究 牛冻精一班稀释与二班稀释的实验研究一李晓东9 牛冻精一次稀释与二次稀释的实验研究S82孑. 斗 李晓东,孔宪臣玲,姜怠杰,阿淑艳 (五:吾秉吾导站,黑龙江哈尔滨150060) 关键词:精子;稀释液;生墨塑堑,牛’,藕淑蝌裤法.一《辱靠.畦踱 摘要:从正常采精的套牛群中,随机选择2,9厨岁的种公牛l4头.将套牛的原精分剐用一班稀释的配方和二次稀释 的配方稀释,冷冻,测试精子生理指标的变化情况.蛄果表明:二1支稀释冷冻的精子.硕体完整率指标高子一次稀释冷冻 的精子(P<005). 中图分类号:$823.91文献标识码:B文章编号:1004—7034I2000)02—0009一叭 目前,国内外牛玲冻精液稀释液配方种类甚多,其中大部的精液,立即将其分成二等份,放在2个大试管中,分别用一次 分配方在使用时都采取二次稀释精液的稀释法,即把甘油液做稀释法和二次稀释法稀释,稀释倍数相同.用二次稀释法时, 为第二液,加入到经第一液稀释的精液中.为探索一次稀释法先用第 一液稀释原精到总稀释量的一半;用一次稀释法直接稀 及二次稀释法对冻精质量的影响,本实验把我站生产中应用的释原精到总稀释量.把装有稀释精液的大试管放人盛有3l? 释液液配方,用一次稀释法及二次稀释法稀释精子后冷冻,进温水的杯中,一起放在4?低温柜中平衡4h.用二次释释法 行对比实验,现将实验结果如下.稀释的精液,在原精中加入第一液后2h,用第二液在等温下稀 1材料和方法释精液到总稀释量,继续平衡到4h. 1.1实验公牛l6精液的分装和冷冻 来自我站正常采精的荷斯坦公牛l4头.年龄在2,9周平衡4h的精液.用分装机吸人0.5mL塑料细管,封口. 岁,饲养管理条件一致.把塑料细管均匀摆放到冷冻用的金属架上.每个架摆放100支 1.2实验配方细管,摆有细管的金属架放人400L液氮大罐冷冻,液氮面与 采用我站生产中应用的稀释液配方,稀释液配方在使用时细管距离2cm,冷冻韧始温度为一90?,同一头牛的精液在同 用上清液.一批改冷冻.每批次冷冻600支细管,当细管的温度降至 I3供试药品厦器材一130?时冷冻结束. 药品为分析纯.卵黄从新鲜鸡蛋中取出,接触精液的器材l-7精于的解冻温度 均洗刷干净并经灭菌后使用,装精液的塑料细管由我站生产冷冻后 的精液在温水中解冻,温水的温度为38?t当细管 1.4稀释液制备中的精液完全融化时,马上从温水中拿出,分别检查用两种稀 电子天平上准确称量配方中药品的量,放人三角烧瓶中,释方法玲冻精子的活力,精子的生存时间,精子的畸形率,精子 用量倚量取蒸馏水,卵黄后加入三角烧瓶中.用二次稀释配方的顶体完整率4项生理指标.活力和生存时间的浸I定.两种稀 时,均从第一液中量取部分液体,加入甘油做为第二液.配制释法各检查3支细管.取平均值. 成的稀释液放在磁力搅拌器上搅拌10min,搅拌后的稀释液放2结果 在4?冰箱中12h,使用前把稀释液从冰箱中取出,倒出上清采集的14头公牛精液,用一次稀释配方和二次稀释配方 液,废弃沉淀物,上清液加入抗生紊.稀释冷冻,解冻后精子活力,生存时间,畸形率,顶体完整率见 1.5精液的稀释表l. 选择原精量2mI以上,活力为0.6,密度在6亿/mL上表l数据统计分析结果,二次稀释的冻后指标在数值上都 表两种稀释法冷冻后精子各项生理指标 好于一次释释的冻后结果,经方差分析:冻后活力,一次稀释与 二次稀释差异不显着(P>O05);生存时间比较,一次稀释与 二次稀释差异不显着(P>O05);畸形率,一次稀释与二次稀 释差异不显着(P>O05);顶体完整率,二次稀释与一次稀释 差异显着(P<O05). 3讨论与小结 3.1一次稀释法是把含有甘油的稀释澈直接加入到原精中, 经浸I定一次稀释法甘油液的加入使稀释后的精液渗透压升高. 收稿日期:1999—09—08 作者简舟;车晓东(1965一),男,高级盲牧师本科 此时精子刚从牛体中取出,正处于高度活跃状态,渗透压的突 然升高,使精子受到伤害,有些精子的顶体受到损伤,对冻精质 量产生不良影响. 32二次稀释法把甘油做为第二液加入到经第一液糟释的精 液中.当加入古有甘油的第二液时,这时精子的温度已降低至 5?,精子的运动很弱,基本处于休眠状态,甘油对精子的不良 影响根小,精子保持完整.又由于二次稀释是把精液逐步稀释 到稀释总量防止了精子所处生存环境的突然改变造成的稀释 打击,有利于提高冻精质量. 33根据本次实验结果,我们认为:二次稀释法能够提高冻精 质量,优于一次稀释法.建议在牛冻精生产中采用二次稀释 精液法.(oo8)