单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原
2 一
E用寄生虫病杂志 1995年第 3卷第 1
A
单克隆抗体双抗体夹心EL ISA检测
日本血吸虫病人循环抗原
. 壅 堑 李雍龙 韩家俊
同济医科大学基础医学院寄生虫学教研室 武汉 430022
.王 垄、/
武汉市生物制品研兜所
/ /
- 25·
.R 2-21b
提要 本文用抗日本血嗳虫肠相关抗原的单克隆抗体s]116和SjlO~作双夹 ~-ELISA检测粪
检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原,阳性率达93.d 。正常人假阳性率为6.7 。与肺吸虫、
华支睾吸虫、...
2 一
E用寄生虫病杂志 1995年第 3卷第 1
A
单克隆抗体双抗体夹心EL ISA检测
日本血吸虫病人循环抗原
. 壅 堑 李雍龙 韩家俊
同济医科大学基础医学院寄生虫学教研室 武汉 430022
.王 垄、/
武汉市生物制品研兜所
/ /
- 25·
.R 2-21b
提要 本文用抗日本血嗳虫肠相关抗原的单克隆抗体s]116和SjlO~作双夹 ~-ELISA检测粪
检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原,阳性率达93.d 。正常人假阳性率为6.7 。与肺吸虫、
华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分别为3.2 、O、13.3 和 13.3 。 』1
关铺 目.堂墼雠 匙
在血吸虫病诊断中,粪检已越来越难以
适应当前的形势。常见血清学方法如COI:~、
1HA、ELISA等检出的抗体,也只能作为感
染存在的间接依据,不能区别现症感染和既
往感染,因此血吸虫病的确诊和疗效考核存
在许多困难 由于寄生在人体的血吸虫成虫
能不断释放其分泌物、排泄物及更新的
膜
成分进^血流,成为循环抗原,故一般认为血
吸虫循环抗原的检测具有反映活动性感染、
估计虫负荷和考核药物疗效的优点。多年来,
一 些学者试用了各种方法来检澳I血清中的循
环抗原 ,获得一定的效果。本文采用抗日
本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体sj116作
包被抗体,SjlO~作酶标记抗体,检测循环抗
原,获得如下结果。
1
与方法
1.1 单克隆抗体的制备 用SEA按常规法
免疫BALB/e小鼠,然后取其脾细胞与小鼠
骨髓瘤细胞 Sp2/O进行融合嘲 经间接
ELISA、IFA、琼脂双扩散法筛选,最终获两
株与SEA和成虫可溶性抗原(SAA)均呈强
阳性反应的杂交瘤细胞Sill6及SjlOe,其靶
抗原定位于血吸虫肠道的衬细胞,与姜片虫、
华支睾吸虫、肺吸虫均无交叉反应,所分泌的
单克隆抗体属 IgM。
1.2 抗体配对 在双抗体交互配对中,采用
方阵滴定 单克隆抗体S]116作为包被抗体,
单克隆抗体Sjl0e作为辣根过氧化物酶标记
抗体,效果最佳
1.3 待检血清 血吸虫病人血清取自湖北
省疫区粪检阳性者,正常人血清取自非疫区
献血员,肺吸虫、华支睾吸虫 旋毛虫和囊虫
病人的血清均由本室提供 待检血清按 l;1
稀释。
1.4 双抗体夹心ELISA试验方法 单克隆
抗体Sill 6按每 L 0.1ml包被 96孔聚苯乙
烯酶标板, ℃过夜,次日洗板后,每孔先加入
单克隆抗体酶结合物Sjl0e—HRP 5om,再加
入待检血清50 1,37℃孵育1小时后洗板,再
加底物联苯二胺 0.1ml避光显色 2~10分
钟,加 2mol/L H2SO.0.OSml终止反应。于
492nm测定OD值,阳性判断标准为样品孔
OD值 ; 睦对照 LOD值≥2.1为阳性。
2 结果 见附表。
3 讨论 近年来,对血吸虫病进行免疫诊断
的方法做了多种探索,许多研究表明检测外
周血的循环抗原水平有助于明确诊断并具有
疗效考核的价值 但在实际应用中却往往出
现一些不尽人意的结果,较高的假阳性或假
阴性仍然是一个有待解决的诊断技术问
。
本文以抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗
体Sj116为包被抗体,Sjl0e为酶标记抗体,
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附表. 单克隆抗体双抗体奂 ELISA
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doub Le am~ody smdwich ELISA h mottoclonal antibodk'~
受检血清 阳性率
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false positive rate of sera from normal DI:oNe was 5.7 .Fhe rates of cross reaction with parago
nimiasis.clonorchiaMs,trichiniasis and cvstieercosis patients were 3.2 ,0,】3.3 and 1 3.3
respectively.
Key words:M onoclonal antibod y.Sch~qo.~ma ,{pu M q ,circulating antigen.EL[SA
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